TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒

为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10-3fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10-2 fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。     

整合普洱茶山资源 打造普洱山·普洱茶品牌

宁洱县是著名的普洱茶核心原产地、加工地和集散地,种茶产茶历史悠久。本文阐述了宁洱县普洱茶品牌基本情况,普洱山·普洱茶品牌的打造之路,以及打造联合品牌所取得的成效。     

氮素供应对欧洲云杉根系生长发育效应分析

研究氮素供应对欧洲云杉[Picea abies (L) Karst]无性系根系生长发育的施肥效应,进而为该树种苗木根系发育的施肥调控提供依据。以欧洲云杉优良无性系pab081140 3年生苗木为试材,对不同氮素供应剂量下盆栽植株的根系生长发育指标进行测定分析。结果表明：与对照相比,测试剂量N-6（含氮量为46%的尿素6 g/株）、N-9（含氮量为46%的尿素9 g/株）、N-12（含氮量为46%的尿素12 g/株）均促进了根长、根表面积、根平均直径与根体积的生长,同时提高了根系生物量、植株总生物量和根系含氮量及植株总含氮量的水平,根系生物量占植株总量的比值和根冠生物量比值随之提高,但不同剂量的施肥效应存在差异;其中,N-9剂量处理下的欧洲云杉根系形态指标均是对照的1.3倍以上（1.38~1.89倍）,而根系生物量、植物总生物量、根冠生物量的比值也显著高于对照(P<0.05);此外,根含氮量与植株总含氮量分别比对照提高了73.2%和80.9%。由此可知,N-9剂量对欧洲云杉pab081140无性系根系生长发育的促进效果最为明显。     

致病性大肠杆菌微胶囊口服疫苗的制备及对其免疫功能的评价

通过喷雾-界面配位改良法制备了大肠杆菌微胶囊口服疫苗,平均直径为10μm,包被率为65％;并通过体外试验证实了本疫苗能避免胃酸的破坏且肠溶性良好;利用淋巴细胞转化实验、玻板凝集试验、ELISA试验测定了其免疫效果,试验数据表明,大肠杆菌微胶囊口服疫苗能有效激活细胞免疫、体液免疫、黏膜免疫,可产生大量的IgA和IgG,并且使用方便,安全有效。     

羊粪沼液微生物总DNA提取方法优化比较研究

[目的]目前沼液污泥中99;的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取.[方法]研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥、溶菌酶裂解以及DNA纯化等优化方法,并测定优化效果.[结果]后续增加的步骤对提高总DNA的提取效率及质量十分有效,所得DNA在得率、大小以及纯净度方面都有所提高,可以满足后续分子实验的要求.[结论]以SDS法为基础,用TENP和PBS洗涤菌泥,添加适量溶菌酶,并适当延长反应时间至3h,再经纯化柱吸附和洗脱的方法可以获得更高质量的羊粪沼液总DNA.     

北美红杉的标准化离体繁殖技术研究

以两种类型北美红杉（观赏型和用材型）的嫩枝为外植体,通过植株再生与生根条件的研究,建立起标准化的离体繁殖技术体系。研究发现：北美红杉是一种较易增殖的木本植物,其根的诱导对无机盐浓度敏感;两种类型增殖的适宜培养基均是MS + 6-BA 0.1mg/L + NAA 0.1mg/L + KT0.1 mg/L,而生根的最佳培养基是1/4MS + NAA 0.4 mg/L,但观赏型北美红杉较用材型生根效果好。     

苦菜和蒲公英中总黄酮含量及其抗氧化活性分析

为加强苦菜和蒲公英的进一步开发利用,研究了乙醇浓度、料液比和提取时间对苦菜和蒲公英总黄酮得率以及不同浓度提取物对苦菜和蒲公英抗氧化活性的影响。结果表明：苦菜和蒲公英总黄酮提取的最优化条件为提取液乙醇的浓度为60％,料液比为1：30,超声提取时间为0．5h,总黄酮得率分别为6．44％和17．56％。苦菜和蒲公英提取物对DPPH自由基清除率随样品提取物浓度的增大而升高,在浓度为9．6rag·mL^-1时,苦菜和蒲公英提取物的DPPH自由基清除率都达到最大,分别为76．47％和80．39％。     

干旱胁迫下青藏高原4种灌木生物量和根系变化特征及抗旱性

以江孜沙棘(Hippophae gyantsensis)、锦鸡儿(Caragana sinica)、砂生槐(Sophora moorcro tiana)、唐古特莸(Caryopteris tangutica)4种青藏高原灌木树种为试材进行干旱胁迫模拟盆栽试验,通过对比干旱胁迫后4种灌木生物量和根系特征值的数量变化差异,对供选树种进行抗旱性能分析与评价.结果表明,锦鸡儿根冠比增加最多(233.43％),而砂生槐则基本保持稳定,江孜沙棘和唐古特莸则呈现不同程度的增加.干旱胁迫后4种灌木微细根根长、表面积、根尖数均呈现不同程度的增加,其中唐古特莸根长增加最大,达112.11％,江孜沙棘次之,锦鸡儿和砂生槐分别增加了38.84％和24.55％;根表面积方面,干旱条件下的苗木比对照增加幅度的大小为:唐古特莸＞江孜沙棘＞砂生槐＞锦鸡儿;根尖数增幅介于45.89％～57.29％之间.干旱胁迫后锦鸡儿微细根表面积、根尖数占全根比例下降,而其他3种灌木根系特征值占全根比例均呈上升趋势.隶属函数值综合评价表明,抗旱性强弱顺序为:唐古特莸＞锦鸡儿＞江孜沙棘＞砂生槐.     

基于表型性状的甜瓜核心种质构建

【目的】以国家西瓜甜瓜种质资源中期库中的1 200份甜瓜种质为材料,根据19个表型性状的遗传变异,构建甜瓜核心种质。【方法】原始种质按照地理来源分为22组,各组种质根据表型数据分别进行聚类,按照不同比例(10%、15%、20%、25%和30%)取样,构建候选核心种质。通过比较候选样本的遗传多样性指数、表型保留比例、表型频率方差、变异系数等4个检验指标,最终确定甜瓜核心种质,并对其代表性进行评价。【结果】通过比较不同的取样比例,初步获得5个候选样本,其中采用15%的取样比例构建的核心种质包含189份甜瓜种质,其4个检验指标均达到最佳水平,确定为最终的核心种质。此核心种质各性状的特征值和表型频率分布与原始种质基本一致。【结论】研究所构建的甜瓜核心种质具有较好的代表性和遗传多样性,可作为原始种质代表性样本。     

柴达木盆地不同居群白刺土壤养分空间变异性（英文）

在青海柴达木盆地选择6个重要的唐古特白刺(Nitraria tangutorum)分布区域,通过测定不同白刺居群的土壤p H、有机质(OM)、全氮(N)、全磷(P)、全钾(K)、碱解N、有效P和速效K含量,对比不同白刺居群间的土壤养分差异,分析其空间变异性以及与地理位置的相关关系。结果表明:1土壤养分含量存在显著空间变异性,土层深度对土壤养分含量有显著影响,但各养分指标含量随土层深度变化规律不明显。2 3个土层深度(0~15,15~30,30~45cm)土壤p H、OM、全N、全P、全K、碱解N、有效P、速效K含量平均值变化范围分别是:8.37~9.21、3.34~20.68、0.18~1.21、0.35~0.75、16.12~22.04、5.13~553.28、1.10~52.54 g/kg和103.83~562.28 mg/kg。3 3个土层深度的各土壤养分含量平均值之间相关性分析结果表明,土壤养分含量之间存在不同程度的相关性。4 3个土层的土壤OM和全N含量纬度、经度和海拔分别呈显著正相关、负相关和负相关,表层土壤(0~15 cm)有效P和速效K含量与纬度、经度和海拔分别呈显著正相关、负相关和负相关,经度和海拔还显著影响30~45 cm深土壤速效K含量。此外,综合分析各养分含量发现怀头他拉镇白刺居群土壤肥力最高,而茶卡镇和乌兰柯柯镇肥力相对较低。