2种常见伞滑刃线虫的特异PCR检测方法

包括松材线虫和椰子红环腐线虫在内的伞滑刃属线虫形态上相似性高,形态鉴定难度较大。本文通过对伞滑刃属常见线虫群体ITS2区序列比对、分析,设计了木质包装材料检疫中常见的泰国伞滑刃线虫和豆伞滑刃线虫特异引物对各1对,并研究了这2种常见伞滑刃线虫的PCR检测方法,使用本文特异引物可分别特异、快速检测出这两种线虫。     

土壤残留氮素生物利用效率及其提高途径综述

综述了国内外土壤残留氮素生物利用效率及其提高途径的研究进展。通过对农田土壤氮素残留的影响因素的分析,论述了施肥、降水和灌溉、土壤性质、土地利用方式及作物种类与耕作方式等对土壤氮素残留的关系,并在此基础上重点探讨了作物对土壤残留氮的利用状况及其提高残留氮利用率的有效途径。     

实时荧光PCR检测马铃薯白线虫技术研究

马铃薯胞囊线虫是马铃薯上最重要的有害生物之一,也是我国特别关注的重要植物检疫性线虫.针对马铃薯白线虫ITS序列,我们设计了引物和TaqMan探针,使用15种马铃薯胞囊线虫群体和4种其它胞囊线虫样品进行验证,可高度灵敏地检测单个马铃薯白线虫的胞囊或幼虫,最高检测灵敏度达到10fs;同时开展了混合样品和未知样品的检测,证明了引物的专化性和TaqMan探针特异性.该检测方法可自动化检测马铃薯白线虫并进行定量,适合进行标准化的常规检测.     

应用TaqMan-MGB探针进行松材线虫的实时荧光定量检测技术研究

 松材线虫是国际公认的最重要的检疫性有害生物之一,也是我国2类检疫危险性有害生物,我国口岸多次从货物的木质包装中截获该线虫。由于松材线虫与拟松材线虫在形态上极其相似,难以区分,幼虫更无法用于鉴定。传统的形态学鉴定、生化以及其他分子技术等方法存在费时、准确度不高、灵敏度低等缺点,不易形成标准。我们设计筛选一对引物以及一条MGB探针,对松材线虫进行实时荧光PCR检测。建立了一条从1 pg到10⁴pg标准曲线,相关系数r=0.965。该检测方法省时、准确、快速、无污染。     

我国松材线虫Bursaphelenchus xylophilus发生情况和分布调查

1982年在江苏南京少数黑松(Pinus thunbergii)上发现的松材线虫(BursaphelenchusXylophilus),现在几乎遍布南京的城区和近郊区,并不同程度地扩散至邻近的江宁、江浦、六合、溧水、句容各县和镇江市.疫区林分面积超过20万亩.在1983—1987年间,主要由松材线虫诱发枯死的松树累计约60万株,其中1986年和1987年死树最多,分别为21.5万株和20.2万株.六合、江浦、句容与镇江、溧水分别是1986年和1987年发现的新疫区,当前这些疫区的特点或是疫点零星或是松树受害很少,多次检查传说中疫点安徽芜湖赭山公园、江苏昆山亭林公园以及浙江舟山的枯死松样,从未发现松材线虫,但在较多样本中都查见拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus).调查表明,前几年疫区内绝大多数病株都为黑松,但在1986年1987年,一些松林内也出现了相当数量的发病马尾松(P.massoniana).在不同年份零星发病的其它树种计有黄松(P.thunbergii×P.mssso-niana)、火炬松(P.taeda)、白皮松(P.bungeana)、海岸松(P.Pinastet)和千头赤松(P.densifl-ora).在疫区广泛种植的雪松(Cedras dedara)从未发现自然发病,多次人工诱发,这种树种表现高度抗病.     

建立种、养、加一体化产业链促进乳业健康、稳定发展

新疆呼图壁种牛场始建于1955年,经过60年的努力和探索,建立了种、养、加一体化的全产业链,初步建成了从田间到餐桌的乳品质量追溯体系,为奶业健康稳定发展奠定了坚实的基础。奶牛存栏从建场初期的400多头牛,发展到2014年的2万头,成母牛单产从上世纪90年代以后一直保持在9t以上,乳制品加工企业(西域春乳业公司)的乳品产量从1987年的5 358t,增长到2014年7万多t,液体乳品产销量多年来稳居新疆第1位。     

腐烂茎线虫rDNA-ITS序列分析

利用一对通用引物rDNA1/rDNA2扩增6个腐烂茎线虫供试群体的rDNA-ITS区域,获得序列长度不等的片段.Des-1、Des-2和Des-3群体扩增片断长度均为1 130 bp.而Des-5、Des-6和Des-7群体的扩增片段长度均为942 bp,与以上群体相比,在ITS区具有一个188 bp的缺失片段.序列比对后确定缺失片段位于ITS1区,而且该片段含有多个可重复小片段,这可能是造成碱基缺失的原因.根据遗传进化分析可将供试线虫分为两个大的群体.     

实时荧光PCR技术在植物线虫诊断中应用

定量荧光PCR技术发明以后，很快在生物学各个领域得到广泛应用，本文介绍了定量荧光PCR的种类、原理以及优缺点，详细论述定量荧光PCR在线虫检测研究中方法的建立以及应用，同时对实验中注意事项进行分析，最后对该技术在线虫研究中进一步应用进行展望。     

超分支滚环扩增法检测小麦矮腥黑穗菌

 【目的】建立小麦矮腥黑穗病菌（Tilletia controversa Kühn,TCK）的超分支滚环扩增（hyper- branched rolling cycle amplification,HRCA）检测体系,为小麦矮腥黑穗病的鉴定以及早期诊断提供了一种新的稳定、可靠的检测技术。【方法】锁式探针包含一个公共连接序列和在探针两端与靶DNA序列互补的2个序列。根据TCK的差异序列设计锁式探针两端序列,以此为基础建立了TCK超分支滚环扩增反应体系。以优化的HRCA反应条件为基础,确定检测体系的特异性和灵敏度。比较HRCA体系和常规PCR体系的性能,并利用这2种体系对来自中国出入检验检疫局截获的51个小麦样品进行了验证检测。【结果】HRCA体系能专一地检出小麦矮腥黑穗菌的DNA靶带,而TCT、TCL等近源种及健康小麦样品都不能扩增。HRCA检测TCK靶序列质粒DNA的下限为1 fg?μl-1,检测基因组DNA的下限为10 pg?μl-1,检测灵敏度比常规PCR检测体系高10倍。HRCA检测体系具有很好的特异性、灵敏度和准确性,更适合于TCK的检测及鉴定。【结论】稳定、灵敏、特异的小麦矮腥黑穗菌的HRCA检测体系的建立,为小麦矮腥黑穗病的早期诊断及其近源种的多靶标检测提供了同步检测技术。