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根据GenBank中已登陆植物的Na+/H+逆向转运蛋白基因的保守序列设计简并引物,以盐生植物大叶补血草总RNA为模板,通过RT-PCR方法得到长为983 bp的片段,将其克隆到pGM-T载体上,经PCR和酶切鉴定筛选得到阳性克隆,并进行测序.通过DNAMAN软件对该序列进行同源性比对,结果表明,本研究所克隆的基因片段编码的氨基酸序列与拟南芥、小麦、滨藜、番杏、冰叶日中花的Na+/H+逆向转运蛋白同源性很高,其同源性分别为80.06%、72.00%、82.07%、82.37%和82.37%,表明该序列确属Na+/H+逆转运蛋白基因的部分片段,同时也说明Na+/H+逆向转运蛋白基因在植物中高度保守. 相似文献
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旨在研究小拟南芥NPR1基因的第三内含子对基因表达的影响。克隆出带有第三内含子的小拟南芥NPR1基因,构建诱导型植物表达载体并对拟南芥进行农杆菌遗传转化,经5 mmol/L外源水杨酸12 h诱导,利用Real-time PCR技术检测拟南芥病程相关蛋白的表达量。结果显示野生型拟南芥的NPR1、PR-1、PR-2、PR-5表达量高于转基因拟南芥;相对于野生型拟南芥,转基因拟南芥中SOD、POD酶活显著降低,而CAT酶活增加未达到显著水平。结果表明转入含有第三内含子的Ap.NPR1基因,转基因植株系统获得性抗性途径受到抑制,植株抗病性降低,说明第三内含子使得系统获得性抗性途径的基因表达受到抑制。 相似文献
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啤酒花不同外植体再生体系的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
为了建立适用于基因工程培育抗病毒的啤酒花再生体系,筛选了‘于勒比特’啤酒花(Humulus lupulus L.)不同外植体、不同培养基、不同激素配比对愈伤组织形成、不定芽分化和不定根产生的影响。结果表明:叶盘、节间和腋芽都可以诱导形成愈伤组织,且叶盘在MS-B5培养基+葡萄糖20 g/L,含有6-BA 0.5 mg/L+IAA 1.5 mg/L,以7 g/L琼脂固化,pH 5.8的条件下,愈伤组织诱导率可达92.5%,愈伤组织形成不定芽可达56.0%,初步构建了‘于勒比特’啤酒花的再生体系。 相似文献
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以多年生宿根型草本植物橡胶草为材料,根据已获得的橡胶草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)基因序列设计引物,采用TAIL-PCR扩增到GGPPS基因5'上游大小为1131 bp的序列。采用PlantCare和PLACE软件分析,表明该序列不仅具有启动子的基本元件,同时还有与多个器官特异表达元件以及与胁迫相关的顺式作用元件,命名为pTkGGPPS(GenBank:KT901796)。将该序列代替pCAMBIA1304质粒上的CaMV 35S启动子序列,以GFP基因作为报告基因,构建pCAMBIA1304-pTkGGPPS-GFP植物表达载体,利用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,结果表明,该启动子能够驱动GFP基因表达,具有一定的活性。TkGGPPS基因启动子克隆及瞬时表达为橡胶草中橡胶合成及组织特异性研究奠定了基础。 相似文献
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以小拟南芥基因组DNA为模板,运用同源克隆法获得小拟南芥HDG12基因,命名为Ap HDG12。运用生物信息学方法,对Ap HDG12基因的理化性质、保守序列、二级结构、亚细胞定位等进行了分析,并进行同源建模。经测序和生物信息学软件预测分析,结果显示,Ap HDG12基因由10个外显子和9个内含子组成,mRNA长度为2 064 bp,编码687个氨基酸,亚细胞定位于细胞核。系统进化树显示Ap HDG12与Capsella rubella遗传距离最近,CDD保守序列分析结果显示Ap HDG12有18~79位的同源异型域和206~436位的START结构域,属于HD-zipⅣ类基因家族,同时构建了植物表达载体p BI121::HDG12,转化到农杆菌GV3101中,为进一步研究基因功能奠定基础。 相似文献
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KLU基因转化亚麻荠的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为进一步提高油料作物亚麻荠的含油量,克隆拟南芥胚珠组织特异型基因的启动子p I NO和拟南芥细胞色素P450 KLUH基因(KLU),以植物表达载体pCAMBIA2301为基础载体,构建组织特异性启动子pINO调控 KLU基因的植物表达载体pCAMBIA2301 pINO KLU ,用根癌农杆菌介导的floral dip法转化亚麻荠。结果表明,农杆菌培养至OD600值为0.8时,用等体积渗入培养基(1/2 MS、5%蔗糖、200μL/L Silwet L 77)重悬菌体转化亚麻荠,50 mg/L卡那霉素检测转基因种子的阳性率为15%,PCR检测初步证明,KLU基因已整合到部分抗性植株的基因组中,转化率为1.8%。 相似文献
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橡胶草高频再生体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以橡胶草叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、伸长和生根的影响。结果表明:用0.1%的升汞处理7min为最佳消毒方法,最佳的再生培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,平均诱导率为97.3%,芽伸长培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+0.4mg/L GA3,生根培养基为1/2MS+0.2mg/L NAA,生根率为100%,所获得的组培苗生长健壮且移栽成活率高,最终摸索出了橡胶草最佳的再生体系。 相似文献
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本研究探讨了转菜豆几丁质酶基因和烟草葡聚糖酶基因的抗病棉花株系7p、28p(双价载体)以及受体高代材料97185、79701的种植对根际土壤过氧化氢酶活性、蛋白酶活性、纤维素酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性的影响。结果表明:整个生育时期抗病转基因棉花根际土壤的过氧化氢酶活性与其受体之间差异不显著(P>0.05)。另外,根际土壤的蛋白酶活性、纤维素酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性在同一生育期内差异不显著(P>0.05),而在不同的生育时期差异显著(P<0.05)。说明抗病转基因棉花的种植对根际土壤过氧化氢酶和蛋白酶几乎无影响,而根际土壤纤维素酶、脲酶、蔗糖酶活性的变化转基因抗病棉花与受体种植之间几乎没有影响,而在不同棉花株系和生育期之间产生一定的影响,这可能与不同基因类型以及生育期植株根部分泌物有关。研究初步表明转基因抗病棉花的种植对土壤微生态的影响不大。 相似文献