RAPD及其在果树上的应用

就RAPD的特点、操作及其在果树品种鉴定、遗传多样性检测、系谱解析和遗传图谱构建等方面的应用和进展进行了简要的阐述。     

应用RAPD技术研究柿品种间的亲缘关系

采用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对原产中国,日本和韩斩部分柿品种间的亲缘关系进行了初步探讨。结果表明：（１）１５个供试品种ＯＰＡ－０６,ＯＰＡ－０８,ＯＰＡ－１９三个引物扩增后,品种间和引物间的谱带类型各不相同;（２）经６个随机引物扩增出的１５供试品种的谱带类型和相似指数的分析结果显示,“富有”和“次郎”,“平核无”和”仓光“,”磨盘柿“和”杵头柿“ 可具有较近的亲缘关系。     

分子标记在桃上的应用

遗传标记有形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记等几种方法。分子标记是随着分子生物学的发展新近形成的遗传标记方法 ,能从生物体的遗传物质 (ＤＮＡ)去揭示生物体的遗传本质。有关分子标记应用的原理及其在果树上的应用已有文献综述[1～ 2 ] 。本文根据笔者对 2 0 3份桃类植物的分子标记研究和国内外有关桃分子标记方面的研究报道 ,对分子标记在桃上的应用作一简要介绍。1　分子标记技术在桃种质资源研究上的应用1 1　桃属种的系统发育和分类　笔者采用ＲＡＰＤ技术 ,用从 2 0 0多个随机引物筛选的 2 2个引物 ,对桃属主要种的ＤＮＡ进…     

‘禅寺丸’甜柿2n花粉形成机制的研究

 以2n花粉发生频率较高的甜柿品种‘禅寺丸’为试材，研究影响2n花粉形成的减数分裂行为。结果表明：2n花粉形成受融合纺锤体(fused spindles)，八字形纺锤体(triangle spindles)及后期Ⅱ染色单体不正常分离(abnormal disorientation of sister chromatid)3种减数分裂行为控制；融合纺锤体及八字形纺锤体形成的2n花粉占2n花粉总数的94.8%，在遗传上等同于FDR(first division restitution，第1次分裂重组)型配子；由姊妹染色单体不正常分离形成的2n花粉在遗传上等同于SDR (second division restitution，第2次分裂重组)型配子。甜柿2n花粉绝大多数为FDR型，因而在倍性育种中有重要的应用价值。     

中国甜柿及其在世界甜柿基因库中的地位

 柿（Diospyros kaki Thunb.）原产中国,但绝大多数为完全涩柿,中国原产完全甜柿（简称中国甜柿）仅在湖北、河南和安徽三省交界的大别山区有分布。主要介绍中国甜柿的栽培历史、地理分布及其变异类型,并重点对其生物学特性、自然脱涩特点及遗传规律等进行总结;此外,还对中国甜柿在世界甜柿的起源与进化、自然脱涩机理和遗传改良研究中的价值进行了阐述。     

‘罗田甜柿’胚乳培养获得十二倍体再生植株

 取‘罗田甜柿’自然授粉后约70 d 的胚乳, 采用不同细胞分裂素和生长素组合进行离体培养。结果表明: 以1/ 2MS (1/ 2N ) + ZT (玉米素) 1.1 mg/ L + 2,4-D 1.0 mg/ L + CH (水解酪蛋白) 1000mg/ L 诱导产生的愈伤组织易获得再生植株; 形态学和细胞学检测确认再生植株中存在2n=12x=180 的个体。该十二倍体植株对中国原产甜柿的遗传改良可能具有潜在的应用价值。     

柿属植物ISSR分析技术的建立

以部分柿属(Diospyros)植物为材料,对ISSR-PCR反应体系腗g2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶浓度,退火温度及扩增循环次数进行了探讨,确立了适合柿属植物ISSR分析技术体系在25 μL反应体系中,含1× Buffer,Mg2+2.0或2.5 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.6 μmol/L,Taq DNA聚合酶1U,甲酰胺2%,模板DNA 2.4 ng/μL;PCR扩增程序94℃变性3 min;94℃ 30 s,(Tm+2)℃(根据引物不同设定)45 s,72℃1.5 min,35个循环;72℃延伸7 min;2%琼脂糖电泳分离PCR产物.结果为柿属植物遗传多样性和分子系统学研究提供技术支持.     

SSAP逆转座子分子标记在柿属植物遗传分析中的应用

对SSAP（特异序列扩增多态性;sequence-specific amplification polymorphism）在部分柿属植物种质鉴定和亲缘关系分析中的应用进行了研究,并对每个SSAP引物单独用于柿属植物遗传分析的性能作了探讨。基于5个逆转座子引物的25对SSAP引物组合在供试28份柿属（Diospyros L.）基因型中共扩增出1300个位点（多态位点93.38%）,每对引物平均产生52个位点（含48个多态位点）,表明SSAP是一种高多重比例系数（multiplex ratio）和高多态性的标记系统;经SSAP数据的UPGMA聚类和主坐标分析,原产中国、日本的柿种质（D.kakiThunb.）及柿的近缘种各自单独成组,该聚类结果与部分已知亲缘关系的试材十分吻合,表明SSAP技术可用于柿属植物亲缘关系研究。此外,在25对SSAP引物组合中筛选出3对具高信息含量的引物组合,将在柿属植物遗传关系研究中广泛应用。     

湖北海棠SRAP-PCR反应体系的优化

对PCR反应中相互影响的三因素采用三水平全组合设计,建立了湖北海棠SRAP-PCR的最佳反应体系:Mg2+2.5 mmol·L-1,Taq酶1.5U,dNTP 0.3 mmol·L-1,引物0.3 μmol·L-1,Buffer1×,DNA模板30ng,反应总体积25 μL.应用该体系对33个湖北海棠样本进行扩增,得到了清晰、多态性丰富的扩增条带,证明该体系稳定可靠,可以在湖北海棠的相关研究中应用.     

锥栗叶样保存时间对DNA提取质量的影响

以野生锥栗幼叶为对照,采用硅胶干燥法,设置不同保存时间（10 d,2、4、6、8、10、11、12、13、14、15、16、17、18个月）,对保存不同时间的锥栗叶样抽提基因组总DNA,利用紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳检测提取DNA的浓度、纯度、得率及质量等指标,评价不同保存时间对基因组DNA的影响。结果表明：随着保存时间的延长,基因组DNA的浓度呈逐渐降低趋势,12个月后,降解加剧,纯度很低。叶样硅胶保存时间在10 d至10个月之间为最佳DNA抽提时间,所得DNA浓度、得率高,纯度较好,电泳谱带清晰。