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111.
【目的】马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是影响马铃薯产量和品质的主要病毒之一,目前尚未发现有效的防治药剂,脱毒种薯的应用是预防PVY危害的主要防治措施。建立灵敏度高、特异性强的PVY快速检测方法,为脱毒种薯质量控制提供技术支撑。【方法】将PVY衣壳蛋白(coat protein,CP)分段表达为有重叠部分的小段多肽,以其为抗原通过Western blot分析PVY-CP的抗原表位。以P/N值最大为标准,通过常规双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)对识别不同抗原表位的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)进行配对试验,筛选一组检测效果最优的配对单克隆抗体,并确认捕获抗体和检测抗体。通过方阵滴定法确定捕获抗体及检测抗体的最佳工作浓度,通过控制变量法确定检测抗体与抗原的最佳共同孵育时间。以不同浓度的PVY-CP蛋白为抗原,检验快速DAS-ELISA的灵敏度。以感染不同病毒的马铃薯样品为抗原,检测快速DAS-ELISA的特异性。同时通过快速DAS-ELISA与RT-PCR检测50份田间采集的疑似感染PVY的马铃薯样品,将二者结果相比较检验检测方法的... 相似文献
112.
以采自吉林省白山市靖宇县的野生百合感病叶片为试材,采用小RNA深度测序法检测到1株百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV),采用分段克隆方法,对LMoV靖宇分离物(LMoV-JY)的全基因组进行测定并分析,以期对吉林省百合病毒病的检测和防控提供参考依据。结果表明:LMoV-JY基因组大小为9 648个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号MT795719),该核苷酸序列在第154~9 444位存在1个大的开放阅读框(ORF),编码1个多聚蛋白(分子量351.46 kD)。LMoV-JY与GenBank中登录的其他LMoV分离物的全基因组核苷酸序列比较,其一致性为82.82%~97.85%,在氨基酸水平上的一致性为92.96%~98.64%,其中与百合斑驳病毒大连分离物LMoV-DL(HM222521)的一致性在该2种水平上均为最高。对比LMoV-JY外壳蛋白与其他54个分离物的氨基酸序列,发现可将LMoV分离物分为2个类群。 相似文献
113.
为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法,本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后,合成质粒p ET-28b (+)-omp A,另外设计特异性引物,分别将omp A截短克隆至p ET-28b(+)载体中构建重组表达质粒p ET-28b(+)-omp A1-182和p ET-28b(+)-omp A183-390,测序鉴定正确后分别转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并纯化后,经western blot鉴定3个重组蛋白,结果显示,重组MOMP183-390蛋白(r MOMP183-390)表达效果最好。以r MOMP183-390作为包被抗原,采用方阵滴定法优化各反应条件,初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法。采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清,结果显示,除Cp外,该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应,特异性强;将C... 相似文献
114.
对前期筛选得到的猕猴桃溃疡病病原菌丁香假单胞菌亚种(Pseudomonas syringae pv. actinidiae,PSA)拮抗菌进行了鉴定和抗菌物质分离及分析。用革兰氏染色鉴别菌株;将硫酸铵沉淀溶液进行牛津杯抑菌试验,观察抑菌圈的大小;利用Tricine-SDS-PAGE电泳分析硫酸铵沉淀的抑菌物质;然后溶解沉淀进行去离子水透析脱盐,超滤浓缩后用葡聚糖凝胶柱进行分子筛凝胶过滤层析,最后采用高效液相色谱分析其分子量大小。结果发现:可判断有效抑制PSA生长的假单胞菌菌落形态特征为圆形菌落、乳白色、光滑、凸起、边缘整齐、不透明、不运动,为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;其抑菌物质为细菌素,在40%和60%硫酸铵饱和度下提取效果最明显,抑菌作用最好,细菌素分子量大小为7 k Da左右。为研发细菌素产品提供了新思路,为防治猕猴桃溃疡病提供了理论基础和应用指导。 相似文献