黄鳝微卫星引物筛选及其在保护遗传学上的应用

研究了远缘种鲤的微卫星引物对黄鳝的适用性。结果显示,31对鲤微卫星引物中有11对引物能对黄鳝DNA模饭扩增出特异性带谱。每对引物扩增的等位基因数在3～13个,平均每个位点有5．6个等位基因,显示了较高的多态性。其中引物P1最理想,其PCR扩增产物能区分来自湖南、广东和孟加拉3个不同地域的黄鳝种群。应用微卫星技术对3个不同地域的黄鳝基因组DNA多态性分析结果显示,湖南、广东和孟加拉黄鳝群体内平均相似率依次为95．5％,95.8％和93．5％,平均变异度依次为0．045,0．042,0．063。群体间的相似率及变异度分析显示：湖南黄鳝和广东黄鳝群体间平均相似率为91．0％,变异度为0．045;湖南黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为55．7％和0．443;广东黄鳝和孟加拉黄鳝群体间平均相似率和变异度分别为58．6％和0．414。综合微卫星分析结果、黄鳝的外形特征及地理位置,可以推测,广东黄鳝与湖南黄鳝为同一个生物种的不同地理种群,而孟加拉黄鳝为同属中另一个种。     

外源激素对草鱼垂体GTH细胞影响的比较研究

通过对草鱼脑垂体ＧＴＨ细胞（促性腺激素分泌细胞）的组织化学和超微结构观察，比较研究了注射外源神经激素（ＬＲＨ－Ａ）和外源促性腺激素（ＰＧ）对ＧＴＨ细胞的影响及作用途径。结果证实：ＬＲＨ－Ａ刺激垂体ＧＴＨ细胞产生促性腺激素，ＧＴＨ细胞内分泌颗粒（ｇｒ）大量减少，分泌小球（ｇｌ）彼此融合后解体，垂体组织ＧＴＨ细胞间出现空腔，有部分ＧＴＨ细胞解体。ＬＲＨ－Ａ作用途径是通过垂体ＧＴＨ细胞起作用；ＰＧ不通过垂体组织起作用，注射ＰＧ以后，ＧＴＨ细胞不发生变化。     

鲫鱼4群体基因组DNA遗传多样性及亲缘关系的微卫星分析

采用微卫星技术，用9对微卫星引物对4个鲫鱼群体普通鲫鱼(C．auratus auratus)、红鲫(C．suratus red var)、白鲫(C．auratus cuvieri)和彭泽鲫(C．auratus auratus var．Pengze)的遗传多样性及亲缘关系进行研究。结果表明，4种鲫鱼的平均遗传杂合度值在0．607～0．721，其中自鲫0．721、红鲫0．652、彭泽鲫0．629、鲫鱼0．607；平均多态信息含量值在0．530～0．670，其中自鲫0．670、红鲫0．586、彭泽鲫0．549、鲫鱼0．530。由此可见，4个鲫鱼群体的遗传多样性总体水平较高，但白鲫的遗传多样性最高，鲫鱼的遗传多样性最低。在4种鲫鱼群体间，鲫鱼和白鲫群体间的遗传相似性指数最小(0．714)，遗传距离值最大(0．286)，说明这两种群体亲缘关系较远；白鲫与红鲫群体间遗传相似性指数最大(0．812)，遗传距离值最小(0．188)，这可推断白鲫与红鲫亲缘关系较近。聚类分析结果表明，白鲫和红鲫亲缘关系较近，而鲫鱼和彭泽鲫亲缘关系较近。研究鲫鱼遗传多样性对鲫鱼种质资源的保护和遗传改良具有重要意义。     

饲料酵母及其在水产动物营养中的应用

本文主要探讨了饲料酵母的营养成分、作用机制、加工工艺及其在水产动物饲料中的应用。研究表明,饲料酵母不仅可以很好的替代鱼粉作为水产动物饲料中的蛋白源或者作为一种微生态饲料添加剂,还是一种优秀的表达外源重组蛋白的受体系统。     

嗜水气单胞菌疫苗的初步研究

用来源于乌鳢腹水病的嗜水气单胞菌，制成菌体抗原与可溶性抗原，分6组注射接种湘鲫，检测供试鱼血清中凝集抗体效价。结果表明：菌体抗原组与可溶性抗原组分别在第2l天和第14天达到峰值，然后随免疫时间逐渐下降。加弗氏不完全佐剂的菌体抗原组与可溶性抗原组分别在第2l天与第35天分别达到峰值。并保持此水平。对鱼体免疫35天后的保护率进行测定，结果表明：疫苗组为100％，佐剂组为30％．生理盐水对照组为0％。     

FIASCO法筛选鳜鱼微卫星标记

通过FIASCO(Fast Isolation by AFLP Sequences Containing repeats)法构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组微卫星富集文库,分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。鳜鱼基因组DNA经MseⅠ限制性内切酶消化后,选取200~800 bp的片段与MseⅠ接头连接,用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)8、(CT)8、(AT)7、(GATA)8、(GATT)7与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T载体上,转化至DH5α中,首次成功构建鳜鱼基因组微卫星富集文库。对其中100个阳性克隆进行测序,60个(60%)含有微卫星序列(GenBank Accession Number:DQ789247~DQ789306)。成功设计了47对鳜鱼微卫星引物,并合成21对引物进行PCR扩增,结果筛选出18个多态性微卫星标记。结果表明:FIASCO法能有效提高筛选微卫星标记的效率。本研究筛选的微卫星标记可以用于鳜鱼遗传背景分析和遗传连锁图谱构建,并将为鳜鱼基因组结构分析、标记辅助育种以及数量性状位点(QTL)基因的定位等研究提供候选微卫星标记。     

鳜属3物种IRF_2基因微卫星标记筛选及遗传变异研究

利用微卫星分析技术筛选翘嘴鳜、斑鳜和大眼鳜的IRF2基因微卫星标记,分析IRF2基因微卫星在3物种中的遗传变异.结果筛选出了4个微卫星标记,其中I3、I4标记可用于斑鳜的分子鉴定;检测到26个等位基因,平均每个位点6.5个,等位基因频率0.066 7～0.714 3;3物种IRF2基因遗传变异程度由高到低依次为大眼鳜(H为0.671 7;PIC为0.624 1),翘嘴鳜(H为0.537 6;PIC为0.446 2),斑鳜(H为0.300 0;PIC为0.265 6),这说明IRF2基因微卫星在3物种中遗传变异程度高.     

黄鳝微卫星标记筛选及其在不同性别表型群体中的遗传多态性

采用FIASCO(Fast isolation by AFLP sequences containing repeats)法进行黄鳝微卫星标记筛选并将其应用于黄鳝性别差异群体的遗传变异分析.黄鳝基因组DNA经酶切、微卫星核心序列探针杂交、T载体连接并转化至DH5a中,构建黄鳝基因组微卫星富集文库.随机挑选75个阳性克隆测序,结果发现其中20个含有微卫星序列,利用软件成功设计了15对微卫星引物,经过黄鳝基因组DNA的PCR扩增及电泳检测,筛选8对多态性微卫星引物并对黄鳝3种不同性别表型群体的基因组DNA进行PCR扫描,结果显示:在8个微卫星座位中,共检测到51个等位基因,平均每个座位的等位基因数为6.375个,等位基因频率分布为0.001 2～0.603 3;黄鳝雌性表型群体、间性表型群体、雄性表型群体的平均遗传杂合度分别为0.637 1、0.696 9、0.734 5;平均多态信息含量分别为0.565 6、0.641 6、0.685 8,表明这些微卫星标记在黄鳝不同性别表型群体的遗传多态性发生了改变,它们可作为黄鳝遗传背景分析的分子标记.     

青鱼生长激素在毕赤酵母中的表达

根据GenBank数据库中登记的青鱼(Mylopharyngodon picens)生长激素(bcGH)基因序列(AF389238)设计特异性引物,采用RT-PCR技术扩增青鱼生长激素cDNA编码区,并通过定向插入含强启动子AOX I的表达载体pPIC3.5k、电击转入毕赤酵母GS115菌株、G418多克隆子筛选和测序...