非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法C_t值与标准品在1.49×10~1～1.49×10¹⁰ copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R^20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。     

蛋鸡肾型传染性支气管炎的诊治

肾型传染性支气管炎是由IBV引起的禽的急性,高度接触性传染病,它以肾肿大,尿酸盐沉积为主要症状,造成雏鸡大量死亡,蛋鸡产蛋量下降。IB在我国的大部分地区都有流行,经免疫接种的鸡群也时有暴发,给养鸡业造成严重的损失,所以在发病后能及时有效的进行治疗,是发病后减少损失的一个重要手段,笔者就临床中对蛋鸡肾型传染性支气管炎防治的体会小结如下,仅供参考。     

论教学视域下和谐师生关系的建构

结合当代师生关系建构理论研究成果,认为：在古代汉语课程教学视域下,建构和谐师生关系应体现师生互容、师生平等、师生共建、师生互动的基本要求,通过更新教师观念,追求高尚师德、坚持师导生本,优化裂孥方法、重构教育交往,拓展交流平台等策略来实现。     

猪德尔塔冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立一种猪德尔塔病毒(PDCoV)的快速检测方法,本研究根据NCBI公布的PDCoV序列设计了1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增PDCoV的S基因,将其连接至pMD 19-T载体上,以构建正确的重组质粒作为标准品,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了验...     

桑树幼叶cDNA文库的构建及部分表达序列标签分析

基于为鉴定和克隆桑树功能基因提供基础信息的目的,采用RNA转录5′末端转换(SMART)法构建了桑树幼叶全长cDNA文库。该文库容量为1.02×106pfu/mL,重组率95%,符合构建基因文库的质量要求。从构建的桑树幼叶cDNA文库中随机挑取48个克隆进行表达序列标签(EST)测序,有效序列为32条,经UniGene数据库归并后为32条,UniGene比率为100%;与NCBI核酸数据库进行比对、查询和注释,在32条序列中有29条序列具有同源性,其中16条为全长序列,完整性比率为55.2%;初步发现具有已知功能基因的ESTs 6个,具有推测功能基因的ESTs 5个,未命名或未知功能基因的ESTs 21个。     

犬圆环病毒Rep蛋白的原核表达

犬圆环病毒(CanineCV)是一种新发现的圆环病毒。制备针对CaineCV Rep的抗体,为建立CaineCV ELISA检测方法及研究Rep蛋白的功能奠定基础。以CaineCV基因组作为模板,扩增出Rep基因序列。PCR产物克隆至pET-28a原核表达载体上,获得了重组质粒pET(28a)-Rep。将重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞后进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明重组Rep蛋白在大肠埃希菌BL21中获得表达。Western blot分析表明,重组蛋白能与Anti-His标签抗体发生特异性反应。该研究构建了pET(28a)-Rep重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中获得表达,为进一步制备Rep的抗体奠定了基础。     

对种猪肉及晚阉猪肉监管问题的思考

规范、合理使用种猪及晚阉猪产品是保障肉制品食用安全的重要组成部分。本文介绍了种猪及晚阉猪的定义及其猪肉特性，对农业农村部门、市场监督部门相关法律法规进行了适用性分析，指出了当前种猪及晚阉猪有关法律法规不完善，种猪及晚阉猪肉鉴别取证难的问题，并从完善法律法规，建立种猪肉及晚阉猪肉标准，落实日常监管等方面针对性进行了探索性思考。     

我国危险固体废物处理处置方法及其存在的问题探讨

该文对我国危险固体废物的处理处置方法进行了介绍,并对方法存在的问题进行了探讨,以期为我国固体危险废物的处理与处理提供依据。     

“市长都管不了，我们能管？”记者亲历42名农民工的讨薪“马拉松”

过去的700多个日日夜夜，从省到市再到区里，走了一圈又一圈，“感觉自己好像一头拉磨的驴。”     

地方高校大学生职业核心竞争力培育策略研究

地方高校业已成为我国高等教育的中坚力量,面对日趋激烈的就业形势,地方高校应保持清醒的头脑,加大学生职业核心竞争力的培育力度,切实做好培育内涵建设,为地方经济培养适用型人才,提高为地方经济服务的本领。文章对地方高校大学生职业核心竞争力内涵与功能定位进行了诠释,详尽分析其面临的困境,并在此基础上阐述了地方高校大学生职业核心竞争力培育的策略。