猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法的建立和初步应用

根据Genbank上已报道的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列设计了2对LAMP引物(P-F3/P-B3、P-FIP/P-BIP),通过反转录-环介导等温扩增技术(RT-LAMP)反应条件的优化,建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-LAMP检测方法,并通过酶切的方法对阳性结果进行了验证。本方法最低可以检测到反应体系内1pg的PRRSV的RNA,表明本方法具有较高的检测灵敏度;通过在反应中加入SYBR-Green I荧光染料后可以方便地用肉眼对试验结果进行可视化判定。所以,本研究建立的PRRSV的RT-LAMP检测方法能够满足基层临床PRRSV病原的快速检测要求。     

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验蒋玉文，屠伟英，赵代民（中国兽药监察所）陈宝柱，许燕辉（内蒙古自治区兽医站）用复合培养基制备的三联或四防苗，免疫动物后其免疫持续期能否达到原菌苗的水平，这是确定...     

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的制备及攻毒保护研究

为研究现用猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株对流行毒株的免疫保护效果,以RTPCR进行PEDV CV777疫苗株、JS12流行株S基因克隆测序,进行PEDV S基因核酸序列分析与氨基酸序列分析。分别以转瓶工艺与细胞悬浮培养工艺培养Vero E6细胞,制备PEDV CV777株转瓶灭活苗与悬浮灭活苗。分别以PEDV转瓶灭活苗、悬浮灭活苗、PEDV流行株组织灭活苗(JS12株)产前30d免疫经产母猪;母猪产仔后14d进行仔猪攻毒保护试验。核酸序列分析显示,PEDV CV777株S基因与流行毒株的相似性在96.4%~99.7%之间,氨基酸序列相似性在96.7%~99.5%之间。转瓶工艺制备PEDV抗原效价为107.0 TCID50/mL,悬浮培养制备PEDV抗原效价为108.5 TCID50/mL。攻毒保护试验显示,悬浮灭活苗免疫母猪后,仔猪有2/10发病,保护率为8/10,转瓶灭活苗组发病率为8/10,保护率仅为2/10;组织灭活苗组9/10发病;对照组10头全部发病。该试验证明,提高PEDV CV777株的抗原含量,能够有效提高疫苗对PEDV流行毒株的保护效果。     

黑龙江某猪场繁殖障碍性疾病病原分析

种猪繁殖障碍性疾病主要以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产出无活力的弱仔、畸形仔、少仔和公、母猪的不育等为特征,给养猪业带来了巨大的经济损失.能够引起母猪繁殖障碍的病因比较复杂,既包括病原因素,又包括非病原因素.危害最严重的主要是病毒感染,如猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪日本乙型脑炎病毒(JEB)和猪瘟病毒(CSFV),另外猪圆环病毒(PCV)感染引起的母猪繁殖障碍也引起了人们的关注[1].对于发生母猪繁殖障碍性疾病的猪场,只有弄清发病主要原因,采取相应的措施才能有效地控制该病的流行.     

鸡布氏艾美耳球虫致病性研究

用１８日龄公雏作为试验对象,以增重、病变和死亡为判定指标,用Ｅ．ｂｒｕｎｅｔｉ的０．５万／只、１万、５万、１０万、２０万、５０万和１００万／只为接种梯度,研究了布氏艾美耳球虫的致病性。结果表明：接种０．５万／只至２０万／只剂量的Ｅ．ｂｒｕｎｅｔｉ都明显影响鸡的增重;（与对照组相比,均存在极显著性差异（Ｐ＜０．０１）,各剂量组间增重无差异,）５０万／只和１００万／只剂量组的鸡出现减重。５０万／只剂量组鸡死亡５０％,１００万／只剂量组鸡死亡１００％;Ｅ．ｂｒｕｎｅｔｉ接种５万／只剂量组及以上各组鸡饮食欲消失,鸡失去自洁行为,粪量少,含有粘液和血液;剖检病变主要在小肠至直肠,肠壁变薄,易碎,呈粉红色至暗红色,肠粘膜上有小的出血点,肠内容物以粘液和血液为主。部分鸡的盲肠内容物干、呈暗红色。（病变计分为：对照组０分,０．５万／只为０．５７＋;１万／只０．０３＋;５万／只１．１７＋;１０万／只１．５０＋;２０万／只２．２３＋;５０万／只３．６４＋;１００万／只３．８３＋。）１００万／只剂量组中有两只鸡出现腿麻痹症状,不能站立。     

产气荚膜梭菌α—β融合基因的构建

用PCR从含产气荚膜松菌β毒素基因的质粒pXETB2中扩增出β毒素基因，NcoⅠ和BamHⅠ双酶切该β毒素基因，回收0.93kb的β毒素基因片段，再用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切含产气荚膜梭菌α毒素基因质粒pXETA1,与上述回收的β毒素基因片段连接，转化至受体菌BL21（DE3）中，经NcoⅠ，NotⅠ酶切反应鉴定和苷酸序列分析证实，获得的重组质粒pXCPAB1含有α－β融合基因，重组菌株BL21（CD3）（pXCPAB1)表达产物经ELISA检测和SDS－PAGE分析，表明重组菌株可以表达α－β融合蛋白。     

脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响

为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响,应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚,解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％,Ｐ＞０．０５）,但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后,孵化率显著降低（４７．６％,Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻,解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂,胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％,Ｐ＞０．０５）。移植试验表明,在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似,与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异,但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。     

多花黑麦草饲喂奶牛效果研究

设4种不同梯度多花黑麦草Lolium multiflorum和配合饲料的日粮组成对24头黑白花奶牛进行饲喂试验,以期探讨最佳经济效益的日粮组成,为推广饲用玉米Zea mays-多花黑麦草种植系统提供理论依据.结果表明,随配合饲料饲喂量的减少,多花黑麦草采食量增加,青贮玉米的采食量不断减少.以每头饲喂6 kg配合饲料 30 kg多花黑麦草 自由采食青贮玉米试验组(2组)奶牛每天平均产奶量最高,达到11.59kg/头.以每头饲喂5 kg配合饲料 40 kg多花黑麦草 自由采食青贮玉米试验组(3组)奶品质最好,经济效益最高.