梅花鹿鹿茸细胞端粒酶活性及其mRNA表达的检测

[目的]研究鹿茸生长期端粒酶的表达,为揭示鹿茸生长发育的调控机制提供了新思路。[方法]在鹿茸快速生长阶段,采用改进的TRAP（端粒重复序列扩增技术）法检测鹿茸顶端增殖区的间充质层、前软骨层和软骨层细胞及下端成熟区的端粒酶活性。同时,采用RT-PCR的方法检测各组织细胞中端粒酶催化亚基（TERT）mRNA的表达水平。[结果]在顶端增生区各组织细胞中均检测到了不同程度的端粒酶活性,间质细胞、前软骨细胞和软骨细胞中的相对端粒酶活力分别为91.2、46.4和13.7,而在成熟区组织中则检测不到端粒酶活性。RT-PCR法检测的各组织细胞中TERTmRNA的表达水平与端粒酶活性检测结果一致。[结论]在鹿茸快速生长阶段,其增殖区表达端粒酶,并且端粒酶活性随组织层细胞的分化程度的增高而逐渐降低,说明端粒酶可能在鹿茸的生长过程中起重要的调控作用。     

燕麦中多酚类化合物的分析及抗氧化活性的研究

[目的]探索燕麦成分的研究方法,对燕麦不同栽培种的种质资源进行评价。[方法]利用高效液相技术以及Folin-ciocalteu法研究不同燕麦的样品。[结果]确定从燕麦中提取多酚类化合物的工艺流程,并利用高效液相色谱技术研究不同样品中游离型和结合型多酚类化合物及抗氧化成分在燕麦中的分布情况以及燕麦中抗氧化成分的组成及存在形式;采用Folin-ciocalteu法测定不同样品提取液中总多酚含量,并测定不同样品结合型多酚类化合物清除DPPH自由基的能力。[结论]该研究为燕麦的综合利用提供依据。     

潜伏期马立克氏病病鸡血清I型病毒L—meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒（MDV）鸡淋巴组织中提取基因组DNA，采用梯度PCR的方法获得MDV的L—meq、meq基因，将其插入pMD18-T克隆载体，经测序并进行了序列分析。结果表明，L—meq、meq基因同源性很高，L—meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L—meq基因消失的原因，试验对L—meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明，L—meq基因中含有9个PRR（proline—rich—reapts）区域，meq中含有6个PRR区域，从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关。该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因，同时也意味着L—meq基因对于潜伏期的维持是必要的。     

燕麦中油脂类成分的提取分离及抗氧化活性研究

对燕麦中脂溶性成分的提取工艺进行了研究,确立了从燕麦中提取油脂类成分的最佳提取工艺流程:以正己烷为提取溶剂,超声提取3 h,料液比为1:5;利用混合溶剂系统,检测燕麦油脂类成分清除DPPH自由基的能力,为燕麦的综合利用提供依据.     

鸡去泛素化相关因子1基因原核表达载体的构建及表达

构建鸡去泛素化相关因子1(Chicken ubiquitin-related factor 1,chUAF1)的原核表达载体,并对表达产物进行鉴定.将提取的鸡法氏囊cDNA根据哺乳动物基因组的特性5'-端GC含量高3'-端GC含量低的特点设计2对引物,PCR获取2段基因片段.将两者用搭桥部分的酶切位点进行酶切,胶回收,连接成chUAF1基因全长,再将基因克隆入pMD18-T载体,酶切鉴定后,将chUAF1基因亚克隆到pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-UAF1.转化BL21(DE3)大肠杆菌中,IPTG诱导表达并鉴定.结果显示,所构建的chUAF1基因表达载体pET28a-chUAF1经PCR及DNA测序结果表明构建正确,SDS-PAGE鉴定在预期位置出现阳性条带.结果表明,已成功构建了pET28a-chUAF1原核表达载体,为下一步试验提供了依据.     

马立克氏病鸡MDV血清基因的克隆与鉴定

[目的]克隆马立克氏病鸡MDV血清基因,并对其进行鉴定。[方法]从潜伏期感染马立克氏病鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR扩增马立克氏病毒的L-meq基因。将其插入pMD18-T克隆载体并进行测序,并用DNAman软件进行序列分析。[结果]获得的DNA片段的序列与已发表的L-meq基因序列相一致,表明该试验成功获得了目的基因。[结论]该研究可为鸡马立克氏病的预防与治疗提供新思路和新方法。     

罗布麻叶总黄酮提取物促进小鼠抗抑郁基因CREB、BDNF的表达

罗布麻是中国药典收录的传统中药,本研究提取它的主要有效成分罗布麻总黄酮,采用经典抗抑郁评价模型小鼠强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮进行抗抑郁活性评价。试验中给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg后,观察罗布麻叶总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响,结果显示罗布麻总黄酮提取物能显著缩短小鼠强迫游泳不动时间（P〈0.05）,药效与氟西汀相似,表明罗布麻具有明显的抗抑郁活性。在此基础上,应用皮质酮损伤的PC12细胞模型,采用荧光相对定量RT-PCR法检测罗布麻对皮质酮损伤的PC12细胞中脑内脑源性神经营养因子（BDNF）和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）表达水平的影响。结果表明,皮质酮处理后PC12细胞中BDNF、CREB基因的表达量最低,罗布麻处理后,表达量显著增加,较处理前增加了近十倍,且呈剂量依赖性。本研究结果提示罗布麻抗抑郁机制可能是通过（AC-cAMP-CREB）信号通路促进BDNF、CREB的基因表达而发挥的。     

吉林省西部地区盐碱地土壤成分研究

为研究吉林省西部地区土壤成分及含量,利用酸度计测定了不同土样的pH值,利用火焰光度计及原子吸收分光光度计研究了速效氮磷钾和微量元素的含量,以及燕麦种植对土壤中无机元素和微量元素含量的影响,结果表明:吉林省西部地区盐碱地土壤中速效氮磷钾分布不均匀,微量元素的含量差别不大,pH值较高,有的已达到9.6以上,但仍处于燕麦生长所耐受的范围之内,种植燕麦后盐碱地土壤有了酸化趋势.因此,应大力提倡在盐碱地种植燕麦,可为吉林省西部地区盐碱地改造提供一定的帮助.