1株犬源致病性黑曲霉菌的分子鉴定及生物学特性研究

从患皮肤病犬患病部位分离出1株真菌,对其培养特性、形态特征、致病性等生物学特性以及核糖体转录间隔区(rDNA-ITS)的分子特征进行研究.结果表明,该分离株具有曲霉菌的典型菌落和形态特征;经皮肤和腹腔接种途径感染免疫抑制小鼠,均出现与自然感染病例相似的皮肤病变;基于rDNA-ITS序列的分子鉴定证实该分离株为黑曲霉菌.     

白花蛇舌草超微粉对小鼠免疫功能的影响

The assay was aimed to study the effect of Hedyotis diffusa Willd superfines powder on immune function. Three groups of mice were gavaged with the drugs at doses of 1.75,1.25 and 0.75 g/kg once a day for 7 consecutive days, repectively. The mice of control group were administered with the same volume of saline.At the last time, mice were injected into the muscle with Newcastle disease vaccine,and get peripheral blood on days 7, 14 and 21 after the medicine administration. The enhancement of innate immune responses were evaluated by using CCK-8 method, hemagglutination inhibition test, macrophage phagocytic function test and organ coefficient method. The levels of lymphocytes proliferative capacity, serum antibody, peritoneal macrophage phagocytosis and the indexes of immune organs in mice were extremely significantly enhanced (P＜0.01). Hedyotis diffusa dWilld superfines powder could extremely significantly regulate the immunity function of mice (P＜0.01).     

高效液相色谱法测定金荞麦超微粉原花青素B2含量

试验为测定金荞麦超微粉中有效成分原花青素B₂的含量,将四川金荞麦饮片粉碎至0.75 nm以下的超微粉,50%乙醇提取,并利用高效液相色谱测定原花青素B₂的含量。结果显示,在0.0352~1.4080 μg/mL范围内原花青素B₂与峰面积线性关系良好,回归方程为Y=59797X+592.3,r=0.996,金荞麦超微粉中原花青素B₂含量在1.305~1.541 mg/g之间。本试验结果表明该方法能快速、稳定、精确的检测原花青素B₂含量,为金荞麦制剂质量控制提供了科学依据。     

siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达

用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.     

TaqMan实时荧光RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒

根据GenBank中100个H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,对荧光定量RT-PCR反应体系和条件进行优化,并对该方法进行评价.结果表明:该方法对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其他家禽常见病原RNA无扩增;敏感度高,最低检测限为21个拷贝质粒DNA;可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.01%和4.93%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4 h.     

一株牦牛源产细菌素植物乳杆菌SWUN5815全基因组测序及序列分析

旨在分析一株牦牛源植物乳杆菌SWUN5815的全基因组序列测序,并对该菌株的功能特性基因进行挖掘.基于PacBio RSII测序平台对乳杆菌SWUN5815进行全基因组测序分析和GO、KEGG、COG和NR数据库进行基因组基本功能注释.结果 表明:1)植物乳杆菌SWUN5815的基因组大小为3.27 Mb,GC含量44...     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测网状内皮增生症病毒方法的建立

根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR GreenI模式的实时荧光PCR方法(Real-timePCR)。以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性、检出率进行评价。结果表明,该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.8±0.5℃,无引物二聚体;扩增产物片段大小为270bp,与预期大小相符,测序结果证实为REV靶序列;在1.01×102～1.01×109拷贝之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率为99.7%,最低可检测101拷贝/反应阳性标准品,比常规PCR敏感103倍;组内变异系数、组间变异系数分别为4.80%～5.72%、0.75%～3.87%;对16例临床疑似病例进行检测,阳性率为81.25%(13/16),随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,证实为REV序列。本研究建立的SYBR GreenI实时荧光PCR特异性强、通量高、灵敏度高、检测速度快,为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法。     

白花蛇舌草多糖对小鼠免疫功能和生长发育的影响

为探讨白花蛇舌草多糖对小鼠免疫功能和生长发育的影响,本研究将60只雌性昆明小鼠随机等分为4组,1~3组分别以50、100和150 mg/kg 体重的白花蛇舌草多糖粗提物灌胃小鼠,连续给药7 d,第4组以等量的生理盐水灌胃,作为空白对照组。最后一次给药12 h后,各组小鼠用鸡新城疫弱毒疫苗接种,2头份/只,分别于给药结束后的7、14和21 d采小鼠外周血并分离淋巴细胞和血清。用淋巴细胞转化试验(CCK-8法)测定外周血淋巴细胞增殖能力;微量血凝抑制试验评价血清中新城疫抗体水平;测定各组小鼠体重;21 d测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力,并测定脾脏指数。统计学分析结果显示,白花蛇舌草多糖组小鼠的外周血淋巴细胞增殖能力、免疫抗体水平、腹腔巨噬细胞吞噬能力、脾脏指数和体重均显著高于对照组(P<0.05),且具有量效关系。结果表明,白花蛇舌草多糖能显著提高机体的特异性免疫和非特异性免疫功能,促进机体的生长发育。本试验结果为利用白花蛇舌草多糖开发保健产品提供了参考。     

安宁河流域鸭瘟、鸭霍乱综合防制研究

采用Ｃａｒｔｅｒ荚膜群鉴定法，并参考Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ热稳定抗原鉴定法，对从安宁河流域分离的３７株禽源多杀性巴氏杆菌和中监所提供的Ｃ４８－１株菌进行了血清学鉴定。３７株菌中，鸭源３２株，鹅源４株，鸡源１株。鉴定结果表明，有３７株为荚膜Ａ群菌，占９７．４％，其中Ａ∶５型３４株，占８９．５％，Ａ∶２型３株，占７．９％；１株为荚膜Ｂ群菌，占２．６％。少部分菌株具有明显的交叉反应     

靶向新城疫病毒NP基因的shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定

为验证腺病毒载体在鸡胚成纤维细胞(CEF)及鸡胚中递送小干扰RNA的可行性,本实验利用共转染技术将表达针对新城疫病毒(NDV)NP基因shRNA的重组质粒同源重组到pGSadeno腺病毒载体系统,用重组腺病毒感染CEF和鸡胚,通过红荧光报告基因的表达情况和荧光定量PCR检测NP基因mRNA的表达对其进行鉴定,并通过细胞形态观察、血凝价的测定评价其在CEF和鸡胚上对NDV增殖的影响。实验结果显示重组腺病毒能够感染CEF,感染CEF后6h、9h、12h与对照组比较NP基因mRNA的表达量分别降低了3.2倍,25.6倍,2.57倍,并能够推迟NDV致细胞病变效应,抑制NDV在鸡胚上的增殖,延缓鸡胚的死亡。本实验构建的重组腺病毒能够在CEF和鸡胚上递送特异的shRNA,为在CEF中的RNA干涉研究开辟了新的递送途径。