部分中国柿品种及其胚培养后代的染色体倍性研究

对原产中国的２０个无核或少核柿品种和６个有核品种（类型）及日本无核品种‘平核无’和有核品种‘正月’成年树的茎尖进行了染色体数目检测,同时观察了其中的３个中国无核或少核品种和另２个日本有核品种‘西村早生’、‘前咱次郎’胚培苗根尖的染色体数目。结果表明除‘平核无’为九倍体（２ｎ＝９Ｘ＝１３５）外,其余品种均为六倍体（２ｎ＝６Ｘ＝９０）。可见供试中国柿品种的无核性状与染色倍性变化无直接关系。     

应用同工酶技术鉴别同物异名柿

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了同物异名柿品种过氧化物酶(POX)、α-淀粉酶(α-AMY)和超氧物歧化酶(SOD)同工酶.对17组69个供试品种的3种同工酶谱带类型的分析结果表明(1)有8组23个品种的同工酶鉴定结果与形态鉴定结果一致;(2)有2组4个品种的鉴定结果与形态鉴定完全不符;(3)其余6组中有5个品种可被单独鉴别,剩余品种可被划分为新的小组,每组内供试品种表现相同的同工酶谱带类型.     

完全甜柿新品种‘鄂柿1 号’

 ‘鄂柿1 号’是在大别山区调查发现的甜柿新类型, 其果实较大, 种子较少, 可自然脱涩, 外观和食用品质优良, 较耐瘠薄, 是继‘罗田甜柿’后发现的极具商品价值、我国原产的完全甜柿新品种。     

柿性别分化及性别连锁标记研究进展

柿(Diospyros kaki Thunb.)起源中国,按其花性表现可分为雌株、雄株、雌雄同株和三全同株等类型。笔者对柿及其部分近缘植物的性别类型、花芽分化类型及特点、性别决定细胞学及分子机制、雌雄性别遗传规律及与雄性性别连锁的分子标记等研究进展进行扼要总结。此外,还对原产我国中部大别山区的完全雄性柿种质的起源及其利用价值进行初步探讨,以期为柿性别调控机制研究以及完全甜柿遗传改良中的亲本选育提供科学依据。     

ISSR及其在果树上的应用

ISSR是一种基于微卫星序列发展起来的新的分子标记,具有简便、稳定、DNA多态性高等优点。ISSR标记呈孟德尔式遗传,大部分ISSR标记为显性标记。综合有关文献就ISSR的原理、操作及其在果树种质鉴定、遗传多样性检测、亲缘关系分析和遗传图谱构建等方面的应用和进展进行简要的阐述。     

柿属植物种质资源及其利用研究现状

全世界的柿属植物共约１９０种，主要分布在热带和亚热带，尤其是东亚。我国产５７种６变种１变型，主要分布在西南和华南地区。以作为果树栽培的柿属植物为对象，对其经济价值、起源、栽培历史、品种资源、品种演化、性状遗传和品种选育等方面的研究现状和进展进行了较为详细的阐述。     

罗田甜柿原生质体分离、培养及植株再生

 以‘罗田甜柿’休眠芽茎尖诱导的愈伤组织为试材, 对原生质体分离培养技术进行了研究。结果表明: ( 1) 继代10 d 的愈伤组织最适于分离原生质体; ( 2) 优化的酶解体系为CPW+ 0. 5% Cellulase Onoruka R-10+ 0. 03% Pectinase from Aspergillus Niger+ 0. 7 mol/ L Mannitol+ 1% PVP-10; ( 3) 原生质纯化方式以上浮法为好, 100×g 离心6 min; ( 4) 琼脂糖念珠培养5~ 6 d 观测到第1 次分裂, 多为不均等分裂, 60~70 d 形成肉眼可见的小愈伤组织, 愈伤组织增殖到5 mm 以上, 分化成苗, 转至生根培养基生根。     

部分柿属植物SRAP-PCR反应体系的优化

SRAP技术是一种多态性和信息量丰富的新的分子标记技术,其技术简便、快速,不需预知序列信息,近年来在植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图的构建以及比较基因组学研究等方面得到广泛应用。为了建立柿属植物SRAP技术体系,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq聚合酶、引物浓度等因素进行了优化。确定优化的反应体系为:模板DNA30ng,Buffer1×,Mg2+2.5mmol/mL,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,引物0.3μmol/L,反应总体积25μL。该体系在柿属植物6种1类型共29个基因型中获得较好的扩增结果,可望在柿属植物起源和进化研究中应用。     

部分柿属植物IRAP反应体系的建立和指纹图谱构建

为建立柿属(Diospyros)植物反转录转座子间扩增多态性(IRAP)技术体系,对IRAP分析中影响PCR扩增结果的若干因子进行了研究。确立了适合柿属植物IRAP分析的技术体系:20μL反应体系中,1×Buffer、模板DNA50ng、Mg2 2.0mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、引物0.40μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U,矿物油20μL;PCR扩增程序:95℃5min;95℃1min,56℃1min,升温速率 0.6℃/s,72℃2min,循环44次;72℃延伸8min。该优化体系在7种柿属植物33个基因型的I-RAP分析中获得较理想的扩增结果,扩增片段120～1500bp,不同种和柿种以下不同品种间扩增条带总数和带谱相同。每个基因型都有其独特的指纹图谱,可作为区分不同基因型的依据,尤其芽变品种的鉴别。     

不同处理对柿属植物DNA提取产率和品质的影响

基于CTAB法对鄂柿一号、前川次郎、君迁子3份材料进行DNA提取纯化,探讨不同采样时期、不同的纯化及沉淀方法对柿属植物DNA产率和品质的影响.结果表明,不同时期采样对DNA产率影响很大,随叶片生长,DNA产率不断下降,成熟叶片DNA产率仅为幼嫩叶片的16.7％～19.4％;在苯酚氯仿法、高盐乙醚法、CTAB沉淀法中以高盐乙醚法效果最好,可酶切,能有效去除多糖污染,产率较高;4种沉淀方法中,高浓度的盐溶液有助于去除多糖、多酚等杂质,相比单纯的乙醇或异丙醇沉淀可获得更高品质的DNA.另外,不同材料间提取DNA难度存在较大差异.