基于西门利克森林病毒复制子的"自杀性"DNA疫苗载体的构建及其体外表达特性

对西门利克森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pSfV1进行改造，即在SFV非结构蛋白(nSPs)上游插入依赖于RNA聚合酶Ⅱ的人巨细胞病毒立即早期启动子／增强子序列(hCMV IE Pro／Enh)，同时在pS-FV1的多克隆位点下游插入SV40 poly(A)终止信号序列，获得可以完全在DNA水平上操作并具有自主复制功能的表达载体pSFV-DNA。为了进一步探讨改造载体的转染效率、表达能力以及是否能诱导细胞凋亡等特性，将报告基因EGFP插入pSFV-DNA中亚基因组启动子下游，构建的重组表达质粒pSFV-EGFP转染BHK-21细胞，转染后12h即可观察到荧光，但转染效率明显低于直接由hCMV IE Pro／Enh驱动的EGFP真核表达质粒pEGFP-C1；提取转染后48h的细胞基因组DNA，电泳发现pSFV-EGFP转染细胞均呈典型的DNA断裂(ladder)，而pEGFP-C1转染细胞未观察到这种现象。上述结果表明：改造的载体不仅可完全在DNA水平上操作，而且能正确表达外源基因和诱导细胞凋亡，为开展各种病原微生物的“自杀性”DNA疫苗研究提供了良好的工具。     

新型基因工程亚单位菌苗对猪传染性胸膜肺炎的保护效力研究

 利用分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的重组表达产物和胸膜肺炎放线杆菌7型菌，研制了一种新型的基因工程亚单位菌苗并对此疫苗的免疫效力进行了研究。利用该疫苗免疫断奶仔猪，间隔3周加强1次，同时设空白对照组和一种商品化的三价细菌灭活苗组。首免后每周采血检测ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的ELISA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫两周后用猪胸膜肺炎放线杆菌1型菌株进行气管攻毒。从攻毒后症状、细菌分离、抗体检测、死后剖检对免疫效果进行评价。结果显示亚单位菌苗对于猪传染性胸膜肺炎有显著的保护力，能明显减轻临床症状和降低肺部损伤，效果优于商品化的细菌灭活苗。     

当前我国猪病流行动态与防治对策

一、当前猪病流行趋势 1．新的疫病不断增多,病原变异加快,毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b,PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位点的增加。口蹄疫病毒中传统新猪毒和泛亚毒疫苗对O型耿马属口蹄疫保护率不高。     

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的克隆、表达及其免疫原性

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacilluspleuropneumoniaeserotype2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxIIA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aIIA,转化到大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性。将表达的蛋白经或不经复性处理,与纯化的天然毒素Ⅱ分别免疫昆明小鼠,同时设PBS空白对照组,每组12只,间隔2周免疫2次,采血检测其抗体效价,二免后2周用致死剂量的APP血清7型(APP-7)菌株(1.08×108CFU(菌落形成单位,colonyformunit)/只)腹腔攻击。结果显示,复性蛋白组的保护率为83.3%,非复性蛋白组的保护率为58.3%,天然毒素蛋白对照组保护率为91.7%,空白对照组小鼠全部死亡,说明复性的重组毒素Ⅱ具有良好的免疫原性。     

猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性

参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌（App）血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物，通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC3个基因，获得长约1137、429、1146bp的片段，将其分别克隆到pMD18-T中，经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子；再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后，转化BL21，在IPTG诱导下获得高效表达，经Western-blotting检测证实，表达产物CpsC有生物学活性，CpsA、CpsB无活性；将3种表达产物等量混合，做10倍递进稀释后，与分离出的猪嗜中性粒细胞作用，37℃、50mL／L CO2培养箱中温育4h后加入底物液，测定D492nm值。结果表明，App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。     

猪圆环病毒病研究进展

圆环病毒是近年来兽医界广泛关注的新发现畜禽类病毒之一,具有重要的经济意义.在2000年墨尔本国际猪病会议(IPVS)和1999年北京国际禽病会议(ICEVP)上均成为受到重视的热门话题.     

猪细小病毒疫苗研究进展

猪细小病毒是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。在世界范围内造成了巨大的经济损失，本文不常规疫苗，免疫程序及新型疫苗的研究作了综述，特别是猪细小病毒VP2基因在基因工程疫苗及核酸疫苗方面的应用前景的介绍，对其深入的研究甚有参考价值。     

BHV-1gG-／tk-／GM-CSF＋重组病毒的构建及其免疫效果的评价

通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。将牛GM-CSF克隆到pcDNA3．1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克到pcDNA3．1载体中,得到转移栽体pTK-GM-CSF。将亲本病毒BHV-1gG-／TK-／EGFP’基因组与转移载体pTK-GM-csF采用磷酸钙法共转染MDBK~g,得到重组病毒BHV-1gG／TK-／GM-csF’。并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价。利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性。亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化．生长曲线相似;体外遗传稳定性良好。兔体试验表明,在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFN-B（P〈0.05）。但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异。在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-p高于亲本株,具有-定的应用前景。     

天然免疫与生物安全在未来疫病防控中的重要性——天然免疫与疫病防控新策略

目前．养殖业正在经历新一轮的变革,产业升级是不可逆转的形势,整个行业都倍受疫病压力．将来疫病防控的发展趋势如何7在2013年10月21～25日,由中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会与军事医学院军事兽医研究所主办,的“中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立三十周年庆典、第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会”上众专家院士给出了共同的答案：建立或修复动物机体的天然免疫屏障,减少药物或疫苗的使用量．降低了机体排毒和病毒细菌等传播的可能性,是今后疫病防控的趋势,势必将成为疫病防控的主流趋势．动保行业的转型和变革或将到来。     

我国农业科技创新与高等农业教育改革

改革开放40年来,我国农业科技取得了世界瞩目的成就,但也存在诸多问题,危机重重。文章梳理了改革开放40年来我国农业科技的主要成就与难题,分析了新常态下我国农业科技面临的形势和主要任务,提出了新常态下促进农业科技创新的我国高等农业教育改革建议。文章提出,我国农业与发达国家相比还存在较大差距,面临着"效益低下、食品安全问题突出、环境污染严重"三大难题。面对挑战和机遇,未来我国农业科技主要应从农业新品种的培育与繁殖技术创新、动植物病虫害防控技术创新、肥料及饲料营养技术创新、农业废异物资源化利用创新、农业设施设备创新、食品加工创新等方面进行突破;新常态下,振兴乡村、做强农业现代化,我国高等农业教育必须构建高水平的农业人才培养体系,建立中国农业与世界农业的生命共同体,对高等农业教育的培养目标、培养平台、本科生招生、研究生招生等进行大刀阔斧的改革。