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【目的】构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础。【方法】以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K。再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒 p8K-HA/M/NA。表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞。增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株。阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物。【结果】PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M1和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm 的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体。【结论】重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒。 相似文献
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主要阐述了流式细胞仪在贝类血细胞分类、血细胞功能、染色体核型分析、倍性检测等研究中的应用,供研究贝类的科技工作者参考。 相似文献
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2013年3~11月在塔里木大学植物科学学院园艺试验站日光温室对6个瓠瓜供试品种的物候期、生物学特性、经济学特性及果实营养品质进行比较试验。结果表明:6个瓠瓜供试品种中,品种A和品种F的综合性状最优。品种A的植株生长势强,以侧蔓结瓜为主,商品瓜皮色浅绿色,长棒状,瓜表面光滑,瓜长约36 cm,单瓜重0.90 kg;瓜肉白色,产量高,品质佳,商品性好,抗病性好。品种F的植株生长势也强,采收期早,商品瓜皮色浅绿色,长棒状,瓜长约39 cm,单瓜重0.94 kg;瓜肉白色,产量高,品质佳,商品性好,易于栽培,抗病性好。在生产中,品种A和品种F适合温室栽培,本地区可大面积推广种植。 相似文献
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通过田间小区试验,研究不同水平氮磷钾肥的配比施用对甘草地上、地下生物量的肥效.结果表明,不同水平氮磷钾肥的配比施用对甘草生物量有明显肥效,不同处理的肥效对比为:偏高肥水平(尿素140 kg/hm2、过磷酸钙200 kg/hm2、硫酸钾160 kg/hm2)>中肥水平(尿素70 kg/hm2、过磷酸钙100 kg/hm2、硫酸钾80 kg/hm2)>高肥水平(尿素280 kg/hm2、过磷酸钙400 kg/hm2、硫酸钾320 kg/hm2)≥低肥水平(尿素35 kg/hm2、过磷酸钙50 kg/hm2、硫酸钾40 kg/hm2)>对照(CK).所有指标在中肥水平处理和偏高肥水平处理中增加相对最为明显,比 CK 增加的比例为:株高74.43%和66.32%,茎干重55.43%和51.09%,复叶数100%和90.9%,叶干重88.11%和74.13%,根长8.64%和6.93%,根直径24.17%和23.63%,根干重21.47%和20.02%,根冠比48.15%和44.44%. 相似文献
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[目的]克隆东亚砂藓甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因RjGAPDH,并对其进行生物信息学和表达分析。[方法]通过分析东亚砂藓转录组测序数据,利用RT-PCR技术克隆该基因的全长序列,并通过荧光定量PCR分析RjGAPDH基因在不同干旱胁迫时间的表达情况。[结果]该基因全长为1 208 bp,开放阅读框1 053 bp,编码350个氨基酸,预测蛋白分子量为38.66 kD,等电点pI为6.02,不稳定系数为23.97,为稳定蛋白;该基因编码的蛋白无跨膜区和信号肽序列,定位于细胞质。在快速干旱胁迫处理过程中,东亚砂藓RjGAPDH基因的表达量高于正常生长的材料(CK),能被诱导表达。[结论]RjGAPDH基因可能参与东亚砂藓对干旱的胁迫反应,为后续进一步研究其功能特征奠定基础。 相似文献
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78.
<正>新疆地处欧亚大陆腹地,具有独特的内陆干旱气候特征,农业生产具有典型的"荒漠绿洲,灌溉农业"的特点。新疆水资源分布不均,水利工程建设滞后,管理薄弱,更加剧了国民经济发展与生态环境保护用水的矛盾。新疆农业用水总量为778亿m3,占到总用水量的94%,由于农村水利设施管理不善,老化失修严重,灌溉方式落后等造成农业用水效率只有42%,单方水的粮食生产能力只有0.7kg左右,远远低于世界平均水平。因此 相似文献
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从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通过多重序列比对之后,设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针,用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法.合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧光报告基团,荧光淬灭均使用BHQ基团.多重实时RT-PCR实验在ABl7500实时PCR仪上进行,经过40个循环的扩增之后,阳性对照出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将新的甲型H1N1与传统的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒区分.多重实时RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限.检测时间短,从加样到反应结束只需要90 min.在对243例发热病人临床样品检测过程中发现7例阳性,1351份猪临床样品检测中未发现阳性,该检测结果和采用中国检验检疫科学研究院研制的试剂盒获得的检测结果一致.本研究所建立的快速、准确和高敏感性的多重实时RT-PCR方法非常适用于新型甲型H1N1流感病毒的实验室筛查. 相似文献
80.
我国有机农业发展应当密切结合国家宏观经济政策.2013年3月,国务院总理李克强在上海召开部分省市经济形势座谈会,会议指出:打造中国经济升级版,首先要自足于扩大内需.要在稳增长中提高质量和效益.推动产业向中高端升级,实现进中求好.同时,要体现在人民生活水平的提高上.力推绿色发展,把让人民群众呼吸洁净空气、喝干净水、吃安全食品作为发展的重要内容.中国社会科学院学部委员、副院长李扬指出从宏观经济层面,中国经济步入结构性减速阶段,产业结构和生产要素结构调整已成为当前亟需解决的问题. 相似文献