罗田甜柿Ty1-copia类逆转座子RNaseH-LTR序列的分离和特性分析

逆转座子序列信息的获得,对了解其在基因组中的行为及系统学研究有重要价值。本试验从罗田甜柿（Diospyros kaki Thunb. 'Luotian-tianshi'）基因组中分离31个RNaseH-LTR（Long Terminal Repeat,长末端重复）序列,并利用IRAP（Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism,逆转座子间扩增多态性）技术对部分序列相应的逆转座子家族在柿属植物中的转座活性及分布情况进行初步探讨。序列分析结果表明,至少有10个Ty1-copia类逆转座子家族得到扩增;其家族间普遍表现高度异质,碱基替换、插入或缺失突变,以及翻译成氨基酸后发生不同程度的终止密码子突变、氨基酸取代和移框突变等,是产生高异质性的原因;此外,其家族内部某些序列间的相似性极高,可能是寄主基因组与逆转座子间互惠关系的体现。应用部分逆转座子引物的IRAP分析结果表明,相应的逆转座子家族在柿属植物中普遍存在,其分布广泛,拷贝数高,转座活性强,具有进一步开发为多种逆转座子分子标记的潜力。     

部分柿属雄性种质巨大花粉、花粉离体及其在罗田甜柿柱头上的萌发率

甜柿品种一般仅着生雌花,少数雌雄同株,具有雄花的优良甜柿亲本很少,限制了完全甜柿杂交育种进程。2n花粉在植物多倍体育种中具有重要价值。本研究以12份柿属雄性种质为试材,进行花粉离体和活体萌发率以及巨大花粉比例检测。结果表明:供试雄性种质花粉萌芽率为20.1%-38.5%;除台湾正柿及油柿外,其余试材的花粉均能在罗田甜柿的柱头上萌发;雄株2号、雄株3号、雄株8号不含巨大花粉,其余试材均有不同比例的巨大花粉存在。     

柿性别分化及性别连锁标记研究进展

柿(Diospyros kaki Thunb.)起源中国,按其花性表现可分为雌株、雄株、雌雄同株和三全同株等类型。笔者对柿及其部分近缘植物的性别类型、花芽分化类型及特点、性别决定细胞学及分子机制、雌雄性别遗传规律及与雄性性别连锁的分子标记等研究进展进行扼要总结。此外,还对原产我国中部大别山区的完全雄性柿种质的起源及其利用价值进行初步探讨,以期为柿性别调控机制研究以及完全甜柿遗传改良中的亲本选育提供科学依据。     

部分中国柿品种及其胚培养后代的染色体倍性研究

对原产中国的２０个无核或少核柿品种和６个有核品种（类型）及日本无核品种‘平核无’和有核品种‘正月’成年树的茎尖进行了染色体数目检测,同时观察了其中的３个中国无核或少核品种和另２个日本有核品种‘西村早生’、‘前咱次郎’胚培苗根尖的染色体数目。结果表明除‘平核无’为九倍体（２ｎ＝９Ｘ＝１３５）外,其余品种均为六倍体（２ｎ＝６Ｘ＝９０）。可见供试中国柿品种的无核性状与染色倍性变化无直接关系。     

应用同工酶技术鉴别同物异名柿

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了同物异名柿品种过氧化物酶(POX)、α-淀粉酶(α-AMY)和超氧物歧化酶(SOD)同工酶.对17组69个供试品种的3种同工酶谱带类型的分析结果表明(1)有8组23个品种的同工酶鉴定结果与形态鉴定结果一致;(2)有2组4个品种的鉴定结果与形态鉴定完全不符;(3)其余6组中有5个品种可被单独鉴别,剩余品种可被划分为新的小组,每组内供试品种表现相同的同工酶谱带类型.     

完全甜柿新品种‘鄂柿1 号’

 ‘鄂柿1 号’是在大别山区调查发现的甜柿新类型, 其果实较大, 种子较少, 可自然脱涩, 外观和食用品质优良, 较耐瘠薄, 是继‘罗田甜柿’后发现的极具商品价值、我国原产的完全甜柿新品种。     

中国柿种质资源鉴定及亲缘关系研究进展

柿（Diospyros kakiThunb.）属于柿科（Ebenaceae）柿属（Diospyros Linn.）,是柿属植物中作为果树栽培的代表种。Kajiura根据果实能否在树上自然脱涩与种子多少、果肉颜色的关系将柿分为4种类型：完全甜柿（Pollination-constant nonastringent,PCNA）,     

ISSR及其在果树上的应用

ISSR是一种基于微卫星序列发展起来的新的分子标记,具有简便、稳定、DNA多态性高等优点。ISSR标记呈孟德尔式遗传,大部分ISSR标记为显性标记。综合有关文献就ISSR的原理、操作及其在果树种质鉴定、遗传多样性检测、亲缘关系分析和遗传图谱构建等方面的应用和进展进行简要的阐述。     

罗田甜柿原生质体分离、培养及植株再生

 以‘罗田甜柿’休眠芽茎尖诱导的愈伤组织为试材, 对原生质体分离培养技术进行了研究。结果表明: ( 1) 继代10 d 的愈伤组织最适于分离原生质体; ( 2) 优化的酶解体系为CPW+ 0. 5% Cellulase Onoruka R-10+ 0. 03% Pectinase from Aspergillus Niger+ 0. 7 mol/ L Mannitol+ 1% PVP-10; ( 3) 原生质纯化方式以上浮法为好, 100×g 离心6 min; ( 4) 琼脂糖念珠培养5~ 6 d 观测到第1 次分裂, 多为不均等分裂, 60~70 d 形成肉眼可见的小愈伤组织, 愈伤组织增殖到5 mm 以上, 分化成苗, 转至生根培养基生根。     

部分柿属植物SRAP-PCR反应体系的优化

SRAP技术是一种多态性和信息量丰富的新的分子标记技术,其技术简便、快速,不需预知序列信息,近年来在植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图的构建以及比较基因组学研究等方面得到广泛应用。为了建立柿属植物SRAP技术体系,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq聚合酶、引物浓度等因素进行了优化。确定优化的反应体系为:模板DNA30ng,Buffer1×,Mg2+2.5mmol/mL,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,引物0.3μmol/L,反应总体积25μL。该体系在柿属植物6种1类型共29个基因型中获得较好的扩增结果,可望在柿属植物起源和进化研究中应用。