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DNA旋转酶基因gyrA中喹诺酮耐药决定区碱基变换在大肠杆菌对喹诺酮的耐药性方面起着十分重要的作用.采用PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术可对大肠杆菌gyrA基因QRDR的突变进行有效检测.本文以142株猪源致病性大肠杆菌氟喹诺酮药物敏感菌株为样本,测定了细菌对喹诺酮药的MIC值,结果表明142株猪源大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率分别为78.8%,56.3%,65.5%,76.8%.猪源大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药率高,且耐药菌株MIC值较大.菌株WJPE2-1(对环丙沙星的NIC为0.5μg/mL)的诱导耐药试验,结果表明,在通过药物浓度梯度连续诱导过程中获得了MIC为2,8,64,128μg/mL的四株诱导菌株,诱导菌株4对ENR、NOR、OFL、CIP的MIC值分别增加到诱导前的32,128,128,256倍,且4株诱导菌株对CIP、ENR、NOR、OFL的MIC值均呈现递增.根据GenBank注册的大肠杆菌gyrA序列设计引物,横跨gyrA的第40和118密码子位置,包含完整的QRDR,从27株不同MIC值的大肠杆菌株、ATCC25922、4株诱导耐药菌株均获得约300bp的PCR产物.采用291的交联度、12%的聚烯酰胺浓度,1×TBE,凝胶中添加5%的甘油的条件,对诱导菌株、药物敏感菌株及不同耐药水平的分离菌株进行SSCP分析,结果表明,诱导菌株的谱型与敏感对照菌不同,低MIC值菌株SSCP谱型与敏感对照与敏感对照一致性高;耐药菌株的谱型多数与敏感对照不同.四株诱导大肠杆菌PCR产物的SSCP谱型均与对照不一致,检出率为100%;27株不同耐药性的猪源大肠杆菌中,7株敏感大肠杆菌共有6株的SSCP谱型与标准敏感菌株对照一致,符合率为85.7%;20株耐药大肠杆菌其谱型与标准敏感对照一致的菌株为2株,检出率为90.0%.序列比较结果表明,敏感菌株WJPE2-1的PCR产物与敏感对照有2个碱基(第91,111位氨基酸残基位置)的差异,序列同源率为99.16%(236/238).诱导菌株1与2表现在第83位氨基酸编码序列由tcg突变为ttg,菌株3、4与菌株1、2的差异表现在第87位氨基酸编码序列由gac突变为tac.进一步分析发现,菌株WJPE2-1在第91位及111位的突变均为同义突变,即密码子的变换没有引起氨基酸残基的改变.在诱导菌株中,1与2的gyrase的第83位氨基酸残基由Ser→Leu,菌株3、4的gyrase还在第87位氨基酸残基由Asp→Tyr.表明由于QRDR内碱基的改变,引起DNA旋转酶氨基酸的变化,导致大肠杆菌产生氟喹诺酮药物的耐药性. 相似文献
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93.
本试验根据已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,去掉由18个氨基酸构成的信号肽后,设计一对IBV S1基因表达片段的PCR引物,利用RT—PCR扩增得到了IBV四川分离株的S1基因片段,将该片段克隆到PMD18-T载体上,通过对所得到的重组质粒进行酶切分析、菌落PCR鉴定,证明得到了含有目的基因片段的阳性重组质粒,测序分析片段长为1566bp,已经成功切除了由18个氨基酸构成的信号肽序列。将该基因亚克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的SnaBⅠ和NotⅠ酶切位点,并通过菌落PCR、双酶切鉴定了该重组质粒的正确性,IBV S1基因毕赤酵母表达载体的构建为进一步利用毕赤酵母表达IBV S1蛋白提供了基础材料,并对表达产物的免疫原性和禽传染性支气管炎基因亚单位疫苗及特异性诊断抗原的研究打下了基础。 相似文献
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95.
四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析 总被引:2,自引:0,他引:2
在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上,对23株致病性大肠杆菌和5株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析。结果表明,菌株的质粒获得率100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。 相似文献
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为研究鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DNA疫苗免疫效果的影响,根据GenBank登录的鸡IL-1β和IL-16序列设计两对引物,采用RT-PCR方法从四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆IL-1β和IL-16基因,与真核表达质粒pcDNA3.1(+)连接构建了pDNAIL-1β和pDNAIL-16。分别将两种重组质粒与IBVDNA联合免疫SPF雏鸡并进行攻毒试验。结果表明,pDNAIL-1β和pDNAIL-16均能促进血清中特异性抗体水平和外周血T淋巴细胞亚群数量的增加(p<0.05),增强IBV DNA疫苗对同型强毒的保护率15%~25%,pDNAIL-1β提升DNA疫苗的抗体水平的时间比pDNAIL-16多7d。试验表明,鸡IL-1β、IL-16基因真核表达质粒对IBV DNA疫苗的免疫具有增强作用。 相似文献
97.
猪瘟是一种高度接触传染的病毒性疾病,可表现为急性、亚急性、慢性、不典型和不显症状的病程。急性猪瘟由强毒引起,发病率和死亡率高,而弱毒所致感染则可能不被觉察。由于猪瘟传染性强、致死率高,给养猪造成极为严重的经济损失,至今仍是养猪业的大敌。目前猪瘟在我国广大散养农户已得到基本控制,但在少数规模化猪场仍有发病的报道,特别是在免疫过的猪群中发病,包括初生哺乳仔猪和断奶仔猪的发病死亡,怀孕母猪及后备猪发病死亡、怀孕母猪流产和死胎等。本文就规模化猪场猪瘟防制中的一些问题,提出讨论及建议。一、病原猪瘟是由黄病毒科(Flav… 相似文献
98.
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高干开心形苹果园亩枝量对苹果产量及品质的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
以10、20、30年生高干开心形苹果树为试材,选留不同枝量,研究其对果园产量及果实品质的影响,以期确定不同生长阶段最佳亩枝量,为果园科学修剪提供理论依据。结果表明:不同树龄果园亩产量均随亩枝量的增加呈先增后减的趋势,试验所涉区间内,10、20、30年生树亩枝量分别为8.05~9.45、7.13~7.78、5.73万条时,亩产最高,分别达3800~3824、3207、2363kg;不同树龄果园苹果单果重、果肉中可溶性固形物含量(TSS)及花色苷总量均在试验所设区间内随亩枝量的增加而降低。相关分析表明,4指标均与亩枝量具极显著相关性(r=-0.929~-0.994),其中单果重、TSS、花色苷总量与亩枝量在供试区间内呈极显著负相关(P0.01)。综合各指标,10、20、30年生果园的亩枝量分别为6.5、5.4、4.2万条时,果园产量、果个大小、果实的TSS含量以及果皮中花色苷含量均能达相对较高水平。 相似文献
100.
猪弓形体病的诊断与防治 总被引:2,自引:0,他引:2
猪弓形体病又称弓状体病、弓浆虫病和毒浆虫病,是由龚地弓形体(Toxoplasma gondii)引起的一种人畜共患的寄生虫原虫病。临床常称“无名高热”病,以高热稽留、呼吸及神经系统症状、皮肤发绀和妊娠母畜的流产、死胎、胎儿畸形为特征。自于恩庶1955年首次在福建发现本病流行以来,随后又在上海、湖北、北京、辽宁、云南、江苏等地的“无名高热”病猪体内分离到弓形虫。近年来,本病常呈暴发流行,给养猪业造成了巨大的经济损失.并且猪肉内含有弓形虫,如生肉类或污染肉类被人食用,就可能传染给人,威胁人类健康。现就四川省某规模化种猪场发生本病的诊治情况报告如下。 相似文献