竹鼠源细小病毒分离鉴定及全基因组序列分析

【目的】了解并掌握广西地区竹鼠细小病毒(Bamboo rat parvovirus, BRPV)的生物学特性及遗传变异情况,为BRPV的防控提供理论依据和技术支撑。【方法】用养殖场患病死亡的竹鼠病料制备组织上清液,采用Vero细胞同步接毒法进行病毒分离,通过细胞病变观察、PCR、透射电镜观察及血凝试验等方法鉴定,设计合成特异性扩增引物对BRPV全基因组序列进行测序分析。【结果】分离获得的病毒可在Vero细胞上稳定生长增殖,感染细胞变长、变梭或成拉丝状;病毒纯化后经电镜观察可见呈立体对称、无囊膜、直径20～25 nm的病毒粒子;经PCR鉴定、凝集试验及全基因组测序表明,分离株为BRPV。本研究共获得3株BRPV(GenBank登录号：MF497824、MF497825、MF497826),毒株基因组全长约4 758 bp,全基因组序列比对发现,其与蝙蝠源细小病毒关系较近。BRPV基因编码氨基酸遗传特征与其宿主特异性有很强的相关性,NS1基因编码氨基酸变异与蝙蝠及大鼠源细小病毒更接近,与其处于同一分支,核苷酸相似性为96.9%～97.6%,氨基酸相似性为97.5%～98.4%。其中第257...     

鸡马立克氏病病毒分离株毒力比较试验

鸡马立克氏病病毒分离株毒力比较试验黄安国蒋玉雯白安斌盘宝进陈西宁姚瑞英郑儒标冯军（广西兽医研究所,南宁５３０００１）虽然ＨＶＴ疫苗（火鸡疱疹病毒苗）在正常情况下对预防ＭＤ（马立克氏病）是有效的,但最近几年来在经过ＨＶＴ疫苗免疫的鸡群中常有ＭＤ发生,并...     

新生仔猪大批死亡疫情诊断及HP-PRRSV的分离鉴定

本试验通过对高发病率、高死亡率的新生仔猪腹泻病例进行诊断与控制,以期为该病的防控提供参考和借鉴.2013年1月初广西玉林某规模猪场发生以2~3日龄仔猪腹泻、呕吐、精神不振为主的疫情,发病率80%,死亡率80%~100%.为确定此次疫病的病因,本研究从发病猪群中采集10 份病死猪小肠、脾脏、肺脏、淋巴结等组织进行细菌分离、PCR检测、病毒分离、病毒效价(TCID₅₀)测定、基因测序与分析.检测结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均为阳性,猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)均为阴性,未分离到致病菌.克隆测序分离株的ORF7和Nsp2全基因序列,结果显示分离株为美洲型PRRSV,ORF7基因全长为372 bp,编码123个氨基酸;Nsp2基因全长为2 850 bp,编码950个氨基酸,其中Nsp2基因在第481、532—560位发生了共30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV(HP-PRRSV) JXA1株Nsp2基因缺失特征一致,属于HP-PRRSV分离株.匀浆病料接种Marc-145 细胞,48 h开始出现 PRRSV 特征性病变,TCID₅₀为10^-5.75/0.1 mL.推测此次新生仔猪大批死亡主要是PEDV感染后继发高致病性猪繁殖与呼吸综合征所致.     

兔多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性研究

从病死兔肝脏中分离获得1株两极着色、革兰氏阴性球杆菌,根据发病情况、病理变化、菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及其16S rRNA序列测定结果,确定为兔多杀性巴氏杆菌。通过动物试验证实,该分离菌株具有较强的致病性;药敏特性检测结果表明,该分离菌株对常用抗生素有较强的耐药性,在所检测的22种抗生素中仅对氟苯尼考、头孢氨苄、磺胺六甲氧嘧啶、头孢噻肟、洛美沙星、菌必治等8种抗生素高度敏感,因此防治时应进行药敏试验筛选敏感药物;耐药基因检测发现,该分离菌株携带有多种耐药基因,与药敏试验结果一致。     

猪细小病毒N株免疫期测定

用PPV—N株制备成弱毒疫苗,在配种前1个月接种PPV HI抗体阴性的后备母猪,接种2周后检测PPV HI抗体均达到1：256以上。当怀孕到40d时用PPV强毒攻击,攻毒后40d剖杀的2头怀孕母猪其胎儿正常健活,胎儿心血未检测到PPV HI抗体,胎儿脏器未分离到病毒;自然分娩的2头母猪,其仔猪健活,未吃初乳仔猪PPV HI抗体阴性,仔猪脏器未分离到病毒;而强毒攻击的对照猪均出现不同程度的死胎,并从未吃初乳仔猪检测到PPV HI抗体和从死胎儿肺回收到病毒。按上述方法连续观察到第3胎（免疫后15个月）,证明免疫母猪怀孕到第3胎仍能抵抗PPV强毒攻击,说明PPV—N株对母猪的免疫期达1年以上。     

用狄高辛标记DNA探针从人工感染鸡脏器检出I型马立克氏病病毒

用狄高辛标记ＤＮＡ探针从人工感染鸡脏器检出Ｉ型马立克氏病毒（ＭＤＶ），检出结果表明，人工感染ＧＡ强毒第三就高可从５只鸡只的三只心，肝，肺，肾，法氏囊，胸腺，肌胃检出Ｉ型ＭＤＶ，第２５天５只鸡的脏器均能检出Ｉ型ＭＤＶ，同时从感染第１０天就可从羽囊检出Ｉ型，到第１５天羽囊检出阳性率１００％。     

猪细小病毒N株的安全性试验

用PPV-N株常规接种量的5倍和10倍接种PPV HI抗体阴性4月龄小猪、后备母猪和怀孕母猪,接种后第5,7、9天未能从血液中检测到病毒血症,鼻咽和直肠拭子未分离到病毒,无任何异常临床症状,母猪产仔正常,初生仔猪PPV HI抗体阴性,而未接种的对照猪产仔正常,没发现同居感染.以上研究证明PPV N株对4月龄小猪,后备母猪和怀孕母猪具有良好的安全性.     

广西猪流行性腹泻流行病学调查

对广西6个市的6个规模化猪场进行了猪流行性腹泻流行病学调查。对其中4个猪场统计，在11090头猪中，患流行性腹泻的猪4658头，发病率为42％；死亡265头，病死率为5．69％。对6个猪场的170头份血清检测，阳性血清14份，阳性率为8．24％。结果表明广西的一些规模化猪场有猪流行性腹泻存在。