黄瓜花叶病毒三个毒株对烟草细胞内防御酶系统及细胞膜通透性的影响

 用黄瓜花叶病毒(CMV)PE、M和Xb3个毒株接种烟草(品种K₃₂₆)后,按时间顺序测定与细胞防御系统有关的酶活性和受侵细胞膜通透性变化:1)苯丙氨酸解氨酶(PAL):Xb毒株侵染初期导致酶活性明显升高、后期下降,M毒株导致酶活性一直保持在较高水平,而PE毒株则导致酶活性下降。2)过氧化物酶(POD):PE和M毒株均导致酶活性升高,Xb毒株影响不大。3)超氧化物歧化酶(SOD):Xb和M毒株导致酶活性前期升高、后期活性下降,PE毒株引起酶活性前期略微升高、后期下降。4)多酚氧化酶(PPO):Xb毒株导致发病前期酶活性急剧升高、后期降低,M毒株导致酶活性初期降低、后期回升,PE毒株导致酶活性升高。5)受侵细胞在发病初期的膜通透性均低于正常水平,不同毒株引起的膜透性变化与症状的严重度均有独特的规律。3个毒株的侵染均可引起细胞内可溶蛋白浓度的改变。     

水稻簇矮病的研究Ⅵ.水稻种质对病毒的抗性评价

 以本室保存的RBSV沙县毒源,经人工饲养纯化的黑尾叶蝉(Nephotettix cinctice ps)带毒虫,采用笼罩集团接种法,结合试管定苗定虫接种法,进行抗性测定。结果在供试的156个水稻种质材料中,未见免疫类型,但品种间存在明显的抗性差异,其稻苗发病率在2.09%~88.51%,其中属于高抗的类型有包胎矮、包胎矮选、赤块矮3号和珍龙选3号等品种,可供病区推广使用或作为抗病育种的抗源材料。高抗品种不仅能明显降低病苗率、延长病害潜育期,而且能显著缩短带毒虫的寿命、降低无毒虫的获毒率、减少病株内的病毒量。     

核桃叶抑菌成分的提取及其抑菌活性

对核桃叶乙醇提取物和其不同溶剂萃取部分及层析组分进行抑菌试验,结果显示:乙醇提取物和乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、大肠杆菌和黑根霉有较强的抑制作用.且乙醇提取物的抑菌作用随浓度增大而增强.不同浓度处理时,提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和黑根霉的抑菌作用均达差异极显著水平,对蜡状芽孢杆菌的抑菌作用差异显著.结果还显示:同一浓度提取物对不同细菌的抑菌作用亦不同.     

绞股蓝核糖体失活蛋白的分离、克隆与表达

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein，RIP)具有抗肿瘤和抗病毒等医用价值，以及抗植物病毒和病原真菌等农用价值。它是一种多活性的物质，不同RIP具有各自独特的功能，其潜在活性还在不断发现之中。葫芦科(Cucurbitaceae)植物大多药食同源，其中蕴涵着极其多样的RIP，但多数已知的RIP其基因尚未被克隆，而目前仍无一套快速筛选RIP新基因的方法。葫芦科中的绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)具有抗癌和抗衰老等特殊功效，其中的皂甙和黄酮成分的研究已有大量报道，但．其活性蛋白成分未见报道。为此，本研究开展绞股蓝RIP的分离纯化、基因克隆、原核表达以及转基因植物研究。率先对绞股蓝活性蛋白成分进行研究，从中分离到一种新的核糖体失活蛋白(绞股蓝毒蛋白，Gynostemmin)。它具有很高的抗TMV活性。其分子量约为27kDa。测得其N-端19个氨基酸序列：DINFSLAGADGQTYNTFIA，与其它植物RIP的同源性为10％一73％，与葫芦科RIP的同源性为37％一73％。根据葫芦科RIP上、下游两段高度保守的氨基酸序列设计简并引物对LYl／LY2，对基因组DNA进行PCR扩增，首次建立了RIP新基因快速筛选体系。从冬瓜和南瓜中分别获得了1个和5个RIP新基因，长度为408bp，编码136aa，与其它葫芦科RIP对应区段的同源性约为35％一85％。比较发现，19个葫芦科RIP的LYl／LY2区段上完全相同的氨基酸有29个，其中7个在其它科属来源的RIP中也完全保守，包括构成活性中心的3个残基E160、R163和W192。根据LYl／LY2区段同源性构建的系统进化树表明，葫芦科RIP之间的进化关系与其来源植物间的亲源关系大体一致。通过DNA片段克隆、RACE扩增、cDNA克隆和DNA克隆，从绞股蓝中分离了13个RIP基因，其中10个为cDNA序列，3个是DNA序列(GP609、DNA-750和DNA-8001)。它们之间在碱基水平和氨基酸水平上的同源性都很高，可根据序列上发生缺失的有无及其类型将其分为4组：组1，发生6bp缺失(535 GAAAAC 540，与574-579间的序列完全一样)，包括GynostemminⅡ、GP609和CX8405A，编码275aa；组2，缺失87bp(122-208)，包括DNA-750和CX820，编码248aa；组3，包括5RACE和DNA-8001，不发生组2的87bp缺失，但因其序列较短，无法确认是否具备组1的6bp缺失；组4，包括GynostemminⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ以及EMUZW和RHXJB，既无87bp缺失也不发生6bp缺失，编码277aa。其中GP609与其它葫芦科RIP的LYl／LY2区段的同源性，碱基水平为47％-61％，氨基酸水平为37％-49％。5RACE中包含了由23aa组成的信号肽“MRVARFCTVVAILLYFGFHIAEC”，同时包含有5’UTR序列，其中含有kozak序列“AAAAA”。对绞股蓝RIP基因家族及其编码氨基酸进行的比较分析发现，绞股蓝RIP前体成熟过程中可能发生C-末端切除，并因此造成等电点从弱酸性跃迁至强碱性，这种现象以前未见报道。分析结果进一步支持了RIP基因无内含子的观点。5个含有3’UTR的成员中，GynostemminI比另外4个多了两个小的茎环结构和一富含AU的不稳定子元件ARE(AU-rich element)，其mRNA的稳定性可能因此受到影响。运用生物信息学软件对绞股蓝RIP前体进行碱基组成和密码子偏倚性、氨基酸组成特征、功能位点、亚细胞定位、跨膜结构、核酸结合基序以及空间结构等方面的分析。分别将GP609和RHXJB转入pGEx-2T融合表达载体，在大肠杆菌DH5a菌株中实现融合表达。将DNA-8001连接到pET-5a表达载体上，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中实现天然表达，表达产物对TMV的抑制效果很差，其原因可能是C-末端延伸序列的存在抑制了抗TMV活性的发挥。分别构建了含有GP609和EMUZW的pEmu-mcs-N植物表达载体，同时构建了含有RHXJB的pKYLX71：35S^2植物表达载体(ZW-pK)。采用三亲交配法将ZW-pK转入土壤农杆菌LBA4404中，用于转化烟草品种K-326，分子鉴定表明绞股蓝RIP基因已经整合到再生烟苗的基因组中并发生了转录。重点讨论了绞股蓝RIP的应用前景、RIP基因的内含子、以及RIP的C-末端及其延伸序列的修饰和功能等方面的问题。研究结果为绞股蓝RIP的开发利用奠定了坚实基础，并对探讨其酶学活性、生理功能以及抗病毒机理等RIP研究的难点和热点问题具有一定的指导意义。     

水稻瘤矮病毒基因组S8片段全序列测定及其结构分析

应用RT-PCR技术克隆了水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）中国广东信宜分离物（RGDV-C）的基因组S8片段，并测定了全序列。结果表明RGDV-C基因组s8片段全长1578bp（GenBank登录No．AY216767），含有一个ORF，编码一个含有426个氨基酸的外层衣壳蛋白，基因结构与泰国的RGDV分离物基本一致，核苷酸和推导的氨基酸序列同源性分别为96．0％和99．1％，与植物呼肠孤病毒属（Phytoreovirus）的三叶草伤瘤病毒（Wound tumor virus，WTV）和水稻矮缩病毒（Rice dwarf virus,RDV）各分离物的核苷酸同源性分别为56．8％和55．3％～56．0％。从s8编码的外层衣壳蛋白亲缘关系、反向重复序列、病毒粒体被严格限制于薄壁细胞以及致瘤特性来看，RGDV与WTV比RGDV与RDV具有更近的亲缘关系。     

介体线虫传播植物病毒专化性的研究进展

介体线虫传播植物病毒专化性的研究已取得很大进展.对介体线虫与植物病毒的组合、专化性传播、传播遗传因子、传播的助蛋白策略等方面的最新研究进展进行了评述.     

烟草花叶的有效激抗剂的筛选

<正> 烟草花叶是我国烟区的重要病害,对烟叶产量和品质影响很大。为了寻找有效控制办法,福建农学院病毒研究室自1984年以来进行了大量的激抗剂温室盆栽筛选试验,并推出了6种药剂到主烟区开展小区试验和大田示范,现将结果简报如下。小区试验设在永定县抚市和高坡,小区面积16.67×10~(-4)ha。裂区设计,重复3次。供试品种为密目烟和翠碧一号;供试激抗剂为ER 847、ER 848、ER 849、ER 851、ER 852、ER 853,并以目前推广的NS-83为药物对照,以喷清水为空白对照。施药时间分十字期和成苗期,每次施药前两天人工摩擦接种烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV);并于接种前和喷药后10、20、30、60天调查统计各处理的发病率及病情指数。各小区分别分期采收和     

羊栖菜多酚氧化酶特性

对羊栖菜(Sargassumfusiforme)多酚氧化酶(PPO)进行浸提和硫酸铵分级盐析粗提,并测定了酶的特性.结果表明:在供试反应体系中,当邻苯二酚量为0.3-1.2mL时,酶活力呈直线增长,底物含量太高会产生抑制作用,当底物含量∶酶含量=2∶1时,酶活力表现最高;其酶活力的最适温度为40-45℃,在35-60℃范围内酶均能保持较高的活力,但超过60℃时,其活力则迅速下降;在50-100℃下水浴处理1h,酶活力丧失50%-75%;酶活力的适宜pH相对偏碱,在pH9.1时表现为一个活力高峰,在pH11.0和12.0时酶活力仍很高.提取的羊栖菜多酚氧化酶,存在不同特性的同功酶.5种供试抑制剂对该酶均有一定的抑制效果,其中NaHSO3和L-半胱氨酸的抑制作用最强,在浓度为50μmol·L-1时,抑制率达100%.