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【目的】制备Ⅱ型鲤疱疹病毒(CyHV-2)ORF6多克隆抗体,为深入探究ORF6在CyHV-2急性感染或潜伏感染过程中的作用机制提供技术支持。【方法】利用MEGA 6.0、Adobe Illustrator CS6及BepiPred-2.0等在线软件分析CyHV-2的ORF6基因序列信息,采用PCR从CyHV-2基因组中扩增ORF6基因片段,将其连接至原核表达载体pET-28a后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和尿素洗涤纯化获得融合蛋白。以纯化的融合蛋白ORF6免疫健康Babl/c小鼠制备ORF6多克隆抗体,并通过Western blotting和间接免疫荧光技术鉴定ORF6多克隆抗体的特异性。【结果】CyHV-2的ORF6基因全长3003 bp,与CyHV-3和CyHV-1的ORF6氨基酸序列相似性均高于30.00%,其中与CyHV-3的相似性高达39.36%;其抗原表位最可能存在于第1~300位氨基酸序列中。将PCR扩增获得的ORF6基因片段连接至原核表达载体pET-28a可成功构建重组质粒pET-28a-ORF6,转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导4 h即获得融合蛋白ORF6;原核表达的融合蛋白ORF6主要以包涵体形式进行表达,其分子量为17.13 kD,经6 mol/L尿素洗涤纯化后的浓度为0.1 mg/mL。以纯化融合蛋白ORF6免疫Babl/c小鼠制备获得的ORF6多克隆抗体能特异性识别融合蛋白ORF6及CyHV-2感染的异育银鲫尾鳍细胞(GiCF);利用制备的ORF6多克隆抗体对CyHV-2感染GiCF细胞进行间接免疫荧光分析,结果在CyHV-2感染GiCF细胞周围能观察到特异性绿色荧光,而在未感染CyHV-2的GiCF细胞周围未观察到特异性绿色荧光,进一步说明ORF6多克隆抗体可特异性识别CyHV-2。【结论】制备获得的ORF6多克隆抗体能与CyHV-2感染GiCF细胞发生特异性免疫反应,即可用于鉴定CyHV-2感染,为探究ORF6蛋白功能是否与CyHV-2潜伏感染相关打下了基础。 相似文献
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为分析酵素菌剂对丝瓜果实营养成分的影响,以国家农产品地理标志登记产品白关丝瓜为试验对象,通过液体酵素菌剂与有机肥的配合施用,分析比较果实中影响风味的主要营养成分的变化。结果表明:液体酵素菌剂与有机肥配合施用后,样品中谷氨酰胺含量高达169.02 mg/100g,比单纯施用有机肥的对照样品提高了62.3%,呈甜、鲜、香味的游离氨基酸提高了38.3%~118.4%,尤其是对风味贡献显著的鲜味氨基酸天冬氨酸含量提高了87.2%、苦味氨基酸精氨酸含量降低了33.2%,蛋白质、可溶性固形物、钙元素、铁元素含量分别较对照提高了10.6%、5.7%、21.6%、62.5%。 相似文献
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以森林资源连续清查样地数据库(2000—2010)和森林资源二类调查数据库(1976—2006)为基础,研究了贵州省华山松林分结构与碳储量及动态变化。连续清查样地数据分析表明华山松林构件生物量排序为树干>树枝>树根>树叶,华山松林生物量由2000年的0.958×106t增至2010年的2.166×106t,碳储量由2000年的0.518×106t增至2010年的1.165×106t。二类资源调查数据分析表明1976—2006年华山松林生物量从0.297×106t增至3.244×106t,碳储量从0.160×106t增至1.75×106t,不同龄组华山松林生物量和碳密度分布趋势为近熟龄组>中龄组>成熟龄组>幼龄组,华山松纯林生物量和碳密度高于混交林。全省华山松林生物量和碳储量总体呈上升的趋势,不同的生物量与碳储量结论源于数据库基础数据的差异与统计方法不同。 相似文献
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一、2006年蜂王浆出口形势分析2006年,我国蜂王浆产业在遭遇了日本肯定列表等技术贸易壁垒的制约和人民币汇率升值的不利因素影响下,出口总量呈平稳趋势,新兴市场开发取得一定成绩,行业抗风险的能力进一步增强。 相似文献
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<正>赛福欣为10%恩诺沙星注射液,该药具有用量小、作用强、安全性高、副作用低、适用性广的特点,能有效控制多种细菌性混合感染(如G+、G-、支原体、衣原体、立克次氏体所引起的全身严重混合感染及败血症);是仔猪三针保健,母猪产前、产后保健首选药。 相似文献
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