农户农地转出意愿影响因素实证分析——基于云南省砚山县的农户调查

分析农地转出意愿的影响因素,对解决生产经营零散,实现全面小康、加快农村农业现代化建设具有十分积极的意义。依据云南省砚山县的问卷调查数据,采取统计分析和Logistic回归模型对农地转出意愿的影响因素进行分析。结果表明：(1)受教育年限、承包地块的面积、承包地块数、经济发展水平以及农户所在区位对农地转出有显著性影响。(2)年龄、职业类别、承包地距离、家庭总人口数以及务农人口数对农地转出意愿影响不显著。农地转出意愿是受到承包地块特征等多种因素制约和影响的。结合实证分析结果,为增强农户农地转出意愿,盘活农地承包流转,提高农户耕地利用效率,需要加大农村科技、教育投入,立足农村经济社会发展现状,提升农村经济管理和服务水平,制定优惠政策,减轻农民负担,提高农民收入,确保农村经济获得可持续发展。     

苗期芹菜田杂草的化学防除

上海郊区,芹菜一般在9～10月播种,苗期杂草危害严重,亩产损失达30％以上。虽然近几年不断引进和开发新除草剂,但由于存在药源、价格等问题,难以推广。据此,本文根据在上海县新泾乡所做的试验结果,介绍几种常规除草剂对苗期芹菜田杂草的防除效果。     

基于重组毕赤酵母的鳜鱼β-防御素生物合成及其抑菌活性

鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)多肽链由N端的信号肽和C端的成熟肽组成,通过构建产鳜鱼β-防御素的毕赤酵母重组菌株,以解决天然免疫小分子抗菌肽的来源问题。通过RT-PCR从鳜鱼脾脏中分离编码β-防御素成熟肽的基因ScBD,将其与表达载体pPICZαA连接后构建重组表达载体pPICZαA-ScBD并转入毕赤酵母X-33;通过含高浓度博来霉素的YPD平板筛选阳性转化子后,于28℃、250 r/min和pH 6.0的条件下,使用1%甲醇诱导表达96 h;经镍离子亲和层析对重组毕赤酵母菌株的产物进行纯化,并对纯化产物进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定;通过平板涂布法和浊度法检测该重组菌株产物的抑菌活性。结果表明:基于质谱分析的一级结构鉴定证明纯化产物为分子量6.35 ku的预期重组ScBD;抑菌实验显示重组菌株产物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)的抑制率分别为94.34%、86.97%和85.92%。本文构建的重组毕赤酵母菌株能有效合成具有生物学活性的重组ScBD,为鱼类来源天然小分子抗菌肽的进一步开发提供了技术途径。     

鲢鱼加工废弃物的酶法水解

鲢鱼加工鱼糜的废弃物中，鱼头及残渣（鱼皮，鱼骨的混合物）的蛋白质含量丰富，分别为１２．３％和１８．２％，钙含量高，分别为３．２％和１．５％，其蛋白质的氨基酸组成较平衡，在食品中加工中有较高的利用价值。实验采用中性蛋白酶对鲢鱼加工废弃物进行水解，并用正交试验Ｌ９（４＾３）法对酶水解条件进行了研究。结果表明，酶水解度的最适条件为ｐＨ７，酶量１ｇ／１００ｇ原料，时间１￣１．５小时，温度４０￣５０℃，产物     

斑点叉尾NK-lysin成熟肽在毕赤酵母中的表达

NK-lysin是毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的具有抗菌作用的多肽,在机体免疫系统中发挥重要作用,被认为是抗生素的理想替代品。NK-lysin的生物学功能主要由其成熟肽(m NK-lysin)决定。本文在已有斑点叉尾(Ictalurus punctatus)NK-lysin成熟肽原核重组表达载体p ET-32a(+)-m NK-lysin的基础上,通过PCR在m NK-lysin的5’端和3’端分别添加EcoRI和Xba I酶切位点,并在3’端添加6×His标签以便于纯化;扩增到的片段与表达载体p PICZαA连接构建重组表达载体p PICZαA-m NK-lysin,转化至毕赤酵母X-33细胞中,通过博来霉素筛选以及对酵母转化子基因组的PCR鉴定得到高拷贝酵母转化子;在29℃,250 rpm,采用0.5%甲醇进行诱导表达;表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)获得纯化的重组体m NK-lysin。经Tricine-SDS-PAGE分析,其分子量约为11.5 k D;经Western blot分析,证明m NK-lysin在毕赤酵母中成功表达。     

“互联网+C级宠物美容师岗位课程”的设计与实施

宠物行业在互联网经济的推动下快速发展,急需高素质专业人才,高职宠物类专业需在互联网背景下,深度开展校企合作,创新人才培养模式,按照企业岗位需求标准培养学生。以辽宁农业职业技术学院宠物养护与驯导专业朋朋宠物美容班(校企订单班)核心课程--C级宠物美容师岗位课程为例,阐述互联网资源在课程中的贯通与应用,在现代学徒制培养模式背景下,实现跨城市异地教学,为宠物行业培养高标准型人才。     

鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达

从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5'和3'端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h,获得重组体CLYG.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示,在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.     

青蛤Ⅰ型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达

Ⅰ型溶菌酶是无脊椎动物免疫系统中一种富含半胱氨酸的重要蛋白质免疫因子,具有良好的抗病原微生物功能。通过反转录PCR自青蛤闭壳肌中克隆到Ⅰ型溶菌酶（CslyⅠ）基因,以pPⅠCZαA为表达载体、毕赤酵母X-33为工程菌,构建重组毕赤酵母菌株X-33/pPⅠCZαA-CslyⅠ,经高质量浓度博莱霉素培养基筛选获得高拷贝重组菌株。该菌株在28℃、250r/min条件下,经1%甲醇诱导表达72h后获得蛋白质类表达产物。Western blot和MALDⅠ-TOF/TOF质谱分析表明,该表达产物为预期的重组青蛤Ⅰ型溶菌酶;进一步的抑菌试验证明,该重组青蛤Ⅰ型溶菌酶具有抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌的活性,并且显示良好的热稳定性。本研究可为无脊椎动物来源Ⅰ型溶菌酶的制备提供基于重组毕赤酵母的生物合成技术。     

斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肝脏表达的抗菌肽-2(LEAP-2)在E.coli中的融合表达

抗菌肽是存在于生物细胞中的一类具有强抗菌作用的天然小分子多肽,它们在机体免疫系统中发挥了重要作用,被认为是抗生素的理想替代品.本文通过RT-PCR法从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)的肝脏中分离到抗菌肽-2(LEAP-2)基因,该基因编码94个氨基酸残基组成的多肽;氨基端的信号肽由28个残基组成,成熟肽含有41个残基;对于鱼类和哺乳动物显示高度保守的4个半胱氨酸残基位于多肽的羧基端区域.通过对LEAP-2基因添加EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点和对pET32a进行双酶切处理,成功构建了"pET32a-IpL-2"重组表达质粒,并转化工程茵E.coli BL21(DE3).在工程菌对数生长后期加入诱导剂IPTG、经25℃培养后,可溶性的"trxA-IpL-2"融合蛋白得到高程度的表达.Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得了高纯度的目的蛋白.