不同精液解冻液和解冻速率对猪颗粒冻精品质的影响

为提高猪冻精解冻后的质量,本试验选择5种解冻液配方,对猪颗粒冻精进行解冻,结果表明,Ⅴ号解冻液为最佳解冻液,解冻后精子活率为(34±2.4)%,极显著高于Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组(P0.01);存活时间为(506.6±40.4)h,极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.01),显著高于Ⅳ组(P0.05)。选择9种不同的水温,采用V号解冻液对冻精颗粒进行解冻,记录解冻时间,并计算解冻速率,研究结果表明,以27.5℃/s的速率进行解冻,解冻后精子的活率、弯尾率及顶体完整率均达最优水平。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6和ORF6/7重叠区的分离(人工)改造病毒的构建及鉴定

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆ORF间（ORF5／6和ORF6／7）重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明：（1）两个全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;（2）突变病毒具遗传稳定性;（3）病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSVORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的两株突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。     

猪TYR基因外显子1的克隆测序及序列分析

本研究对荣昌猪和内江猪的TYR基因外显子1进行了克隆测序及序列分析，结果发现3个新的突变位点：319C→T，537C的插入，551A→G。部分突变序列已被GenBank收录，登录号为：AY236997。将突变序列翻译成氨基酸序列后发现，319C→T和551A→G是同义交变。537C的插入是移码突变，其是否会对猪的毛色造成影响，还有待进一步研究。     

日粮添加VE和VC对肺动脉高压综合征患鸡自由基代谢的影响

将380只AA商品肉鸡随机分为A组100只,B、C、D和E组各70只,14日龄前常规饲养。14日龄后,B、C、D和E组舍温按每日1～2℃由25℃、逐步降至12℃,同时日粮中按1．5mg／kg的剂量添加T3以诱发肺动脉高压综合征(PHS);C、D组在日粮中分别按500、100mg／kg的剂量添加维生素C和E;而E组同时添加维生素C和E,A组仍常规饲养,至试验结束。记录每周各组鸡群的PHS发病数、平均体质量和采食量,并每周每组取10只鸡采血和扑杀,测定其红细胞压积(PCV)、血浆、肺和肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物的降解产物丙二醛(MDA)浓度;取心脏测定其右心室和全心室质量比(RV／TV)。结果显示,环境低温和日粮添加T3极显著增加了肉鸡PHS的发病率(P＜0．01)。C、E组的肉鸡PHS发病率以及血浆、肺和肝组织的MDA值均极显著降低(P＜0．01),血浆、肺和肝组织的SOD值均极显著增加(P＜0．01),但增重、饲料转换率、血液PCV值和心脏指数RV／TV值未发生改变;D组5周龄后的血浆MDA值则极显著降低(P＜0．01)以及血浆、肺和肝组的SOD值极显著增加(P＜0．01),而肺和肝组织的MDA值和肉鸡PHS发病率未发生改变。由此表明,日粮添加维生素C明显阻断了低温和T3条件下肉鸡体内脂质过氧化过程,有效清除了体内自由基,显著增强了体内抗氧化能力,成功防制了肉鸡PHS的发生;日粮中同时添加维生素C和E使低温加T3条件下的肉鸡体内抗氧化能力进一步加强;但维生素C或／和E未能改变在环境低温和日粮添加T3诱病条件下肉鸡的增重和饲料转换率,而日粮中单独添加维生素E则使低温加T3条件下的肉鸡体内抗氧化能力有一定的增强作用,但并未改变肉鸡PHS的发病率。     

鸭白细胞介素2全基因组结构分析

依据鸡白细胞介素2（chIL-2）全基因组序列设计引物探针,以简易基因组抽提法获得的鸭外周血单核细胞基因组DNA为模板,用长距离聚合酶链式反应（LD-PCR）扩增出鸭白细胞介素2（duIL-2）全基因片段。经序列测定,得到的duIL-2基因组DNA序列全长为3528bp。运用生物信息学方法对duIL-2的基因、启动子结构和cDNA序列编码的成熟蛋白进行系统分析,结果表明,duIL-2基因具有典型的4个外显子和3个内含子结构,和已知禽类及哺乳类同系物基因总体结构具有明显的相似性。鸭和鸡及其他哺乳动物IL-2基因的启动子序列具有显著的保守性,都具有AP-1、NF-AT、CD28RE、OCT、TATAbox转录起始因子结合位点和预测的转录起始位点。duIL-2cDNA序列编码的成熟蛋白进化分析表明,鸭和鹅的亲缘关系最近,和哺乳动物的亲缘关系较远,显示出明显的种属差异。     

poly(A)尾对猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组感染性的影响

大部分单股正链RNA病毒的基因组末端含有poly（A）尾,这对病毒基因组RNA的感染性起着非常重要的作用。本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,通过突变PCR获得poly（A）尾长度分别为0、5、8、9、10、22、35的全长突变体克隆,经体外转录转染MARC-145细胞,观察细胞病变（CPE）,对于能产生CPE的突变克隆,抽提细胞上清中的病毒RNA,通过G-Tailing法鉴定子代病毒基因组的poly（A）尾长度。结果表明：1、poly（A）尾影响PRRSV基因组的感染性,且最小长度为10;2、PRRSV基因组poly（A）尾在感染细胞过程中能被修复。     

肉鸡腹水综合征及其研究进展

肉鸡腹水综合征（Ascites syndrome,AS）,又称肺动脉高压综合征（Pulmonaryhy pertension syndrome,PHS）,或右心衰竭症（Right heart failure,RHF）。是由多个因素相互作用引起,危害快速生长幼龄肉鸡,以腹腔积液为主要临床表现,右心扩张肥大,肺淤血水肿以及肝脏淤血、肿大为基本病理特征的营养代谢病,即一种群体性普通病。     

山羊尿石症发生过程中肾功能及尿沉渣变化的动态研究

应用棉饼稻草日粮,配合饮水中添加氧化镁的饲喂方式,对其中成功诱发尿石症的6只阉割公山羊不同试验阶段的尿沉渣及肾功能变化特点进行了研究。试验分5个时期进行：预试结束时作为试验Ⅰ期,正式试验第15~60天为试验Ⅱ期,加镁后尚未出现尿闭为试验Ⅲ期,尿闭发生初期作为试验Ⅳ期,尿闭发生后2~5 d为试验Ⅴ期。结果：（1）山羊采食棉饼稻草日粮后,试验Ⅱ、Ⅲ期尿液中存在大量棺盖形状（洋信封形状）晶体和大小不等的短细杆状小晶体,在试验Ⅳ期晶体基本消失,试验Ⅴ期则出现少量小晶体,其数量显著低于试验Ⅱ、Ⅲ期（P〈0.05）;（2）试验Ⅰ、Ⅱ期有少量肾小管上皮细胞脱落,试验Ⅲ、Ⅳ期的尿液中出现大量肾小管与肾盂上皮细胞,并伴有少量管型,试验Ⅴ期尿液中脱落上皮细胞与管型的数量增加;（3）试验Ⅱ、Ⅲ期血浆尿素水平较试验Ⅰ期显著升高（P〈0.05）,试验Ⅰ、Ⅱ期肌酐水平未发生明显变化,试验Ⅲ期肌酐水平显著升高（P〈0.05）,血液尿素/肌酐比值在试验Ⅱ期明显升高（P〈0.05）,试验Ⅲ期开始下降;试验Ⅳ、Ⅴ期血浆尿素与肌酐含量较试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期显著升高（P〈0.05）,血液尿素/肌酐比值显著降低（P〈0.05）;尿蛋白在试验Ⅱ、Ⅲ期明显升高,在试验Ⅳ期显著降低,但在试验Ⅴ期尿蛋白又急剧升高。结论：高镁可以引起山羊肾脏上皮细胞脱落,细胞脱落可造成肾机能不全,同时脱落的细胞和漏出尿液蛋白等又为结石成核提供了条件,使尿液中晶体沉渣转化为结石,从而促进了山羊尿石症的发生。     

重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定

 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/His B，实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示，表达蛋白的分子量约为18 kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体，建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA，探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2 (0.4 ng) 对Con A活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性，而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性，而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实，大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能，而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。