PCR—ELISA在转基因产品检测中的应用

PCR－ELISA法以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增，PCR产物通过杂交和凝胶电泳双重检测，结果通过酶标仪直接输出，无人为误差。该方法灵敏度高，可靠性强，易于操作，自动化和程度高，适于批量检测，是适合推广的1种快速转基因检测方法。     

实时荧光RT-PCR一步法检测苹果茎沟病毒

 根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建屯了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3'端具有小沟结合分子(Minor groove binder,MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。     

番茄灼烧病毒属——番茄上新发现的一类植物类小RNA病毒

番茄灼烧病毒(170mato torrado virus,ToTV)、番茄顶点坏死病毒(Tomato apex necrosis virus,TOANV)和蕃茄枯萎病毒(Tomato marchitez virus,ToMarV)是近几年来在番茄上发现的一类植物类小RNA病毒,分别引起番茄"灼烧病"(torrado disense)和"枯萎病"(marchitez disease).该类病毒粒体形态是一种直径约为28 nm的等轴多面体病毒.其基因组是由两个长度分别约为7 kb(RNA1)和5 kb(RNA2)的ssRNA分子组成.ICTV植物类小RNA病毒研究小组最近把它们归为一个新的植物病毒属,即番茄灼烧病毒属(Torradovirus).本文就这类病毒的生物学、分子生物学特征分别作简单介绍.     

转基因延熟番茄"华番一号"的品系特异性检测方法

本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄"华番一号"(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间.以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应.本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝.由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法.     

微滴数字RT-PCR检测南芥菜花叶病毒

为建立一种快速、灵敏、特异的定量检测南芥菜花叶病毒(arabis mosaic virus,ARMY)的微滴数字RT-PCR方法,根据ArMV外壳蛋白基因保守序列设计了特异性引物和探针,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估.结果 表明,该数字RT-PCR检测方法的特异性好,与其他对照病毒均无交叉反应;检测灵敏度可...     

进境西瓜种子中西瓜细菌性果斑病菌的检测鉴定

由嗜酸菌属西瓜种(Acidovorax citrulli)引起的西瓜细菌性果斑病是西瓜等葫芦科作物上的一种极具毁灭性的病害,该病原细菌可以由种子携带传播。本研究通过直接研磨种子,用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)和免疫捕捉聚合酶链式反应法(IC-PCR)对进境的西瓜种子进行检测,并且对PCR产物进一步克隆测序。结果表明,在DAS-ELISA产生阳性结果的样品中,IC-PCR结果也产生阳性。序列分析表明,该序列与已知的该病菌16S rRNA基因的相应序列具有100%同源性。因此,2006年这批来自台湾的西瓜种子携带有嗜酸菌属西瓜种(Acidovorax citrulli)。     

应用简并引物检测南方菜豆花叶病毒属病毒

南方菜豆花叶病毒属Sobemovirus包括13个确定种和4个暂定种[1],其中南方菜豆花叶病毒Southern bean mosaic virus(SBMV)和藜草花叶病毒Sowbane mosaic virus(SoMV)已列入<中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录>.     

抗病毒转基因木瓜的分子检测

本研究测定了抗病毒转基因木瓜品系55-1、GM YK和华农1号的结构特征序列,并根据测序结果设计、合成了结构特异性检测引物,建立了55-1、GM YK和华农1号的结构特异性检测方法.为提高检测效率,将结构特异性检测引物和内源基因检测引物置于同一反应体系之中,建立了转基因木瓜品系的两重PCR检测方法.本研究建立的PCR检测体系可用于进口木瓜的检测,从中发现未经我国批准的转基因木瓜品系,为转基因产品的标识管理提供技术支持.     

玉米矮花叶病毒原北京分离物的分子鉴定

玉米矮花叶病自1968年在河南新乡等地发生以来，在全国各玉米产区相继有不同程度的发生。该病近年在华北各地流行，导致玉米大面积减产、品质降低，造成了严重的经济损失。近20年有关病原生物学及血清学的研究结果表明，我国至少存在着3种相关的病原可导致玉米矮花叶病：玉米矮花叶病毒（MDMV）B株系（MDMV-B），MDMV-G（或白草花叶病毒）以及甘蔗花叶病毒（SCMV）。它们均属于马铃属Y病毒属（Potyvirus）中侵染禾本科植物的甘蔗花叶病毒亚组（SCMV Subgroup）。虽然MDMV-B并不侵染甘蔗，但是由于其外壳蛋白基因的核苷酸序列与SCMV的同源性高于MDMV的其它株系，已被重新归类为SCMV-MDB株系。为了明确我国曾鉴定为MDMV-B的玉米矮花叶病毒原的分类地位及其分子生物学特征，以利于探索针对该病毒的有效控制措施，测定其基因组RNA全序列是很必要的。     

利用Real-Time PCR从无症种薯上快速检测马铃薯环腐病菌

马铃薯环腐病是一种典型的维管束病害,病原菌为密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganensesubsp.sepedonicum,Cms),发病块茎切开可见维管束变为乳黄色至黑褐色,皮层内表现环形或弧形坏死部。贮藏后块茎芽眼变黑干枯或外表爆裂,播种后不出芽或出芽后枯死或形成病株。病株的根、茎部维管束常变褐,病蔓有时溢出白色菌脓。该菌在种薯中越冬,成为翌年初侵染源。病菌主要通过种薯远距离传播。由于近几年我国马铃薯产业的快速发展,该病害危害越来越严重,成为种薯生产质量控制的关键点。传统方法是通过症状观察、病原菌分离、染色进…