抗鹅α干扰素单克隆抗体的制备及初步鉴定

以含有鹅α干扰素(IFN-α)基因的真核表达载体pcDNA3.1-GOWN-α免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤技术制备抗鹅α干扰素单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究.实验获得2株抗鹅IFN-α的单克隆抗体.经鉴定,Ig亚类均为IgM,轻链为κ链;腹水效价均达到10-4以上;Western blot证实2株McAb均能与重组IFN-α发生反应,出现特异性条带;其中一株单抗能与鹅脾细胞诱导产生的天然干扰素反应;杂交瘤细胞株连续传20代以上及冻存后复苏,细胞生长良好,效价稳定.抗鹅IFN-α单克隆抗体的制备,为研究和检测IFN-α提供了一种重要的手段,并为其在免疫机制研究、免疫功能检测、纯化IFN-α等领域提供了广泛的应用价值.     

用于检测小鹅瘟抗体的Dot-ELISA建立

以小鹅瘟病毒(GPV)VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原,建立了鉴别GPV全病毒抗体与VP3亚单位抗体的Dot-ELISA.该方法中检测抗原包被浓度为70ng/斑点,兔抗鹅IgG-HRP标记抗体的最适稀释度为1:200,被检血清最佳稀释度为1:400.特异性试验的结果中,检测抗GPV抗体的阳性率为100%,而抗GPV-VP3禽痘重组病毒抗体的阳性率为0,表明其有很好的特异性与灵敏度.     

免疫胶体金半定量检测牛初乳IgG含量方法的建立及初步应用

用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备了20nm粒径的胶体金,颗粒均匀,在检测时颜色清晰,易于辨析。胶体金标记牛标准IgG的最适稳定量为22ug/mL。标记后免疫胶体金用含有1%BSA和0.02%叠氮钠的0.01mol/L的PBS作为稳定剂,可使制备的免疫胶体金在4℃条件下保存3个月以上。制作的检测膜片可以在15min内显示结果,且结果可长期保存。用本方法和琼脂免疫单扩散法对10份牛初乳样品和6份牛初乳制品进行检测,结果显示:牛初乳及初乳制品稀释倍数与检测膜片显色同免疫单扩散法测定的结果均有很好的相关性,但灵敏度比琼脂免疫单扩散法低。本法不仅操作过程更为简单快速,不需要特殊仪器和设备;而且检测试剂的制备简单,稳定性高,更适合于作现场实验,因此本方法具有广泛的应用及推广价值。     

减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定

根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗三种佐剂乳化效果比较

新城疫(ND)和禽流感(AI)是危害养禽业最为严重的两种传染病,广泛分布于世界各国。这其中,ND与H9亚型AI混合感染发病率最高,在临床上最常见,给我国的养禽业造成了严重的经济损失。国内外普遍使用疫苗(有活苗和灭活苗两种)预防这该疾病,单苗的使用较为普遍,但单苗存在使用不便,两次免疫造成养殖成本上升。为此     

鹅IL-2成熟基因的表达及重组蛋白生物活性检测

从PHA活化的东北白鹅外周血淋巴细胞中分离提取总RNA,利用反转录PCR技术扩增获得鹅IL-2(GoIL-2)基因,连接至克隆载体后进行测序鉴定,结果与预期大小一致.将去除信号肽的成熟基因亚克隆至原核表达载体,构建原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌中进行诱导表达,用表达纯化的融合蛋白制备多克隆抗血清.此外,体外淋巴细胞增殖实验结果显示,鹅GoIL-2重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性,这为进一步研究GoIL-2的功能奠定了基础.     

综合防控口蹄疫的关键技术——疫苗免疫

口蹄疫的发生和流行严重危害畜牧业的发展,造成惨重的经济损失,因此防控和消灭口蹄疫成为许多国家共同关注的问题。疫苗免疫是特异性预防和控制该病的有效手段。本文从免疫方式、动物种类、地域因素、生物模型4个方面对疫苗防控措施的建立加以论述,提出了常规免疫策略以及非疫苗预防免疫策略,并对紧急疫苗接种与感染动物扑杀进行了时效性分析,旨在面临疫病挑战时制订具有针对性的疫病防控措施,从而使疫苗免疫在控制、消灭和防止口蹄疫传播等方面更能有效地发挥作用。     

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达

以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物，通过RT－PCR技术，扩增其核衣壳（N）蛋白基因的cDNA；将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点；将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株，在浓度为1.0mM IPTG和37℃条件下诱导，PHN基因融合蛋白获得了表达；经SDS－PAGE，Western-blot试验，确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的47kD。试验结果证明，在大肠杆菌中表达的TGEV N基因的融合蛋白产物的确具有天然蛋白的抗原性。     

牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

克隆牛α0干扰素(BoIFN-α0)成熟肽基因,使其在真核细胞中表达,并研究其表达蛋白质的活性。通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichia pastoris表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-BoIFN-α0,重组质粒经PmeⅠ酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100μg·mL-1 zeocinTM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明:SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21ku,推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性,达到5.72×106 U·mg-1。这些研究结果为牛IFN-α的更深层次应用奠定了基础。     

鸡源致病性大肠埃希氏菌血清型鉴定

鸡大肠埃希氏菌病是由埃希氏大肠杆菌(E·Coli)的某些血清型所引起鸡的不同类型疾病的总称。从现有的资料看,各地区流行的鸡致病性大肠杆菌的血清型不尽相同。其中以O_1、O_2、O_(78)在世界各地流行普遍,致病力也最强。近几年在国内也相继报导了由O_1、O_(78)、O_7、O_(73)和O_(88)等所引起的鸡大肠杆菌病的主要血清型。虽然在我省各养鸡场致病性大肠杆菌病时有发生,但却很少了解这些致病菌株