包含体表达基因工程牛生长激素提取、变复性及纯化的研究

为了取得较好的复性效果.对重组牛生长激素的纯化及变复性条件进行了研究.结果表明;发酵菌体高压匀浆破碎、离心得到的包含体在7.5 mol/L尿素中变性24 h后.以100 mmol/L Tris·HCI pH 10.0稀释至尿素浓度4.5 mol/L,4℃复性48 h,对20 mmol/L Tris·HCI pH 9.0透析除盐可以成功对重组牛生长激素复性;采用截留分子量100 kD、5 kD超滤膜对复性重组牛生长激素浓缩,FPLC纯化后可得到高纯度的目标蛋白.     

猪流行性腹泻疫苗研究进展

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是目前困扰养猪业发展的重要病原之一,可造成猪群暴发流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)和初生仔猪大量死亡,给养猪业带来重大经济损失.目前PED的主要防控手段是疫苗免疫,包括全群普免以及疫苗接种...     

猪戊型肝炎的诊断技术研究

戊型肝炎是一种广泛传播流行的人兽共患病,而我国是猪戊型肝炎和人戊型肝炎的高发流行区,故亟需建立一个兼具特异性、敏感性和稳定性的猪戊型肝炎病毒(HEV)检测诊断方法,以维持一个健康安全的养殖环境和人畜和谐相处的公共环境.现根据相关文献,对猪戊型肝炎的临床症状、实验室检测方法、诊断及评估方法等进行总结介绍,以期为建立一个准...     

重组猪α-干扰素的纯化及其抗病毒活性测定

分别采用PEG 6000沉淀法和Sephadex G-50凝胶色谱法纯化毕赤酵母分泌表达的重组猪α-干扰素(PoIFN-α)。正交试验结果显示:PEG 6000沉淀法最佳分离条件为pH 6.0、NaCl 0.2 mol/L、PEG 60000.1 g/mL,蛋白回收率约80%;纯化后蛋白效价为2.9×10~3 IU/mL,比活为1.04×10~3 IU/mg。通过Sephadex G-50凝胶色谱纯化,重组PolFN-α的回收率为60%左右,纯度达到90%;纯化后蛋白效价为8×10~3 IU/mL,比活为6.7×10~3 IU/mg。     

重组猪α干扰素抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞增殖的初步研究

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)/Marc-145细胞体系验证重组猪α干扰素(rPolFN-α)制剂的抑制病毒作用.结果表明:rPolFN-α稀释至1010可有效预防PRRSV感染Marc-145细胞;当rPolFN-α稀释至1010可有效抑制病毒在Marc-145细胞上的增殖.研究结果在细胞水平上明确了rPoIFN-α对PRRSV的抑制作用,为进一步将rPoIFN-α应用于动物试验提供了参考.     

中国猪流行性腹泻病毒分子流行病学研究进展

2010—2011年中国境内的猪流行性腹泻（PED）大流行给养猪业造成重大经济损失。因疫苗免疫无法控制疫病流行,因此学者普遍认为猪流行性腹泻病毒（PEDV）出现了新的变种。论文综合分析了这个时期国内学者PEDV分子流行病学的研究结果,又对国内新近分离的PEDV的11个毒株的全基因序列进行遗传进化分析,进一步确定了国内暴发流行的PEDV毒株已远离中国86年分离的毒株和欧洲毒株CV777,成为了一个新的基因型。毒株基因变异应该是造成免疫失败和仔猪死亡率高的主要原因。进一步分析发现分离毒株的全长基因序列和棘突蛋白（S）基因序列长度有差异,其他基因长度保守性强。S基因的变异率高于其他基因,特别是短期内基因突变主要发生于S基因。综合分析认为国内变异毒株虽与韩国毒株遗传关系较近,但从境内毒株衍生和进化而来的可能性更大。因2006年已经观察到PEDV的免疫失效和PED流行,2010—2011年PED集中暴发可能是病原长期突变和适应性积累的结果,提示今后应充分发挥全国动物疫病预警网络的作用,加强毒株进化检测和疫病预警,优化疫病的防控手段,降低疫病发生频次和规模,减小疫病发生损失。     

片形吸虫遗传变异及分子分类的研究

从染色体分析、同工酶多态性、可溶性蛋白图谱、分子遗传学分析等角度,综述了近年来国内外有关片形吸虫遗传变异、分类鉴定的研究进展.介绍了用于片形吸虫遗传变异及分子分类研究的几种分子遗传学方法.     

我国片形吸虫(Fasciola)线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因(cox1)部分序列的多态性

用γ^33P对引物进行标记，对来自国内不同地区不同宿主的片形吸虫(Fasciola)的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基I基因(pcox1)部分序列进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析，结果76个虫体均成功地扩增出约450bp的基因片段；SSCP分析显示，不同地区或同一地区的不同样品在pcox1的SSCP带型上存在多态性；代表性样品的测序结果表明，其碱基序列存在差异。试验结果显示，我国片形吸虫pcox1序列种内变异不明显，种间变异显著．表明cox1序列可以作为片形吸虫分类鉴定中一个可靠的遗传标记。     

ssRNA病毒侵染宿主细胞与细胞抗病毒作用的研究进展

单链RNA(single-strandRNA,ssRNA)病毒是感染人和动物的主要病原体之一，部分ssRNA病毒感染宿主后会对宿主产生致命的影响，也有部分ssRNA病毒进入宿主后不会引发明显的病变和临床症状。ssRNA病毒与宿主细胞之间的感染与抗病毒所产生的炎症反应、细胞凋亡、细胞溶酶体/自噬应答均是动物机体在ssRNA病毒入侵后产生的一系列抗病毒活动。大量研究解析了ssRNA病毒与宿主细胞之间的相互关系，但仍有许多未知领域阻碍着抗ssRNA病毒研究的前进步伐。基于已公开发表的研究论文，笔者梳理并分析了ssRNA病毒与被侵染细胞之间的相互关系，为后续研究ssRNA病毒与宿主细胞应答反应提供理论支持。     

甲醛灭活猪流行性腹泻病毒条件的优化

为优化甲醛灭活猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的条件，检测了不同体积分数甲醛对PEDV作用不同时间的灭活效果。灭活条件优化实验结果显示：利用终体积分数为0.05%、0.10%、0.20%和0.30%的甲醛彻底灭活PEDV的作用时间依次为30 h、24 h、18 h和12 h;综合生物安全和病毒灭活效果，确定甲醛灭活PEDV的适宜体积分数和作用时间分别为0.20%和24 h;该优化条件下的灭活rPEDV-D375F病毒液中，病毒抗原质量浓度为1.05×10^-5 g/L,且无厌氧菌、需氧菌、真菌生长。利用由灭活rPEDV-D375F病毒液配制的疫苗免疫母猪，母猪产生了较高的中和抗体水平(平均中和抗体效价为1∶139.4)。