鸡痘病毒282E_4株基因组2.9kbBamHI片段的序列测定与分析

对我国鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4株基因组 2 .9kb Bam HI片段进行了序列测定与分析。结果表明 ,该片段全长 2 92 3 bp,A T含量为 72 .0 8%,含 6个完整的开放读码框架 ( ORF)和 2个不完整的 ORF,最大的ORF所编码多肽的相对分子质量为 2 4 60 0。在 2个 ORF的上游存在痘苗病毒晚期启动子的保守序列TAAAT,在 6个 ORF的下游和 2个 ORF的编码区内存在痘苗病毒早期转录终止信号 T5NT。把该片段的核苷酸序列和每个 ORF所编码的氨基酸序列分别对 EMBL核酸序列库和 SWISS-PROT蛋白质序列库进行了同源性搜索 ,未发现同源性片段     

应用抗多肽抗体鉴别新城疫病毒强弱毒株

在克隆我国流行的新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株Ｆ４８Ｅ８株、四平株及弱毒株长春株、Ｖ４株和ＨＮ和Ｆ基因并进行测序的基础上,针对我国流行的ＮＤＶ强毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）的Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将其与小牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制备成全抗原,免疫小鼠制备出抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＮＤＶ强毒株呈强阳性反应,而与鸡痘病毒、鸡传染性法氏囊病病学、ＮＤ 弱毒株长春株和Ｖ４株呈阴     

流感复合多表位疫苗的设计及小鼠免疫研究

鉴于目前出现了多种亚型禽流感病毒共存的局面,研究多价流感疫苗具有重要意义。根据各表位的免疫学特性,结合分子生物学信息软件的模拟功能,以H 3、H 9亚型流感病毒的HA抗原表位、流感病毒的其他主要抗原(NP、NA、M)表位的基因为基础,再附以K ozak序列和适当的酶切位点,设计并合成大小为765 bp的复合多表位基因盒-Ep。i将Ep i基因克隆入真核表达载体pIRES1neo中,构建DNA重组体pIR-Ep i;将H 7HA、Ep、iH 5HA基因以融合表达方式克隆到pIRES1neo中,构建了DNA重组体pIRE-H 57-Ep。i以上述构建的DNA重组体与鸡痘病毒重组株对BALB/c小鼠进行免疫接种后,检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明,流感病毒复合多表位DNA重组体pIRE-H 57-Ep、ipIRE-Ep i免疫组小鼠均能产生针对H 3亚型流感病毒的特异性抗体,抗体效价(1∶1 600~1∶6 400)低于灭活疫苗免疫组(1∶12 800),但均高于其他对照免疫组(P<0.01)。pIRE-H 57-Ep i免疫组抗H 5、H 7 HA抗体效价分别为1∶12 800和1∶6 400,均高于其他免疫组(P<0.05)。pIRE-Ep i免疫组抗H 5、H 7HA抗体效价(1∶200,1∶100)较低,与其他对照免疫组差异不显著。pIRE-H 57-Ep i与pIRE-Ep i免疫组抗H 9亚型A IV的HA抗体效价(1∶6 400,1∶3 200)明显高于其他免疫组(P<0.05)。与PBS对照组及空质粒pIRES1neo对照组比较,用所构建的重组体免疫的各试验组小鼠的T淋巴细胞亚类CD 4 和CD 8 的数量显著提高(P<0.05)。pIRE-H 57-Ep i与pIRE-Ep i试验组的CD 4 与CD 8 淋巴细胞的数量较灭活苗显著增多(P<0.05),而各重组体免疫组之间差异不显著。此外,所有组的CD 4 /CD 8 比值均稳定在1.5~2.0,表明无异常免疫应答出现。EL ISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ-斑点数实验结果表明,pIRE-H 57-Ep、ipIRE-Ep i试验组的IFNγ-斑点数量(>70)比灭活苗(<40)显著增多(P<0.05),而各重组体免疫组之间差异不显著。上述结果说明,所构建的DNA重组体有良好的免疫原性,为最终获得能同时预防多种亚型流感病毒的多价疫苗奠定了基础。     

我国部分地区新城疫病毒分离株生物学特性的研究

从北京、昌黎、广州、长春、四平、青岛等地区采集疑似新城疫病鸡的病料，通过鸡胚接种分离出6株病毒，经血凝、血凝抑制试验和形态学观察，鉴定为新城疫病毒（NDV），分别命名为北京株、昌黎株、广州株、长春株、四平株、青岛株。测定了这6株NDV的致死鸡胚的平均时间（MDT）和脑内致病指数（ICPI），MDT分别为58．2，64．5，55．2，96。0．61．2和57．9h，ICPI分别为1．66，1．45，1．60，0．69，1．45和1．65。由这两项指标判定北京株、广州株、青岛株为强毒株，昌黎株和四平株为中强毒株，长春株为弱毒株。此外,还测定了6株NDV的血凝谱，各毒株均能凝集鸡和人（O型血）的红细胞，对猪、山羊、绵羊、牛和马的红细胞凝集作用有差异。     

应用Bac to Bac 系统表达NDV长春株HN蛋白基因

将质粒pKSHNC利用BamHI和XbaI双酶切后回收。将转座载体pFast BacI同样方法酶切、回收。将回收的HNC与pFastBacI连接，使目的基因亚克隆到pFast BacI上的ocu基因启动子下游的MCS上，然后转化E.coliDH5α，以LB／AMP＋GM平板筛选阳性重组子，经酶切鉴定，再转化至Ecoli DH10Bac感受态细胞中，经抗性培养和蓝白斑筛选，挑取白色菌落为阳性重组表达载体，经酶切鉴定后，命名为Bacmid HNC。经小量提取后，转染sf-9细胞，27℃培养72h，应用SDS－PAGE和Western-blot检测和鉴定表达的HN蛋白。结果表明，本研究成功地构建了BacmidHN重组表达载体，本研究成功地构建了BacmidHN重组表达载体，并在sf-9昆虫细胞中表达了NDV长春株HN基因，SDS－PAGE出现一条特异性泳带，约74kDa，Western-blot结果出现一条杂交带，分子量与之相同，进一步证明我建的重组表达载体表达了NDV长春株HN基因。     

"灵品"在作物霜霉类病害中的应用

霜霉类病害是由真菌侵染所致，通常是在连续潮湿和降雨天气后发生，是最具破坏性的病害之一。此病从幼苗到收获各阶段均可发生，以成株受害较重。发病初期在叶面形成浅黄色近圆形至多角形病斑，空气潮湿时叶背产生霜状霉层，有时可蔓延到叶面。后期病斑枯死连片，呈黄褐色，严重时全部外叶枯黄死亡。病害严重时可造成20％～40％产量损失。     

猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆

本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成上物。采用反转录，将ＥＩ基因分两段，设计合并成了４条引物。     

云南高油玉米产业化前景

高油玉米是人工创造的高附加值油饲或油粮兼用作物,对农业生产有重要意义.论述了国内外高油玉米的发展概况及云南省高油玉米的选育进程.指出了云南省在开发高油玉米产业化方面具有广阔的发展前景和存在的问题。     

高压静电场处理对番茄果实硬度变化的影响

以绿熟番茄果实为试材,贮藏前用-200kV/m和200kV/m的高压静电场处理2h,在(13±1)℃,湿度85%~90%试验冷库中贮藏24d,定期测定果实的硬度、多聚半乳糖醛酸酶和羧甲基纤维素酶活性以及果肉原果胶和可溶性果胶含量的变化。结果表明:2种静电场(200kV/m或-200kV/m)对番茄果实预处理2h可显著抑制果实羧甲基纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶活性,有效延缓果实原果胶水解,表明高压静电场预处理有利于保持番茄果实硬度。