致猪水肿病大肠杆菌鄂E株SLT-IIeB基因的克隆、序列分析及原核表达

以湖北本地分离的致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,PCR扩增去掉信号肽和跨膜区的SLT-IIeB基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-KG。同时对筛选出的阳性质粒pGEX-SLT-IIeB进行测序,测序结果与Genbank上发表的12个SLT-IIeB基因序列的同源性达100%,表明该基因保守性很好。重组质粒pGEX-SLT-IIeB经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,SDS-PAGE分析表明表达产物GST-SLT-IIeB有特异性表达带,Western-blot检测证实表达产物具有免疫反应性。     

当前我国猪病流行动态与防治对策

一、当前猪病流行趋势1.新的疫病不断增多,病原变异加快,毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b,PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位点的增加。口蹄疫病毒中传统新猪毒和泛亚毒疫苗对O型耿马属口蹄疫保护率不高。     

猪细小病毒疫苗研究进展

猪细小病毒是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。在世界范围内造成了巨大的经济损失，本文不常规疫苗，免疫程序及新型疫苗的研究作了综述，特别是猪细小病毒VP2基因在基因工程疫苗及核酸疫苗方面的应用前景的介绍，对其深入的研究甚有参考价值。     

PCR法对伪狂犬病病猪不同部位的检测及敏感性试验

应用ＰＣＲ方法对ＰＲＶ感染细胞及自然发病猪不同组织样品进行检测,感染细胞毒最低检出是为１０＾５个ＴＣＩＤ５０病料组织样最低取样０．１ｍｇ时,仍能得阳性结果其敏感性显著高于微量血清中和试验。ＰＲＶ在自然发病猪体分布很广,脑,三叉神经节（三叉Ｎ节）。嗅球,扁桃体,心脏,肝,脾肺,肾均有ＰＲＶ在存在的,ＰＲＶ的检出率最高的组织为三叉神经节,其检了率为１００％,其它对照病毒及传代细胞ＰＣＲ反应产物电泳结果     

腹泻可能会成为猪场长期难以解决的难题

近年来我国猪场腹泻性疾病暴发严重,传统病毒性腹泻三大病原主要有流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒,去年冬季至今年春季的腹泻主要以流行性腹泻为主,并且新近报道、检出率高的病毒性腹泻病原有库布病毒(kobuvirus)、博卡病毒(bocavirus)、诺如病毒(norovirus)。许多猪场发病多次,间隔时间短,说明一定是有新的病毒,并且出现反复感染。造成腹泻的其他因素还有免疫抑制病、细菌性腹泻、饲料霉菌毒素、生物安全、环境因素。对腹泻的界定:水泻,24小时内3次或3次以上水样粪便或希便;痢疾,粪便中含有血或黏液;慢     

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

 【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌（55.9%）、副猪嗜血杆菌（50.0%）、大肠杆菌（43.1%）、巴氏杆菌（25.5%）、绿脓杆菌（17.6%）和沙门氏菌（11.8%）。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明：各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。     

我国农业科技创新与高等农业教育改革

改革开放40年来,我国农业科技取得了世界瞩目的成就,但也存在诸多问题,危机重重。文章梳理了改革开放40年来我国农业科技的主要成就与难题,分析了新常态下我国农业科技面临的形势和主要任务,提出了新常态下促进农业科技创新的我国高等农业教育改革建议。文章提出,我国农业与发达国家相比还存在较大差距,面临着"效益低下、食品安全问题突出、环境污染严重"三大难题。面对挑战和机遇,未来我国农业科技主要应从农业新品种的培育与繁殖技术创新、动植物病虫害防控技术创新、肥料及饲料营养技术创新、农业废异物资源化利用创新、农业设施设备创新、食品加工创新等方面进行突破;新常态下,振兴乡村、做强农业现代化,我国高等农业教育必须构建高水平的农业人才培养体系,建立中国农业与世界农业的生命共同体,对高等农业教育的培养目标、培养平台、本科生招生、研究生招生等进行大刀阔斧的改革。     

基于西门利克森林病毒复制子的"自杀性"DNA疫苗载体的构建及其体外表达特性

对西门利克森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pSfV1进行改造，即在SFV非结构蛋白(nSPs)上游插入依赖于RNA聚合酶Ⅱ的人巨细胞病毒立即早期启动子／增强子序列(hCMV IE Pro／Enh)，同时在pS-FV1的多克隆位点下游插入SV40 poly(A)终止信号序列，获得可以完全在DNA水平上操作并具有自主复制功能的表达载体pSFV-DNA。为了进一步探讨改造载体的转染效率、表达能力以及是否能诱导细胞凋亡等特性，将报告基因EGFP插入pSFV-DNA中亚基因组启动子下游，构建的重组表达质粒pSFV-EGFP转染BHK-21细胞，转染后12h即可观察到荧光，但转染效率明显低于直接由hCMV IE Pro／Enh驱动的EGFP真核表达质粒pEGFP-C1；提取转染后48h的细胞基因组DNA，电泳发现pSFV-EGFP转染细胞均呈典型的DNA断裂(ladder)，而pEGFP-C1转染细胞未观察到这种现象。上述结果表明：改造的载体不仅可完全在DNA水平上操作，而且能正确表达外源基因和诱导细胞凋亡，为开展各种病原微生物的“自杀性”DNA疫苗研究提供了良好的工具。