霉菌毒素吸附剂对荷斯坦牛产奶性能及免疫功能的影响

本研究采用配对试验设计,选择年龄、胎次、产奶量、泌乳天数相近的荷斯坦牛30头,随机分成两组,每组15头,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮基础上饲喂复合霉菌毒素吸附剂20g/(头·d),其他饲养管理方式不变。预饲期7d,正试期63d,分别测定产奶量、乳成分、血液生化指标、抗氧化能力及免疫调节功能指标。结果表明,饲粮中添加复合霉菌毒素吸附剂对奶牛产奶量及乳成分无显著影响(P>0.05),试验组较对照组乳中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马毒素分别降低了13.36%(P<0.05)、8.64%(P<0.05)、3.75%(P>0.05),血清中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马毒素分别降低20%(P<0.05)、14.62%(P<0.05)、13.88%(P<0.05)。两组血液生化指标及抗氧化指标差异不显著(P>0.05),试验组的IL-1、IL-6水平低于对照组,但差异不显著(P>0.05),TNF-α含量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果提示在不影响泌乳牛正常生产性能情况下,使用复合霉菌毒素吸附剂可以降低奶牛体内及乳中霉菌毒素的残留。     

不同温湿指数下荷斯坦奶牛外周血抗氧化指标的变化及其与淋巴细胞凋亡的关系

选择体重、胎次、泌乳量均接近的健康荷斯坦奶牛32头,研究不同温湿指数(THI)条件下奶牛生理常数、外周血淋巴细胞凋亡和细胞周期以及血液抗氧化指标的变化,探讨血液抗氧化指标与细胞凋亡的关系.结果表明:(1)夏季热应激时期奶牛的呼吸频率和直肠温度极显著高于冬季非热应激处理组(P<0.01).(2)热应激可明显地增加奶牛外周血淋巴细胞的凋亡率,淋巴细胞凋亡率在THI为83.58时达到最高,为17.79%,与非热应激处理组相比差异极显著(P<0.01).(3)在THI为78.09时,G0/G1期细胞比例下降到最低,S期和G2/M期细胞比例达到最高,与非热应激处理组相比较差异均极显著(P<0.01);同时外周血淋巴细胞的增殖指数在此时达到最大值.(4)奶牛外周血超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性在夏季高温季节比非热应激处理组均呈极显著下降(P<0.01);丙二醛(MDA)含量在夏季高温季节时呈极显著上升(P<0.01);抗活性氧(抗ROS)活性在THI为83.58时最低.(5)血液中SOD、GSH-Px和抗ROS的活性与奶牛淋巴细胞凋亡率均呈中等强度负相关(P<0.01);MDA含量与淋巴细胞凋亡率呈正相关(P<0.01).可见:(1)热应激显著提高了奶牛的直肠温度和呼吸频率;(2)热应激对奶牛血液抗氧化指标与淋巴细胞凋亡率的变化影响显著;(3)奶牛外周血抗氧化指标的变化与淋巴细胞凋亡存在显著的相关性.     

TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及HSP70蛋白表达的影响

【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt 技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10 ng&#8226;ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10 ng&#8226;ml-1 TGF-β1组与对照组差异显著（P＜0.05）;10 ng&#8226;ml-1 TGF-β1作用于乳腺上皮细胞, 随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24 h与对照组相比差异极显著（P＜0.01）;LDH活力随作用时间延长而升高,12、24 h与对照组差异极显著（P＜0.01）;DNA完整性随 TGF-β1作用时间的延长发生不同程度降解;TGF-β1作用2～6 h细胞大量表达HSP70,6 h达到高峰,而后下降,2～12 h的表达量均极显著高于对照组（P＜0.01）。【结论】TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,具有浓度依赖性。10 ng&#8226;ml-1 TGF-β1可以显著增加细胞凋亡率,提高细胞培养液中LDH活力,使细胞DNA发生不同程度的降解,同时HSP70蛋白随TGF-β1作用时间发生显著的表达变化。本试验结果表明,TGF-β1可以以促进上皮细胞凋亡的方式,促进奶牛乳腺发生退化。     

转化生长因子β_1对奶牛乳腺组织细胞凋亡及HSP_(70)蛋白表达的影响

应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子猹1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响.用10 ng·mL-1 TGF-猹1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组.结果显示,随TGF-猹β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P<0.05),LDH活性逐渐升高,6、12、24和48 h组极显著高于对照组(P<0.01).处理12、24和48 h组织DNA发生断裂;Caspase-3活性在24 h达到高峰,并极显著高于对照组(P<0.01);上皮细胞逐渐由腺泡脱落,腺泡塌陷,但间质结构基本完整;超微结构观察显示,48 h时上皮细胞呈现染色质凝集、线粒体肿胀等明显凋亡特征,而成纤维细胞胞浆致密、线粒体丰富,结构较完整.处理3～12 h后组织过表达HSP70,且均显著高于对照组(P<0.05).结果提示:TGF-猹1以促进上皮细胞凋亡的方式促进奶牛乳腺发生退化.     

HSP70基因PCR-SSCP实验条件的优化

对HSP70基因PCR-SSCP的分析方法进行了优化,结果发现在凝胶浓度为15%,丙烯酰胺(Acr)和N,N′-亚甲基双丙烯酰胺(Bis)之比为29∶1的聚丙烯酰胺凝胶常温180V电压下,其产物的电泳效果较好,条带清晰,可以为其他SSCP分析方法提供参考。     

下丘脑-垂体-性腺轴在动物生殖中的作用

下丘脑－垂体－性腺轴在动物生殖中的作用王根林（南京农业大学动物科技学院２１００１５）动物生殖是一个十分复杂的生理过程。广义而论，生殖过程的开始应从早期胚胎性分化为起点。虽然此时胚胎并没有一般意义上的性腺及性器官的明显发育，但却伴随着一系列生殖生理及形...     

单一或连续高温处理对奶牛乳腺细胞的生长及凋亡的影响

用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40 ℃1 h)或连续高温(40 ℃1 h&#183;d-1)3～7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响.结果表明:40 ℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37 ℃)(P＜0.01),细胞死亡率在热处理后6 h达到最大值,并极显著高于对照组(P＜0.01).高温(40 ℃1 h)诱导细胞HSP70的表达,HSP70阳性细胞比率在热处理后3 h达到最大值.连续的40 ℃1 h&#183;d-1诱导细胞产生G2期阻滞;连续4 d以上的40 ℃1 h热处理显著地抑制了细胞的增殖(P＜0.05).结果提示:高温诱导乳腺细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,并诱导乳腺细胞HSP70的表达.     

高效养殖奶牛专题讲座（八）——奶牛繁殖障碍的综合防治

奶(母)牛的繁殖障碍指奶牛不能正常发情、受孕或妊娠等现象。引起奶牛繁殖障碍的原因很多，常见的有奶牛的子宫疾病、卵巢功能异常、人为操作不当等．此外，营养不平衡、季节性(特别是高温季节)因素等也可引起不孕。     

鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3 159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA.序列分析表明, cDNA含443 bp 5′-UTR、2 496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3′-UTR.比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子.推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸.gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富.     

母牛循环血抗精子抗体的固相酶染色法检测与不孕症关系的研究

利用固相酶染色法(Solid-phase Enzy em Staining Assay,SESA),检测奶母牛循的环血抗精子抗体(ASAb)本平,研究奶牛不孕机制,AsAb的检测意义及与不孕症之间关系。采集奶牛血清样共160例。包括:处女牛12例,妊娠及产后一月正常空怀母牛26例,屡配不孕母牛93例,子宫内膜炎母牛21例,隐性发情母牛8例。利用公牛正常新鲜精液,PBS洗3次,校正精子密度为50×10~6/ml,涂片,自行干燥,甲醇固定10—20分钟,加灭活血清样,37℃,30分钟,用PBS洗3次,加兔抗牛IgG-HRP,37℃,30分钟,PBS洗3次后,加新鲜配制底物DAB(3,3一二氨基联苯胺盐酸盐),继续作用30分钟(37℃),同法洗3次,油镜观察反应。结果:阳性(精子头部成棕黄色)俭出率,处女牛0％(0/12);正常孕牛7.7％(2/26);不孕母牛(平均)35.25％(43/122);子宫内膜炎不孕母牛28.57％-(6/21);屡配不孕母牛36.56％(34/93);隐性发情母牛37.50％(3/8)。不孕牛ASAb滴度最低为1:16,最高为1:256。结果表明,处女牛、正常孕牛与不孕牛的AsA b阳性检出率差异显著(P<0.01),屡配不孕母牛,子宫内膜炎不孕母牛及隐性发情母牛AsAb阳性检出率之间的差异不显著(P>0.05)。对屡配不孕牛不孕胎次及不孕期配种次数(1—12次)间的AsAb阳性率比较表明,不同配种次数(情期数)(3～6次)之间无统计学差异(P>0.05),不孕胎次之间亦无统计学差异(P>0.05)。研究表明,用SESA法检测母牛AsAb,阳性率与不孕症之间的相关性高,检测方法具有特异性强,敏感性、精密度较好的特点,对探索奶牛不孕机制,为奶牛不孕症的诊断与治疗提供实验手段和实验依据,具有理论与应用意义。