梅花鹿γ 干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT PCR方法扩增出梅花鹿γ 干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI neo CerIFN γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK 21)和牛肾细胞（MDBK）中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16 ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌（B.Subtilis Natto）的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株（NY-1～NY-10）和10株产纤维素酶菌株（NS-1～NS-10）。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为（44.12±1.48） U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为（60.94±1.22） U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

霍乱毒素B亚基对胡萝卜的遗传转化

以胡萝卜无菌幼苗的下胚轴为外植体,通过携带CTB基因的根癌农杆菌的介导进行转化,在Kan50mg/L和Carb500mg/L的MS3-1固体培养基上诱导形成胚性愈伤组织,转至Kan100mg/L和Carb100mg/L的MS0固体培养基上形成植株,同时还进行了以经过预处理的下胚轴为外植体进行转化的试验,发现低温处理4d的下胚轴的抗性愈伤诱导率较高。经PCR检测、PCR-Southern杂交检测以后,表明CTB基因已整合进胡萝卜的基因组中。RT-PCR检测初步证明了CTB基因的转录。     

组织培养结合秋水仙素诱导滇杨多倍体的研究

 利用组织培养结合秋水仙素对滇杨进行多倍体诱导,以期获得滇杨多倍体植株。结果表明：组织培养结合秋水仙素诱导滇杨产生多倍体的较优组合为秋水仙素浓度为80mg/L下处理30d或在90mg/L下处理20～30d,此时,多倍化诱导率最高可达186%。对滇杨多倍体植株与正常植株进行外部形态、染色体数目及单位叶面积内气孔数目的观察,发现多倍体植株与正常株形态差异明显,染色体数目增加为76条,叶表皮气孔变大,同时,叶片中叶绿素含量约为二倍体的1.5倍。     

猪蛔虫感染相关基因07E12的RNAi研究

为寻找猪蛔虫免疫防治的“关键”靶分子,从已构建的猪蛔虫感染期幼虫消减cDNA文库中筛选了一感染相关基因（EST编号为07E12）,采用RNA干扰（RNAi）技术对该基因的功能进行了初步探讨。针对其EST序列设计了1对特异引物,体外转录合成双链RNA (dsRNA)后,通过浸泡的方式将dsRNA导入猪蛔虫感染期幼虫中,在浸泡后的4个不同时间点采用RT-PCR方法检测虫体浸泡后靶基因被干扰的效果。试验结果表明,在浸泡后24、48、72 h都检测到了相对应基因表达的存在,但表达量随时间依次减少,96 h之后试验组没有检测到07E12的相应RNA的表达,提示dsRNA进入虫体并逐渐发挥了干扰作用,说明该基因在猪蛔虫幼虫感染宿主的过程中可能扮演重要角色。     

基于线粒体DNA全序列11个蛋白编码基因拼接序列的鳞翅目昆虫系统发育研究*

 目前已测定线粒体DNA全序列的鳞翅目昆虫有12种。由于高变异性和强核苷酸组成偏好性,去除了两个蛋白基因和两个物种,最终以10个鳞翅目物种的11个蛋白编码基因拼接序列对鳞翅目分子系统发育关系进行了研究。与前人的结果一致,基于11个蛋白编码基因拼接序列数据所构的最大似然树支持鳞翅目,鳞翅目内各总科和各科均为单系群。与MINET ^［1］基于形态学数据的结果相同,各总科的系统发育关系为{卷蛾总科＋［螟蛾总科＋（尺蛾总科＋蚕蛾总科）］}。蚕蛾总科内各科系统发育关系类似于REGIER等［2］的结论。     

中国斗鸡DJ-1基因克隆与原核、真核表达研究

本研究以中国斗鸡λ噬菌体cDNA文库为模板,克隆了DJ-1基因,并构建了pGEX-4T-1-DJ-1原核表达载体和pEGFP-N3-DJ-1真核表达载体,前者用来研究DJ-1蛋白在大肠杆菌表达系统中的优化表达;后者用来转染成纤维细胞系,研究DJ-1蛋白的亚细胞定位和建立转DJ-1基因的细胞模型。试验成功克隆了DJ-1基因的CDS区,并将其定向插入到pGEX-4T-1原核表达载体和pEGFP-N3真核表达载体中。IPTG浓度梯度诱导原核表达结果显示,在0.8 mmol/L时DJ-1蛋白表达量最高;时间梯度结果显示,在8 h时DJ-1蛋白表达量最高;真核表达载体转染脂尾羊成纤维细胞后48 h阳性率最高,DJ-1蛋白在细胞核和胞质中均有表达,但胞质中居多。上述结果表明,本试验已经建立了稳定的DJ-1蛋白的真核、原核优化的表达系统,为进一步研究DJ-1基因的功能奠定了基础。     

首次报道由异丝腐霉（Pythium diclinum）引起的烟草根腐病

 为了明确引起云南省昆明市杨林镇烟草漂浮育苗过程中出现的根腐病的病原,在该烟草漂浮育苗基地取3点,分别在各点采集病株10个样本,烟草品种为NC297,对样本进行了病原菌分离、致病性测定、形态学鉴定和58 rDNA ITS序列分析。结果表明,致病性试验中烟苗发病率为100％;病原菌的58 rDNA ITS序列与GenBank: AY6660871（Pythium diclinum Tokunaga in Ito &; Tokunaga）同源性为99％;异丝腐霉通过黄瓜片诱导后能产生大量孢子;引起该烟草漂浮育苗根腐病的病原菌为异丝腐霉（Pythium diclinum）;根据症状和病原菌,将此病害定为由异丝腐霉（Pythium diclinum）引起的烟草漂浮育苗根腐病;异丝腐霉引起烟草根腐病为首次报道。     

抗旱保水措施对烤烟生长发育及品质的影响

 针对丽江市永胜县片角乡旱区干旱的实际情况,寻找烤烟抗旱技术措施。采用随机区组设计,通过不覆盖、增施保德微生物土壤改良剂、隔垄秸秆全覆盖、覆膜+行间秸秆覆盖、覆膜+全表面秸秆覆盖的处理,以云97为材料,研究不同覆盖方式对烤烟生理特性、产量及品质的影响。结果表明：（1）覆盖处理能促进烟株生长,各处理大田生育期较CK分别提前了2,4,4,5d。（2）覆膜对烟株在全生育期均有增加地温的效果,而秸秆覆盖降低地温,因此覆膜+全表面秸秆覆盖各土层积温比覆膜+行间秸秆覆盖高2.38-9.25℃,除增施土壤改良剂处理外,各处理土壤含水量分别提高了2.44%,2.99%,4.58%,覆盖措施促进烟株叶绿素合成,前期效果更为明显。（3）各覆盖处理产量、均价及上中等烟比例分别提高375,675,750,900kg/hm2,产值分别提高77032,132525,139785,173865元/hm2,均价分别提高1.68,2.37,2.24,2.77元/kg,上等烟比例分别提高6%,4.8%,10.2%,16.8%,上中等烟比例分别提高6.7,7.3,14.5,15.8%。（4）增施土壤改良剂使总糖、还原糖含量降低4.77,4.7%,各处理均使总氮含量分别增加0.14,0.02,0.23,0.42%,除增施土壤改良剂的处理外,其他各处理分别增加钾含量0.05%,0.09%,0.09%,烟叶化学成分更协调,其中,覆膜+全表面秸秆覆盖的处理具有最高的经济效益,是最优处理。     

碳纤维混凝土的力学性能试验研究*

 通过试验,对短切碳纤维掺量为1%,2%的混凝土的150mm×150mm×150mm立方体和150mm×150mm×300mm棱柱体试块的抗压强度、劈拉强度、静力受压弹性模量、泊松比等进行了试验,并和未掺短切碳纤维的普通混凝土的基体做了比较和分析,据此研究分析了一定基体混凝土强度下不同碳纤维体积分数对混凝土力学性能等变化的影响。