新城疫病毒在不同的细胞上增殖特性的研究

研究新城疫病毒（Ｎｅｗｓｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）可,弱毒株在不同的传代细胞的生物学特性。Ｆ４８Ｅ８强毒株在ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ中都能增殖并产生细胞病变,而Ｖ４生弱毒株不能在ＢＨＫ和Ｖｅｒｏ中增殖,当ＭＥＭ含１０ｕｇ／ｍＬ胰蛋白酶时,ＮＤＶ弱毒株在Ｖｅｒｏ中能较好地复制,将Ｖ４株在Ｖｅｒｏ中传代培养后,Ｖｅｒｏ中传代的Ｖ４毒株的ＨＡ较低,但毒力增强,ＢＨＫ中传代的Ｖ４毒     

NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较

以新城疫病毒（NDV）长春株接种9日龄SPF鸡胚增殖后,进行了蚀斑纯化（三代）鉴定,差数、蔗糖密度梯度离心提纯和生物学特性鉴定。结果表明,该病毒的鸡胚平均致死时间（MDT）大于168h,雏鸡脑内致死性（ICPI）为0.25,雏鸡静脉致死性（IVPI）为0,血凝解脱时间超过120h,血凝素热稳定性56℃ 5min 仍具有血凝活性。系统发育进化树分析表明,NDV长春株与La Sota株亲缘关系最近,为弱毒株。参考多株NDV HN基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR一次性扩增出NDV长春株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS（-）后,进行了序列测定。序列分析表明,该HN基因苷酸长度为1731bp,编码577个氨基酸,序列中有5个糖基化位点,12个半胱氨酸残基,与国外发表的NDV毒株序列相符,核苷酸同源性为88.1%～98.8%,推导的氨基酸同源性为91.1%～98.8%。     

BCA-TCA法快速测定烟草蛋白质的研究

为快速准确地测定烟草中的蛋白质含量,建立并优化了BCA-TCA法,即提取烟叶蛋白质的最佳体系条件为pH值7.0的0.05 mol/L PBS缓冲液、液料比40 m L/g,使用TCA沉淀蛋白质,利用差减法去除烟叶中还原性物质对BCA方法准确性的影响,从而准确测定样品的蛋白质含量。结果表明:该方法测得的烟叶样品蛋白质含量变异系数小于5%,重复性较好;样品的加标回收率为96.39%,加标回收变异系数为0.75%2%,准确度高;BCA-TCA法和克达尔法测定值的t检验结果为t=1.554 5t_(0.05),8=2.306,说明2种方法在95%的置信区间内无显著差异,但建立的BCATCA法将耗时缩短至2.5~3.5 h,且操作步骤简捷、所用设备简单。可见,建立的BCA-TCA法能够快速准确地测定烟草中的蛋白质含量。     

不同贮藏条件对宣化牛奶葡萄品质的影响

研究了不同贮藏条件对宣化牛奶葡萄品质及保鲜效果的影响.结果表明,保鲜剂SO2、ClO2及气调贮藏处理能有效控制葡萄果实叶绿素含量、可溶性固形物含量的下降,降低葡萄的失重率、腐烂率及褐变指数.而ClO2处理更能明显延缓宣化牛奶葡萄叶绿素的损失,保持鲜食宣化牛奶葡萄的嫩绿色泽.气调和保鲜剂综合处理贮藏效果明显优于普通冷藏和单纯的保鲜剂处理.最佳的贮藏工艺为气调结合ClO2贮藏,即贮藏温度-1～0℃、O2体积分数5％～8％、CO2体积分数2％～5％、ClO2用量8 g/m3;在该条件下,宣化牛奶葡萄贮藏60d左右仍具有良好的食用和商品价值.     

鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立

将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5P/N2.0为可疑,P/N1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。     

高油玉米产业化开发在云南省的发展前景

高油玉米是具有高附加值的油饲或油粮兼用作物，对农业生产有着重要的意义。云南省农科院粮作所高油玉米课题组在高油玉米杂交种选育和高油玉米生产的研究中取得了可喜的进展，选育出“珍油玉1号”、“珍油玉2号”2个含油量和产量均超过中国高油玉米主推种“GY115”，产量超过云南省主推普通玉米杂交种“会单4号”。在普通玉米高油化栽培技术的研究中，获得了用高油玉米杂交种作为授粉者在单产不减的前提下，使云南省主推普通玉米“会单4号”和具有自主知识产权的“云试5号”含油量平均提高49．1％。云南省高油玉米产业化开发前景广阔，但也存在亟待研究和解决的问题。     

反应温度对以香荚兰为原料的美拉德产物分布及卷烟加香的影响

[目的]研究不同反应温度对以香荚兰为原料的美拉德反应产物的影响,以期开发一种新型的烟用香料.[方法]以香荚兰为原料,采用气相色谱—质谱(GC-MS)分析检测香荚兰发酵液在不同温度(90、100、110和120℃)下美拉德反应产物的挥发性成分,并进行主成分分析,对比不同温度美拉德反应产物在卷烟加香中的效果.[结果]优化的香荚兰发酵条件为:pH 7,发酵时间24 h,酵母添加量为总料液的5%;共鉴定出106种美拉德反应产物挥发性成分,主要包括醇类、酸类、烯类、酯类、醛类、酮类、酚类和杂环类等;其中美拉德反应温度为100℃时,产物挥发性成分的种类最多,为83种,挥发性成分总量较高,为1035.20μg/g;而美拉德反应温度为110℃时,产物挥发性成分的种类(59种)最少,但总量(1084.07μg/g)最高;杂环化合物中的美拉德反应产物2,3-二氢苯并呋喃、2-正戊基呋喃、吲哚、吡啶和2-甲基吡啶为美拉德反应的标志物,可赋予卷烟烤甜香和烘焙香;主成分分析可知,鉴定出的挥发性成分可分为3个主成分,第一、第二和第三主成分的贡献率分别为44.175%、35.528%和20.297%,分别反映46种、24种和10种指标信息.美拉德反应温度90与100℃样品的主成分差异较小,但二者与美拉德反应温度110和120℃样品的主成分间差异明显;将100℃时的香荚兰发酵液美拉德反应产物在空白卷烟中加香,可增加香气饱满度,改善烟气细腻柔和度,明显提高卷烟舒适性,加香效果最佳,评吸得分最高(93分).[结论]100℃是香荚兰美拉德反应的最佳温度,可制备具有丰富香味物质的美拉德反应产物.     

BK2-灰葡萄孢产生的一种有除草活性的毒素组分

据统计，每年因杂草危害造成的农作物减产高达9．7％，然而化学药剂的大量使用所引发的诸如抗药性或耐药性杂草种群的出现及对非杂草生物的危害等问题目趋严重。近年来随着人们环境意识的增强，化学农药的发展面临着环境质量问题的巨大压力，开发生物活性高、环境相容性好的生物农药成为当代农药发展的必然趋势之一。作者在已发现Botrytis cinema培养滤液具有一定除草活性的基础上对其除草活性组分进行分离纯化。     

鸡痘病毒PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于 FPV的检测     

新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析

新城疫病毒（ＮＤＶ）长春株在鸡胚增殖后纯化,提取ＲＮＡ,然后利用特异性引物,经ＲＴ－ＰＣＲ一次性扩增出了ＮＤＶ长春株的全长Ｆ基因。将该Ｆ基因插入ｐＫＳ（－）后,进行了序列测定。序列分析表明,该Ｆ基因核苷酸长度为１７５８ｂｐ,编码５５３个氨基酸,序列中有６个糖基化位点,１３个半胱氨酸残基,裂解位点区（１１２～１１７）氨基酸序列为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ,与所有弱毒株在这一区域的序列（Ｇｌｙ－Ａｒｇ／Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ）相符,证明长春株为弱毒株。同源性分析表明,长春株Ｆ基因与目前国外发表的其他ＮＤＶＦ基因相比,核苷酸序列同源性在８８％～９９％之间,推导的氨基酸序列同源性在９０％～９８％之间