有机肥施用技术对甜橘柚品质、产量影响及其经济效益分析

为了确保甜橘柚果实高糖的特性,常规施肥方法为1 a施用1次复合肥与菜籽饼作为基肥后,再施用复合肥作为芽前肥和壮果肥。该文通过对连续3 a对比试验的结果分析,研究了施用有机肥不同技术对提高甜橘柚品质及产量的影响。发现在追肥环节,无论是有机肥半替代处理,还是另加施半量有机肥处理,对甜橘柚的品质及产量均产生显著性的影响(P0.05)。与常规施肥相比,其精品率、可溶性固形物、含糖量、维生素C等指标均有明显提升,而可滴定酸明显下降;其产量增幅,2015年显著高于2014年(P0.05),而2014年与2013年相比,相差不显著(P0.05)。有机肥替代商品复合肥(1 500 kg/km~2)处理、加施半量有机肥处理与常规施肥相比,2015年新增产量分别为2 947.5,1 567.5 kg/hm~2,增幅分别为14.52%和7.72%;新增产值分别为85 365,50 580元/km~2,增幅分别为39.22%和23.24%。相比之下,有机肥替代处理效果更优,既减少了化肥(复合肥)量施用,又降低了肥料成本,实现了优质、丰产、稳产。     

淡紫紫孢菌菌株的分离、鉴定及其对柑橘木虱的致病性

从柑橘木虱中分离出一株对柑橘木虱具强致病性的菌株ZJPL08,观察该菌株的培养特征和形态特征,克隆并分析其rDNA ITS序列,并测定该菌株不同浓度的分生孢子悬浮液对柑橘木虱的致病性。结果表明:ZJPL08的菌落在PDA培养基上呈淡紫色至深紫色,富生粉质状分生孢子;3~5个轮生瓶梗,大小为(7.5~9.0)μm×(1.8~3.0)μm;分生孢子卵形或纺锤形,大小为(1.5~2.8)μm×(1.3~2.5)μm。该菌株的rDNA ITS序列与GenBank中多个淡紫紫孢菌菌株的对应序列相似性达100%,因此,菌株ZJPL08鉴定为淡紫紫孢菌。在相同浓度条件下,接种后培养时间越长,柑橘木虱的死亡率越高;培养时间相同时,孢子悬浮液浓度越高,柑橘木虱的死亡率越高。     

柑橘黄龙病菌核糖体蛋白基因的多态性及系统发育分析

通过PCR扩增6个不同地区柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)病原菌的核糖体蛋白基因,采用4种不同的限制性内切酶对PCR产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析;并对核糖体蛋白基因克隆和测序后,使用DNAman和NCBI Blast等软件对基因序列进行比对分析,并通过软件Mega4.1构建其系统发育树.结果表明:6个分离物核糖体蛋白基因的RFLP指纹图谱有所差异,表现出一定的多态性;不同分离物核糖体蛋白基因的核酸序列和氨基酸序列均存在差异,但相互之间同源性很高,其中核酸序列与数据库中亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)的同源性高达99%～100%,与非洲种(Ca.L.africanus)的同源性为85%,与美洲种(Ca.L.americanus)的同源性为77%～80%;系统发育分析显示所有的Ca.L.asiaticus亲缘关系极近,归为一个类群,而后与Ca.L.africanus和Ca.L.americanus组成韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter)一个大的类群.     

柑桔黄龙病菌外膜蛋白的原核表达与纯化

为获得大量高纯度的柑桔黄龙病菌Omp 外膜重组蛋白、应用PCR 方法从染病柑桔模板中扩增出黄龙 病菌omp 基因的3 个片段、将其克隆到pMDl9-T 载体、再亚克隆到pET32a 原核表达载体、构建pET32a-omp 原核表 达重组质粒、然后转化大肠杆菌BL21（DE3）、经IPTG 诱导并用SDS-PAGE 电泳检测带组氨酸标签的Omp 融合蛋白 表达后、用镍柱分离纯化该融合蛋白。结果表明院柑桔黄龙病菌omp 基因序列的两个片段在37益经1 mmol/L IPTG 诱导后、在大肠杆菌得到了高效表达;镍柱纯化蛋白得到预期大小（约55 ku）的融合蛋白。     

常规和巢式PCR对柑橘黄龙病菌的检测灵敏度比较

根据柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)病菌16SrDNA、16S/23S核糖体基因间隔区(ribosomal intergenic region,RIR)、核糖体蛋白β操纵子(β-operon)和外膜蛋白(out membrane protein,OMP)基因序列设计了8对引物,通过常规和巢式PCR方法对各引物的检测灵敏度进行了比较。结果表明,不同引物的检测灵敏度不同。对于上述任何基因,巢式PCR的灵敏度均比常规PCR至少高103倍;对于同一种基因,扩增短片段的引物比扩增长片段的引物灵敏度高或相当;在扩增产物大小相同时,用以扩增核糖体蛋白β操纵子基因的引物较其他三种稍高。对不同症状柑橘样品的检测进一步验证了该结果。因此,对于柑橘黄龙病的检测,可优先考虑使用巢式PCR方法,若使用常规PCR,则宜选用具有高灵敏度的扩增小片段引物。     

甜橘柚品系及优良单株的选择

2000-2020年,对无性系甜橘柚园中不同品系甜橘柚进行了果实大小、精品率、单株结果产量、可溶性固形物含量、可滴定酸、含糖量、出汁率、固酸比、丰产性等指标的测定和评价.结果表明:初选的6个品系15株甜橘柚个体中,有3个品系7株甜橘柚个体在1个或多个果实性状指标上表现比较突出,其中鲜食高品质的有TJY5-1、TJY5-...     

浙江省柑橘胶孢炭疽菌遗传多样性的ISSR分析

为了解柑橘炭疽病菌的种内遗传多样性,从32条ISSR引物中筛选出多态性好、条带清晰的5条引物,对28株炭疽病菌株进行ISSR-PCR扩增.结果显示:5条引物共扩增出43个条带,多态性条带41个,多态性比例为95.34%,说明柑橘炭疽病菌种内遗传多样性丰富.利用NTSYS软件分析并构建UPGMA聚类图,当相似系数为0.73时,28株菌可以分为5个类群,不同菌株间遗传变异较大,遗传变异与地域来源无显著的相关性.     

利用免疫共沉淀技术研究RSVCP、SP和NSvc4蛋白的互作

为了检测水稻条纹病毒(Rice sgipe virus,RSV)外壳蛋白(coat protein,CP)、病害特异蛋白(disease-special protein,SP)和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系,首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c=Myc标签的RSV CP、SP和NSvc4基因,并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71:35S2中.重组质粒转化根癌农杆菌(Agrobactctium tume-faciens)EHA105后,将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草(Nicotiana benthamiana)叶片.提取烟草中瞬时表达的蛋白,以HA或c-Myc抗体进行免疫共沉淀试验,最后免疫混合物通过c-Myc抗体或HA抗体进行Western blot检测,确定蛋白的互作情况.结果表明,RSV CP蛋白自身能够发生互作,而CP与SP,CP与NSvc4,SP与SP,SP与NSvc4,及NSvc4与NSvc4蛋白之间均未有检测到互作现象.     

黄岩橘区柑橘木虱发生情况及其带菌率

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing)广泛分布在亚洲、非洲、美洲等40多个国家和地区[1].自1980年代在浙江温州南部的平阳、苍南等地发现该病害以来,其逐渐向北蔓延扩散,在2001～2004年的4年时间内,浙江省病害发生面积从1332.5hm2扩大到10650.9hm2,病株数从72.9万株上升到187.1万株[2],而台州市黄岩区自2002年底发现该病害以来,至2004年柑橘病株数已上升至31.2万株[3],给当地柑橘生产造成了严重的危害.尽管近年来人们通过综合防治等措施使该病害得到了一定的控制,但因缺乏理想的防治药剂,其仍是当前柑橘生产中威胁最大的一种病害.     

柑橘内生放线菌CR20的鉴定与拮抗活性

从不同橘园取不同柑橘品种的根部,共分离获得42株内生放线菌,经抑菌试验,筛选到1株对柑橘绿霉病菌和青霉病菌具有较高拮抗活性的放线菌菌株,将其编号为CR20。通过对菌株形态学特征和生理生化特性的观察,并结合对其16S rDNA的序列分析,将菌株CR20初步鉴定为弗吉尼亚链霉菌。