猪α干扰素的表达及在PAM细胞系中抗PRRSV活性检测

为研究猪α干扰素蛋白功能和了解猪α干扰素蛋白的抗病毒活性,扩增并测序了猪α干扰素基因(IFN-α),并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-IFN-α,将pET-IFN-α转化至BL21进行表达。Western-Blot结果表明,表达的蛋白具有很好的生物学活性。用细胞病变抑制法在PAM细胞系上进行抗病毒活性测定,结果表明,猪α干扰素有较为显著的抗PRRSV活性,其抗病毒活性效价约为1.13×106U/mg。     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

用EDC法将BSA和OVA分别和环丙沙星（Ciprofloxacin, CIP）偶联作为免疫原和包被原,并经紫外扫描 (UV Scan)、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定。用合成的BSA-CIP免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌CIP单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备CIP mAb,对CIP mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明BSA-CIP人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-4;其中2号小鼠血清CIP抑制效价较高且IC50最低,达48.59μg/L,融合后筛选出Z3G12B3和Z2H8C10两株敏感特异的杂交瘤细胞,其两株细胞培养上清液效价为1:512,腹水效价为1:2.56×105,Z3G12B3株对CIP的IC50为2.47μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03％的交叉反应性,与其他抑制物无交叉反应性。本试验获得了高效价、敏感、特异的抗CIP mAb,为CIP残留ELISA检测试剂盒和试纸条的建立奠定了坚实的基础。     

抗庆大霉素单克隆抗体的制备及其初步应用#br#

 【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM 单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定,;应用阻断ELISA试验原理组装GM-Kit,并对鲜奶中添加的GM标准样品进行测定。【结果】SDS-PAGE电泳鉴定表明BSA-GM人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-3;其中2号小鼠血清GM抑制效价较高且IC50最低,达17.28 ng•mL-1,融合后筛选出5E2-D7、1A3-A9、5E2-A12和2A6-B5共6株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1﹕1600、1﹕800、1﹕800和1﹕800,腹水效价分别为1﹕2.05×107、1﹕5.12×106、1﹕2.56×106和1﹕2.56×106,5E2-D7株对GM的IC50为0.30 ng•mL-1,与链霉素、卡那霉素等其他氨基糖苷类抗生素无交叉反应性;检测鲜牛奶样的平均添加回收率分别为96.0%,平均变异系数均低于15%。【结论】本试验获得了高效价、敏感、特异的抗GM mAb,为GM残留检测奠定了坚实的基础。     

二氧化钛喷施剂对烤烟上部烟叶光合作用和叶绿素荧光参数的影响

【目的】探讨二氧化钛喷施剂对烤烟上部烟叶光合作用及叶绿素荧光参数的影响,为提高上部烟叶的可用性提供参考。【方法】以溶胶–凝胶法特制的二氧化钛为材料,研究了不同浓度和配方的喷施剂对成熟期上部烟叶光合色素含量、光合生理指标及叶绿素荧光参数的影响。【结果】二氧化钛喷施剂延缓了上部烟叶中叶绿素和类胡萝卜素的降解速度。二氧化钛喷施剂对上部烟叶的光合作用和叶绿素荧光参数影响显著,喷施剂降低了上部烟叶的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率,提高了胞间二氧化碳浓度,对叶温的影响不明显;喷施剂处理的PSⅡ最大光化学效率(F_v/F_m)、PSⅡ潜在活力(F_v/F_o)、光化学淬灭系数(qP)均高于清水对照处理,初始荧光(F_o)、非光化学淬灭系数(NPQ)低于清水对照处理。二氧化钛和二氧化钛复合氧化石墨烯2种喷施剂对光强的吸收效能均以质量浓度为0.45 g·L~(–1)的喷施处理表现最好。【结论】喷施二氧化钛的烤烟上部烟叶在一定程度上能够吸收紫外线,其中,二氧化钛复合氧化石墨烯喷施剂对光强的吸收效果较好;喷施剂作用于烟叶的光能吸收效果有一定浓度阈值。     

八角提取物对多种植物病原真菌的抑制作用

试验采用生长速率测定法,研究八角茴香提取物对20种病原真菌的室内抑菌效果,旨在探究八角提取物对多种植物病原真菌的抑制效果。结果表明,八角提取物对番茄灰霉病菌和辣椒灰霉病菌的抑制效果最明显,八角提取物在浓度为1 mg/mL时,对番茄灰霉病菌和辣椒灰霉病菌的抑制率均在96%以上。以番茄灰霉病菌作为供试菌,96 h时,其EC_(50)值为0.22 mg/mL。说明八角提取物中存在抑制番茄灰霉病的活性物质,这为病害防治提供了新的依据和理论基础。     

禽霍乱荚膜亚单位菌苗的研究——Ⅲ、禽多杀性巴氏杆菌胞壁荚膜抗原的若干理化特性

禽多杀性巴氏杆菌荚膜自菌体细胞壁脱离后,在电子显微镜下形态呈开放的C状螺圈结构或不规则形。其化学组成含蛋白质55.5％±12;多糖4.75％± 1.5和磷脂质10.9％±2.5,并含少量的核酸及O-乙酰基。经氨基酸组成测定,含16种氨基酸。用SDS-聚丙烯酰铵圆盘电泳,测得分子量在2.5 ×10~4道尔顿以上。提取的荚膜物质在液状(半成品)时不太稳定,在0～-3℃存放1.5～2个月,蛋白质含量降解至30～50％,在100℃加热30分钟,其成份的抗原活性有所下降。冻干状态(成品)较稳定,在4～8℃存放一年,25～31℃放置15天,蛋白质含量降解极微,仍保持良好的抗原活性。初步试验表明,荚膜抗原对加有常规浓度的消毒药剂的甲醛(0.3％),石炭酸(0.3％)和硫柳汞(0.01％)中,以硫柳汞比较敏感,处理一周后荚膜抗原性下降。这些结果为禽多杀性巴氏杆菌荚膜抗原的提纯及亚单位苗的制备、保存和使用提供了依据。     

纤维素降解菌LY16的筛选鉴定和产酶条件研究

从腐烂朽木及附近的土壤采样,分离到25株具有纤维素分解能力的菌株,其中LY16菌株的纤维素酶活最高.采用形态学观察及分子生物学方法初步鉴定其为里氏木霉(Trichoderma reesei).通过碳氮源优化等试验进行产酶条件研究,得出该菌株最佳的产酶条件,培养基配方为(g/L):微晶纤维素10,麸皮40,蛋白胨4,尿素12,KH_2PO_42,MgSO_4·7H_2O 1,CaCl_2·2H_2O 1,FeSO_4 0.01,MnSO_4 0.004 5,CoCl_2 0.003 6,ZnSO_4 0.0035,培养温度30℃、装液量50mL,转速200 r/min,培养时间为72 h.优化后在该条件下,CMC酶活为202.6 U/mL,FPA酶活最大53.2 U/mL.     

海南根瘤菌I66 nodD基因DNA片段的克隆

从海南根瘤菌（Rhizobium hainanense)I66提取总DNA，用XbaI完全酶切，然后用苜蓿中华根瘤菌（Sinorhizobium meliloti)042B的nodDDNA片段作探针进行Southern杂交，杂现2条含有nodD基因DNA征段的阳性条带，分别为4.0和6.0kb，电泳回收含有4.0-6.0kb的DNA片段，用pUC18作载体连接，并转化E.coliDH5α，构建含有nodD的部分基因文库，提取该文库的质粒与nodD探针做点杂交，筛选到nodD的阳性克隆，称为pUOD75。再将pUOD75的nodD片段克隆到pBBR-MCS-5,构建成pBOD75。用两亲本杂交，把pBOD75转入豌豆根瘤菌蚕豆生物型（Rhizobium eguminosarum bv.viciae)根瘤菌I66nodD基因在毛地黄黄酮诱导下得到表达，说明其表达产物可能具有结瘤调节功能。     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗佐剂研究进展

疫苗免疫是预防和控制传染病的主要措施,但对于猪繁殖与呼吸综合征,疫苗免疫存在免疫效率低与安全性差的问题,效果并不理想。因此,如何在安全剂量下提高动物机体的免疫力,成为疫苗研究的热点之一。试验证明细胞因子、化学试剂和微生物产物等几种免疫佐剂可以增强猪繁殖与呼吸综合征疫苗的免疫效果。在研究的9个疫苗佐剂中,IL-2、IL-12、IFN-α、poly IC和poly ICLC、CpG ODN等能增强猪繁殖与呼吸综合征疫苗的细胞免疫效应;CpG ODN和霍乱毒素能显著提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗的抗体产生水平;IL-2和CpG ODN在临床实验中能增强疫苗对实验动物的保护,是最具潜力的免疫佐剂。     

以合成肽为抗原检测O型口蹄疫病毒抗体 ELISA方法的建立和评价

作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核.结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%.检测199份血清标本,与UBI FMD VP1试剂盒的符合率达到98.49%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达到96.98%.该多肽ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控口蹄疫抗体水平.