枇杷属植物ISSR反应体系的建立和优化

首次通过正交实验,对影响枇杷属植物ISSR反应较大的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行筛选,并对扩增反应程序进行优化。优化后的反应体系为:25μL反应体系中,含10×buffer2.5μL,Mg2+浓度2.0mmol·L-1,Taq酶1.5U,引物0.3μmol·L-1,模板DNA60ng,dNTPs0.15mmol·L-1。反应程序为94℃预变性5mim;94℃变性1mim,退火温度70s,72℃延伸1.5mim,40次循环;72℃延伸7mim,4℃保存。     

“蜀脆枣”果实发育过程中糖酸代谢相关基因表达分析

以“蜀脆枣”为试验材料,采用HPLC测定果实发育过程中可溶性糖和有机酸组分及含量,利用qRT-PCR分析糖酸代谢相关基因的表达差异。结果表明,“蜀脆枣”果实发育前中期以积累葡萄糖和果糖为主,白熟期蔗糖含量迅速上升,至成熟期其含量占总糖的73.17%。果实发育过程中,苹果酸含量始终最高,成熟期达3.30 mg/g,占总酸的65.74%;柠檬酸含量次之,占成熟期总酸的31.08%;酒石酸含量最低。糖酸代谢基因表达及相关性分析表明,蔗糖含量与Zj SS3、Zj SPS1、Zj SPS2的表达呈极显著正相关,与 Zjv INV2的表达显著负相关,果实发育后期Zj SS3、Zj SPS1、Zj SPS2的高表达和 Zjv INV2的低表达共同促进成熟期蔗糖的迅速积累,是影响果实糖代谢的关键因素。Zj PEPC1的表达与苹果酸含量极显著正相关,其高表达是果实苹果酸积累的重要因素;Zj PEPCK1-1的表达与柠檬酸含量呈极显著正相关,是调控柠檬酸积累的关键基因。     

枇杷花药胚状体成苗条件的优化

以‘大五星’枇杷花药培养获得的子叶胚为材料,研究基本培养基、蔗糖浓度、4℃低温处理、饱和CaCl2脱水处理、"4℃低温+饱和CaCl2脱水"处理对胚状体成苗的影响,并优化枇杷花药培养及植株再生技术体系。结果表明:枇杷花药胚状体经"4℃低温+饱和CaCl2脱水"预处理7 d效果最佳;将预处理后的胚状体种于萌发培养基1/2MS+3%蔗糖,胚状体成苗率最高,为78.2%;将再生植株移栽入配比为腐熟有机肥∶园土∶锯末=1∶2∶1的基质中时,组培苗移栽成活率达85.25%。     

枇杷AS-PCR反应体系的建立和优化

【目的】建立和优化枇杷AS-PCR反应体系,为开展枇杷S基因快速鉴定奠定基础。【方法】以‘大五星’、‘早钟6号’和‘龙泉5号’为试材,通过正交实验设计对影响枇杷AS-PCR反应较大的Mg2+等5个因素的浓度进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和DPS 7.05统计软件对扩增结果进行方差分析。【结果】优化后的枇杷AS-PCR反应分析体系为:25μL反应体系中,含10×buffer2.5μL,Mg2+浓度2.0 mmol·L-1,Taq酶1.5 U,引物0.5μmol·L-1,模板DNA80ng,dNTPs0.4 mmol·L-1。反应程序为94℃预变性1 min;94℃变性30 s,退火温度30 s,72℃延伸1 min,35次循环;72℃延伸5 min,4℃保存。【结论】建立了基于S基因保守序列设计引物的枇杷AS-PCR反应体系,利用该体系成功确定了‘大五星’的S基因型为S2-S41,其中S41为新分离鉴定的枇杷S-RNase基因,它们在GenBank上的登录号分别为JQ228451和JX217035。     

3个李品种（系）芽需冷量的研究及休眠相关DAM基因的表达分析

【目的】探究3个李（Prunus）品种（系）的芽休眠和需冷量的差异及DAM基因表达与芽休眠的关系。【方法】调查统计了3个李品种（系）需冷量与萌芽率,采用生物信息学的方法对李的DAM基因进行鉴定,并用qRT-PCR对3个品种（系）李的DAM基因在芽的不同休眠阶段表达分析。【结果】7.2℃模型、0～7.2℃模型、犹他模型下“晚熟羌脆李”的需冷量均高于‘羌脆李’和‘脆红李’,且3个需冷量统计模型下‘羌脆李’和‘脆红李’的需冷量相同。鉴定了6个DAM基因（Pd DAM1、Pd DAM2、Pd DAM3、Pd DAM4、Pd DAM5、Pd DAM6）,但花芽与叶芽内休眠期与内休眠解除期（需冷区间）高表达基因都为DAM5,且在休眠解除期DAM基因的相对表达量均呈下降趋势。【结论】揭示了3个李品种（系）的花芽与叶芽需冷量的差异,筛选出与休眠解除最相关的DAM基因,结果为李芽休眠及熟期调节提供理论依据。     

阴雨对‘大五星’枇杷柱头可授性和花粉活力的影响

以‘大五星’枇杷为试材,研究了阴雨天气对枇杷柱头可授性和花粉活力的影响。结果表明:阴雨天气的持续均可以使枇杷柱头可授性和花粉活力不同程度地降低,降低授粉效率,对枇杷生产均有负面影响。此外柱头可授性检测表明,‘大五星’枇杷柱头可授期为开花当天至花后第5天,在此期任何一天只要天气晴朗,柱头随即恢复并具有较强的可授性,此特性可以一定程度地减少阴雨天气带来的负面影响。     

微生物有机肥与氨钙宝对黄花梨生长和果实品质的影响

安全、营养、优质已成为当今果品消费、生产关注的焦点。有机肥料、生物肥料将成为绿色农业、生态农业的主要肥料。笔者以黄花梨为试材，于2004年3—8、月开展了微生物有机肥配施氨钙宝对黄花梨营养生长和果实品质的影响研究。     

生物间遗传学在梨品种与梨黑星菌相互作用中的应用研究

用生物间遗传学的原理和方法对8个梨黑星菌单孢分离物与10个梨品种相互作用进行了分析,结果表明：供试梨品种中至少含有6个抗梨黑星病基因。其中,鸭梨不含抗病基因,菊水梨只含1个抗病基因,金川梨、金花梨、苍溪梨可能分别含1～2、1～3、1～4个抗病基因,其余品种可能分别含有1～5或1～6个抗病基因;根据分离物与梨品种相互作用的抗感表现,可把8个梨黑星菌划分为5～6个不同的类型。     

4个枇杷品种S基因型鉴定及新基因S_(31)-RNase序列分析

【目的】鉴定‘黄密’、‘贵妃’、‘早红’和‘软条白沙’4个枇杷品种的S基因型,为其生产栽培合理选择授粉树及杂交育种亲本选择提供科学依据。【方法】以苹果S基因高度保守区设计兼并引物对4个品种的基因组DNA进行PCR扩增,片段回收、克隆及测序,分别采用Blast软件和Bioedit软件进行同源性检索和结构分析。【结果】从参试的4个品种中共分离了4个S等位基因,分别为S2、S5、S6和S31,其中S31-RNase为新分离的枇杷S-RNase基因,Gen Bank登录号为:KC131133。所克隆获得的4个枇杷S-RNase基因均克隆到4个保守区(C2、C3、RC4和C5)和1个高变区(HV),具有与苹果S基因相同的氨基酸序列结构。【结论】确定了参试4个枇杷品种S基因型分别为:‘贵妃’S2-S6、‘黄密’S2-S5、‘早红’S5-S6、‘软条白沙’S6-S31。     

淹水胁迫对酸枣幼苗生理特性的影响

以盆栽酸枣幼苗为试材,设正常水分(对照)和淹水处理,通过分析淹水组与对照组在酸枣幼苗生长过程中叶片和根系的生理指标差异,探究淹水胁迫对酸枣幼苗生理特性的影响。结果表明,与对照相比,淹水胁迫显著降低了中后期酸枣幼苗叶片的叶绿素、可溶性蛋白含量,在处理第12天时的降幅分别为22.82%和32.88%,而对类胡萝卜素含量无显著影响。酸枣幼苗在淹水前中期较对照提高了相对电导率和过氧化氢含量,第3天分别增加了3.16百分点和18.89%。淹水处理的酸枣幼苗较对照在中后期提高了丙二醛和脯氨酸含量,且均在第9天时增幅最大,分别为22.74%和88.99%。酸枣幼苗在淹水后显著降低了CAT和POD活性,而在处理末期提高了SOD活性。酸枣幼苗在淹水第9天时根系活力和质膜透性最低,较对照分别显著降低了37.18%和24.81百分点。综上,酸枣幼苗通过调节叶片和根系的生理代谢对淹水胁迫表现出良好适应性。