用豚鼠检测猪细小病毒N株弱毒苗的血凝抑制抗体

由于猪细小病毒（ＰＰＶ）血清型单一及其高免疫原性,使得疫苗接种成为控制ＰＰＶ感染行之有效的方法。但检测ＰＰＶ疫苗的效力要求使用ＰＰＶ血清阴性的母猪,不仅成本高,而且管理和操作费时费力,同时不容易找到ＰＰＶ血清阴性的母猪,为了解决这一问题,国外曾试图寻找一种实验动物模型作为ＰＰＶ疫苗效力检测。Ｊｏｏ等［１］曾报道用豚鼠、兔和猪对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应,证明豚鼠和兔对ＰＰＶ疫苗的血清学反应与猪相似,提供了用实验动物作为ＰＰＶ疫苗效力试验的可能性。国内潘雪珠等［２］也证明了豚鼠对ＰＰＶ灭活苗的抗体反应…     

番鸭花肝病病原的研究

从广西患花肝病的雏番鸭肝、脾分离到3株病毒．定名为NM1、NM2、NM3。这3株病毒能在番鸭胚和番鸭胚成纤维细胞上增殖，并产生细胞病变。人工感染1日龄番鸭致死率达100％，但对鸡、康贝尔鸭和鹅不致病。分离毒对氯仿不敏感，耐热、耐酸，不被DNA抑制物所抑制。分离毒的细胞培养物经超薄切片，磷钨酸负染，在电镜下观察到大量球形、实心(少量空心)的病毒粒子，其直径66～70nm，无囊膜，属无囊膜的RNA病毒。     

家养观赏地图鱼肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌与黏质沙雷氏菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验旨在通过细菌分离鉴定,明确家养观赏地图鱼的死因,筛选敏感药物。采用常规方法分离纯化细菌后,进行细菌形态学观察,并通过小白鼠致病性试验、细菌主要生化鉴定、16SrDNA序列测定分析、药敏试验及耐药基因检测等方法对分离的细菌进行鉴定及耐药分析。分离出3株革兰氏阴性短杆菌,根据细菌形态特征及理化特性,结合16SrDNA序列测定与系统发育分析结果,判定其分别为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)和黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),其中肺炎克雷伯氏菌具有较强致病性。3株细菌均对洛美沙星、氧氟沙星、阿米卡星、卡那霉素敏感,对阿莫西林、氟苯尼考、克林霉素、甲硝唑等具有较强耐药性。结果表明,肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌、黏质沙雷氏菌的混合感染是家养观赏地图鱼的死亡原因。     

抗人红细胞/抗猪瘟病毒双功能单链抗体的制备及功能鉴定

旨在构建检测猪瘟病毒(CSFV)的双功能单链抗体。通过连接肽将抗人红细胞膜H抗原单链抗体基因2E8-ScFv和抗猪瘟病毒单链抗体基因CSFV-ScFv拼接成融合基因,大肠杆菌密码子优化及人工合成后,构建原核表达载体pCzn1-2E8-CSFV,转化BL21(Plyss)进行重组蛋白IPTG的诱导表达,利用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,通过间接免疫荧光(IFA)、ELISA和血凝试验,验证重组蛋白双功能活性。结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式在大肠杆菌中表达,分子质量约为55 kDa。IFA和ELISA结果表明,纯化复性后的重组蛋白与猪瘟病毒具有良好的结合活性;红细胞凝集试验表明,重组蛋白能与人红细胞特异性结合,同时也能与猪瘟病毒发生特异性结合,具有双功能特性。本研究成功表达了抗人红细胞膜H抗原/抗猪瘟病毒双功能单链抗体,为进一步构建猪瘟病毒红细胞凝集试验快速检测方法奠定基础。     

巴马小型猪内源性反转录病毒感染对HEK293细胞周期调控相关基因mRNA表达的影响

以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BMHEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法,并对细胞感染模型中7个基因的mRNA表达情况进行分析。细胞活力分析结果显示,随着培养代次及培养时间增加,相对于母源HEK293细胞PERV感染模型的细胞活力下降;qPCR检测方法建立结果显示,所构建的cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、c-myc、p53、p16基因检测方法检测各基因在1.0×10~1~1.0×10~9 copies/μL反应范围内有很好的线性关系,扩增产物熔解曲线只出现特异性单峰,各组内变异系数在0.31%~2.01%之间,组间变异系数在0.46%~2.19%之间,重复性好,可稳定地用于相关基因mRNA的定量检测。用建立的q-PCR检测方法对PERV感染模型进行细胞周期调控相关基因mRNA表达分析,结果显示,与母源细胞相比,模型细胞cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、p53和p16基因的mRNA表达无明显变化,原癌基因c-myc基因表达下调,提示PERV感染可能抑制c-myc基因表达。该研究结果可为评价巴马小型猪来源PERV在人-猪异种移植中生物安全性提供参考。     

抗仔猪腹泻高免全蛋粉的制备及效果评价

利用猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒三联油佐剂苗和大肠杆菌K88、K99、P987多价灭活苗免疫健康蛋鸡,收集高免蛋,通过喷雾干燥法制备高免全蛋粉,并对干燥条件进行优化;结果显示：采用进风温度180℃、进料速度10mL／min、干燥速度5s、出口温度70℃喷雾的高免全蛋粉质量较好;动物试验结果表明：在早期断奶仔猪日粮中添加0．5％高免全蛋粉替代抗生素不仅可以有效降低仔猪腹泻发生率,而且能够明显提高仔猪生产性能。     

3株猪博卡病毒的全基因遗传进化及重组分析

[目的]了解猪博卡病毒(Porcine bocavirus,PBoV)在广西猪群中的流行状况及遗传学特征,为有效防控PBoV感染提供科学依据.[方法]采用PCR对采自广西境内养殖场的388份猪源样品进行PBoV检测,挑选3份阳性样品(1份为PBoVG1阳性样品,2份为PBoVG3阳性样品)进行全基因扩增,测序获得的序列使用LaserGene进行处理及多重比对分析,应用MEGA 5.2中的ClustalW进行遗传进化分析,通过邻接法(NJ)构建系统发育进化树,并以SimPlot 3.5.1进行潜在基因重组事件分析.[结果]猪内脏组织(肺脏、脾脏和淋巴结的混合样品)、扁桃体、脑组织和公猪精液的PBoV阳性率分别为25.19%、8.33%、2.94%和1.54%.在所有检测样品中,PBoVG3基因群的阳性率最高,为9.02%,PBoVG2和PBoVG1基因群的阳性率均为1.55%;不同基因群的PBoV存在混合感染现象,其中,PBoVG1+PBoVG3二重感染率为1.03%,PBoVG2+PBoVG3二重感染率为0.77%.从PBoV阳性样品中扩增获得3条PBoV全基因序列(毒株),命名为GXBH2014、GXBH2015和GXLC2014,对应的GenBanK登录号为MN747332、MN747333和MN747339.其中,GXBH2014株序列全长5055 bp,GXBH2015株序列全长5070 bp,GXLC2014株序列全长4313 bp.GXBH2014株和GXBH2015株与PBoVG3基因群参考毒株SH20F各编码基因的推导氨基酸序列同源性较高,为70.9%~98.5%;GXLC2014株与PBoVG1基因群参考毒株SX各编码基因的推导氨基酸序列同源性最高,为98.0%~99.1%.基于PBoV全基因编码区(CDS)全长序列构建的系统发育进化树也显示,GXBH2014株和GXBH2015株同处于PBoVG3基因群分支上,GXLC2014株处于PBoVG1基因群分支上.基因重组分析结果显示,在GXBH2014株的全基因序列中检测到1个潜在的重组断点,位于NP1基因的第391位核苷酸;而在GXBH2015株和GXLC2014株的全基因序列中均未检测到潜在的重组断点.[结论]广西猪群中普遍存在PBoV感染,且PBoVG1、PBoVG2和PBoVG3基因群毒株同时存在.其中,GXBH2014株可能是IA159-2株(KF025386)与MN154-1株(KF025384)基因重组进化的产物.     

新城疫病毒V_4株某些特性的研究

本文对新城疫病毒V4株的毒价、耐热性、致病性及对鸡的免疫应答进行了研究,结果证明NDV—V4株毒价为10~(8.5)EID50/0.1ml。室温保存15天,37℃保存7天HA滴度不变,毒价不变。ICPI和IVPI均为0.00,MDT>168小时。二免后49天HI抗体均值达7.3log2以上。免疫后四个月强毒攻击,100%保护。现场应用82万羽份安全有效。     

可形成生物膜的猪源奇异变形杆菌分离鉴定及致病性研究

为确诊某猪场猪发病死亡原因,采集死亡猪病变组织,用常规方法分离鉴定细菌并进行致病性和耐药性检测。结果显示：从病死猪肺脏分离到1株奇异变形杆菌GX-PM1,与GenBank收录的奇异变形杆菌AYQ-1株同源性高达99.9%;小鼠致病性试验鉴定为强毒株：药敏实验检测结果显示,该菌株对阿米卡星、头孢氨苄为极敏,对青霉素G、头孢拉定、左氟沙星等为高敏,对阿莫西林、恩诺沙星等药物效果为中敏,对四环素、红霉素、复方新诺明、磺胺异恶唑等8种药物完全耐药;对耐药基因进行PCR扩增发现在该菌株中存在四环素类、氯霉素类、磺胺类耐药基因;GX-PM1株毒力基因型为ureC（-）、atfA（+）、pmfA （+）、zapA （+）、mrpA （-）、atfC （+）、ucaA （+）、rsbA （-）;生物膜实验研究表明,分离株具有生物被膜形成能力,且为强黏附型（+++）。本研究表明此疫情由奇异变形杆菌引起,可用头孢类和氨基糖苷类药物进行治疗。     

兔大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验

为了研究引起兔腹泻的病原种类、致病性以及耐药性情况,试验采用细菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA序列测定、血清型鉴定及动物致病性试验等方法进行检测。结果表明:所分离到的细菌为大肠杆菌,血清型为O6型;对小白鼠有致病性;对羧苄青霉素、青霉素等5种药物为中度敏感,对氟苯尼考磺胺六甲、头孢噻肟等11种药物高度敏感。