利用mRNA差别显示技术分离红树植物许树耐盐相关cDNA

选用适应甜土种植10余年的红树植物许树分株,在室内分别以盐水与自来水进行沙培.分别提取叶片的总RNA.通过oligo（dT）12CA反转录合成cDNA第1链,以此为模板,用4组10核苷酸随机引物与锚引物o1igo（dT）12CA组成的引物对,进行PCR扩增,选择差异表达片段,发现3个稳定的差异cDNA只存在盐水培养下许树叶片中,而自来水培养条件下却没有.这3个差异cDNA片段分别命名为colb1,colb2,colb3.对3个cDNA采用DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter KitI进行RNA杂交检测,只有colb1在盐培许树叶中呈现稳定的显色信号,在自来水浇灌的许树叶中却无显色信号,colb2和colb3均无显色.可见colbl（463 bp）是耐盐相关cDNA.将片段colb1克隆,并进行序列分析,其AT碱基对占全序列的61.74%.将序列提交NCBI进行BLASTN和BLASTX查询,未发现相关同源cDNA.耐盐相关cDNA的获得将为分离全长耐盐基因和其耐盐机制的研究奠定了基础.     

甜瓜组织培养再生植株中的四倍体变异

甜瓜未成熟子叶,幼苗子叶和真叶离体培养的再生植株中存在着明显的四倍体变异,比率分别为３０％,１６．２％和４２．９％,四倍体植株在花冠,气孔,花粉,种子和果实的形态和大小方面均与二倍体植株表现明显的差异。再生植株叶片气孔大小和气孔保卫细胞内叶绿体数目可以作为从再生植株中早期鉴别四倍体植株的可靠指标。组织培养可以成为获得四倍体甜瓜的有效途径。     

抗真菌蛋白Rs-AFPs生物学特性的研究

采用浸渗法制备萝卜种子抗真菌蛋白Rs－AFPs粗提液进行抑菌试验,结果表明：在萝卜种子发育过程中,Rs－AFPs是在一定时期（约开花后45d）开始合成并逐步积累的,因此充分成熟的萝卜种子Rs－AFPs粗提液具有较强的抑菌活性。Rs－AFPs的耐酸性、耐碱性、热稳定性及对不同病原真菌的抗性研究结果表明,在pH为4和10时．Rs－AFPs能保持90％的活性;在80℃水浴60min其活性仍为100％,在100℃水浴30min和45min,分别具有80％和50％的活性;在4℃下存放5、20、35、45d,Rs－AFPs的活性分别保持100％、90％、80％和70％。Rs－AFPs对植物丝状病原真菌具有广谱抗性,如对供试病原菌镰刀菌、疫霉菌、芭蕉炭疽菌和稻瘟菌均表现出颇强的抑菌活性,Rs－AFPs无抗细菌活性。     

海岸植物许树耐盐生物学初探

通过对许树叶主要矿质元素的积累、叶片形态结构和叶绿素含量的研究发现:①许树叶片气孔频度由淡水培育时的163.5个.mm-2减少至盐水培育的115.7个.mm-2,其减少幅度约30%,以此减少水分的蒸腾而适应其盐境;同时也减少了一些依靠蒸腾力而被动吸收的无机盐在叶中的积累,如Ca2+减少了约61.3%。②许树叶子积累较高的Na、Cl,在盐水条件下叶子积累的Na与Cl分别为3.74%和1.277%,是淡水条件下叶子积累的Na、Cl的19.7倍、1.2倍。③淡水培育的许树叶含有较高的叶绿素,其Ca、Cb与Ca+b分别为10.213 mg.g-1干重、3.474 mg.g-1干重和13.684 mg.g-1干重,与淡土植物大青叶的叶绿素含量相当;盐水条件下,许树成熟叶片的叶绿素含量明显减少,其Ca、Cb与Ca+b比淡水条件下许树叶片的分别减少了53.75%、44.35%和51.37%;但为了适应强光照的阳生生境,Ca/Cb仍为2.44,表现出其对环境的适应。     

PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。     

海南岛红树林植物区系组成与特征

文章研究了海南岛红树林植物区系组成和分布类型,探讨了该植物区系热带北缘特性及其与周边地区的联系,并分析了红树林植物区系特有成分贫乏的原因,概述了海南岛红树林严峻的现状和影响海南岛红树林保护与发展的主要因素。     

卡瓦胡椒离体再生体系的建立

[目的]建立卡瓦胡椒(Piper methysticum)的离体再生体系。[方法]以卡瓦胡椒的带芽嫩茎和嫩叶作为外植体,通过在培养基中添加不同的激素组合,来筛选最佳再生培养基。[结果]卡瓦胡椒的丛芽诱导培养基为MS+4 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+0.65%琼脂+3%蔗糖+0.012 5%PVP,最佳芽伸长根生长培养基为1/2MS+5 nmol/L JA+0.65%琼脂+3%蔗糖。[结论]为卡瓦胡椒的工业化生产提供了理论指导。     

天蚕抗菌肽B基因在广霍香抗病育种中的应用

用天蚕抗菌肽Ｂ基因转化广霍香,以期产生抗广霍香青枯病的转基因株系。通过农杆菌介导的叶盘法将抗菌肽Ｂ基因转入了广霍香的组织细胞,在Ｋａｎ的筛选培养基上经过丛芽途径获得转基因植株;采用ＤＮＡ Ｄｏｔ ｂｌｏｔ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ,ＲＮＡ Ｄｏｔ ｂｌｏｔ和大田攻毒试验证实的抗菌肽Ｂ基因已整合到再生植株的核基因组中,获得了高水平的表达,产生较强的抗病效果。     

香荚兰细胞培养及产香兰素研究初报

香荚兰的幼茎在MS＋BA1μg／mL＋NAA5μg／mL培养基上培养40d,其表面形成白色、块状的愈伤组织。愈伤组织在MS＋2,4－D1μg／mL＋BA1μg／mL＋NAA4μg／mL＋2．5％sucrose的半固体培养基上快速增殖培养,培养4周后培养物的重量增加7倍左右;在相同培养基的悬浮培养中,培养4周后培养物的重量增加6～8倍。从不同的培养物中分离出香兰素并测定其含量。     

番茄1-氨基环丙烷羧酸ACC合成酶基因的克隆及其反义基因表达载体的构建

从成熟番茄果实中分离mRNA,以Oligo（dT）为引物在AMV逆转录酶作用下合成ACC2cDNA第一链,以cDNA为模板通过PCR扩增ACC2基因,获得1.45kb的扩增片段,将此片段克隆到BS质粒的EcoRV位点上,对插入片段两端进行部分序列分析,随后,将此片段以反方向插入双元载体pBI151的35S启动子和NOS终止子之间,通过三条交配法将携带反义ACC2基因的中间表达载体pBA7转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。