Sporamin引导肽基因序列与sacB基因融合植物表达载体的构建

枯草杆菌（Bacillus subtilis）果聚糖蔗糖转移酶基因（SacB）在植物中表达，可以明显提高果聚糖的积累，增强植物的耐寒、耐旱和抗盐碱的能力。本实验采用PCR方法从枯草杆菌基因组中扩增出果聚糖蔗糖转移酶基因（SacB），序列分析结果与Ebskamp公布的编码果聚糖转移酶基因氨基酸序列同源性为100％采用PCR方法从甘薯总DNA中获得sporamin基因的定位于液泡的引导肽序列，序列分析与GenBank上公布的sporamin基因引导肽氨基酸序列同源性为97％。将sporamin引导肽基因序列与sacB基因体外重组，构建了融合植物表达载体pBI-sacB和pBI-sp-sacB，为下一步作物的遗传转化打下了基础。     

新疆网室熊蜂传粉制棉花不育系效果初探

[目的]研究不同传粉昆虫制种效果的影响。[方法]2008年新疆兵团农七师农业科学研究所从北京蜜蜂研究所引进2箱熊蜂,利用新疆兵团农七师农业科学研究所转育的哈克尼西棉胞质不育系9-21A及其对应保持系进行试验。保持系和不育系配比均设置为1∶3,试验采用随机排列,与当地的意蜂在4个网室进行2次重复对比试验。[结果]结果表明,熊蜂的数量不是影响棉花不育系制种产量的主要因素,熊蜂的蜂群活力才是影响棉花不育系制种产量的主要因素。[结论]试验结果说明,利用优势熊蜂群在新疆利用网室进行熊蜂授粉制棉花不育系的方法是可行的。     

矮牵牛自交不亲和性基因sx的克隆及功能初步分析

利用NCBI、CODEHOPE、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计兼并引物,以矮牵牛花柱cDNA为模板,利用RT-PCR扩增到1条长为417 bp的序列,在GenBank中比对发现,该序列与SX基因相似性最高。然后以SX序列为模板设计特异性引物,RT-PCR扩增到1条全长为747 bp的目的片段,测序结果分析表明,该基因核苷酸序列开放阅读框全长660 bp,编码220个氨基酸,其中包括有22个氨基酸的跨质膜信号肽区,和5个保守区(C1-C5)以及2个高变区(Hva, Hvb),据前人研究所知,该基因具有S-核酸酶功能。同时,从番茄DNA中克隆到一长为717 bp的花粉特异性启动子LAT52。为了使SX基因能在花粉中发挥其S-核酸酶功能,去掉22个氨基酸跨质膜信号肽(命名为sx)之后,与番茄花粉特异性启动子LAT52嵌合构建植物表达载体并转化拟南芥。 TTC染色结果表明,LAT52能特异性的在花粉中调控sx基因的表达,使花粉活力很低甚至没有活力,从而使转基因植株不育。     

甜叶菊叶片高频再生体系的建立

以“守田3号”甜叶菊叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、不定芽继代培养和生根的影响.结果表明:用0.1％的升汞处理3 min为最佳消毒方法,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA-1.0 mg/L IAA+300 mg/L水解酪蛋白,平均诱导率为80％;最佳不定芽继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.2 mg/L GA3 +4.0 mg/L KT;最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IAA,生根率为100％,所获得的再生苗生长健壮且移栽后成活率高,最终建立了甜叶菊最佳的再生体系.     

大叶补血草Na+/H+ 逆向转运蛋白基因的克隆及序列分析

 根据同源序列区域设计简并引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ 及ＲＡＣＥ 方法从盐生植物大叶补血草中分离了Ｎａ^＋／Ｈ^＋逆向运输蛋白基因的ｃＤＮＡ（LgNHX1,ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＥＵ７８０４５７）。LgNHX1的ｃＤＮＡ 全长为２３９７ｂｐ,５′端非翻译区长度为５１２ｂｐ,３′端非翻译区长度为２２９ｂｐ,其中包括１２ｂｐ的ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,中间的开放读码框为１６５６ｂｐ,编码１个５５０个氨基酸的多肽,推测分子量为６１ｋＤ。氨基酸同源性分析表明,ＬｇＮＨＸ１与北滨藜、小麦、盐角草和拟南芥液泡Ｎａ^＋／Ｈ^＋ 逆向运输蛋白的一致性分别为８２．６２％,８２．０１％,８０．６４％ 和７５．８６％。预测分析表明,ＬｇＮＨＸ１具有１１～１２个跨膜结构区域。系统发育分析表明该蛋白（ＬｇＮＨＸ１）与液泡型的Ｎａ^＋／Ｈ^＋ 逆向转运蛋白的亲缘关系较近,与质膜型的Ｎａ＋／Ｈ＋ 逆向转运蛋白亲缘关系较远。     

天山雪莲sikP基因提高番茄类黄酮含量的研究

【目的】将克隆得到的天山雪莲sikP基因转入番茄中,以提高番茄类黄酮的含量。【方法】利用农杆菌介导的叶盘法,把天山雪莲MYB转录因子sikP基因的植物过表达载体pBI121-35S-sikP转入番茄,利用PCR和RT-PCR技术检测目的基因是否整合到番茄中并表达,将获得的转基因番茄和对照番茄生根后移栽至花盆中,分别对其类黄酮含量进行检测。【结果】在获得5株转基因番茄中,测得转基因番茄总黄酮质量分数明显提高,是对照组番茄总黄酮质量分数的5.4倍。【结论】天山雪莲Myb转录调控因子sikP基因对番茄次生代谢具有重要的调控作用,能够有效地提高番茄类黄酮的含量。     

库尔勒香梨叶片不定芽再生诱导的研究

以库尔勒香梨幼叶为外植体,研究基本培养基种类、外源激素浓度、AgNO3浓度及接种叶片的放置方向对叶片不定芽再生的影响。结果表明:培养基的种类是影响叶片能否获得再生不定梢成功的关键,NN69培养基是香梨叶片再生不定芽的最佳培养基,诱导不定芽的分化以培养基NN69+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.3mg/L为最佳;附加0.5mg/L AgNO3有利于叶片再生;以叶片远轴面接触培养基比近轴面接触培养基更利于不定芽的再生;结合21d暗培养香梨叶片再生频率最高可达到64.3%,再生芽数最高为2.59。     

转基因棉花的田间筛选技术研究

利用不同浓度的卡那霉素对棉花叶片进行处理,较为系统地研究了棉花不同品种、不同叶位、不同生育时期内叶片对卡那霉素处理的反应。在此基础上建立了一种在田间对转基因棉花进行筛选的简便方法。研究表明,在棉花花铃期以前,利用5000～7500mg,L-1卡那霉素对转基因棉花新展开的倒1叶和倒2叶进行检测,能够有效筛选出带有卡那霉素标记基因的转基因后代,这对于转基因棉花材料的选育有较大的利用价值。     

新疆小拟南芥NPR1基因对植物系统获得性抗性的影响

旨在研究小拟南芥NPR1基因的第三内含子对基因表达的影响。克隆出带有第三内含子的小拟南芥NPR1基因,构建诱导型植物表达载体并对拟南芥进行农杆菌遗传转化,经5 mmol/L外源水杨酸12 h诱导,利用Real-time PCR技术检测拟南芥病程相关蛋白的表达量。结果显示野生型拟南芥的NPR1、PR-1、PR-2、PR-5表达量高于转基因拟南芥;相对于野生型拟南芥,转基因拟南芥中SOD、POD酶活显著降低,而CAT酶活增加未达到显著水平。结果表明转入含有第三内含子的Ap.NPR1基因,转基因植株系统获得性抗性途径受到抑制,植株抗病性降低,说明第三内含子使得系统获得性抗性途径的基因表达受到抑制。     

能源橡胶草GGPPS基因启动子的克隆及瞬时表达研究

以多年生宿根型草本植物橡胶草为材料,根据已获得的橡胶草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)基因序列设计引物,采用TAIL-PCR扩增到GGPPS基因5'上游大小为1131 bp的序列。采用PlantCare和PLACE软件分析,表明该序列不仅具有启动子的基本元件,同时还有与多个器官特异表达元件以及与胁迫相关的顺式作用元件,命名为pTkGGPPS(GenBank:KT901796)。将该序列代替pCAMBIA1304质粒上的CaMV 35S启动子序列,以GFP基因作为报告基因,构建pCAMBIA1304-pTkGGPPS-GFP植物表达载体,利用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,结果表明,该启动子能够驱动GFP基因表达,具有一定的活性。TkGGPPS基因启动子克隆及瞬时表达为橡胶草中橡胶合成及组织特异性研究奠定了基础。