水牛SIRT6基因克隆及其在组织中的表达分析

本研究旨在克隆水牛SIRT6基因，构建真核表达载体，并对该基因进行生物信息学及组织表达谱分析。以牛SIRT6基因编码区为种子序列（GenBank登录号：NM_001098084.1），应用Oligo 7.0软件设计引物序列，用RT-PCR方法扩增水牛SIRT6基因完整编码区序列，测序鉴定后进行生物信息学分析，构建逆转录病毒载体pMXs-SIRT6-IRES-GFP，并在HEK-293T细胞和水牛胎儿成纤维细胞上进行重组载体表达鉴定；采集水牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、脑、皮肤、生殖嵴分别提取RNA，反转录后以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，检测SIRT6基因在各组织中的表达差异。结果表明，水牛SIRT6基因编码区全长1 080 bp，编码359个氨基酸，其中亮氨酸及脯氨酸含量最高（10.3%），酪氨酸含量最低（1.1%）。水牛SIRT6基因核苷酸序列与牛、人和小鼠的同源性分别为98.4%、86.7%和78.5%，物种间同源性较低。系统进化树结果表明，水牛与牛聚为一支，再与人、小鼠聚为一大支，亲缘关系相对较近，与果蝇亲缘关系较远。SIRT6蛋白理论分子质量为39.47 ku，分子式为C₁₇₃₇H₂₇₈₃N₅₀₉O₅₁₆S₁₃，等电点为8.48，不存在跨膜区，为膜内蛋白；含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙酰化酶的催化结构。二级结构预测结果显示，水牛SIRT6蛋白包含13个α-螺旋、27个β-折叠、24个T-转角和20个无规则卷曲。逆转录病毒载体介导的SIRT6基因能在HEK-293T细胞和水牛胎儿成纤维细胞中表达。实时荧光定量PCR结果显示，SIRT6基因在水牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、脑、皮肤、生殖嵴中均有表达，其中在生殖嵴中表达量最高，在皮肤中的表达量次之，而在肝脏中表达量最低。本试验结果将为水牛SIRT6基因的功能研究提供参考。     

响应面法优化嗜盐紫色硫细菌283-1培养基

为了提高紫色硫细菌283-1的生物量,对其培养基组分进行优化。采用单因子试验、Plackett-Burman设计法、最陡爬坡试验及中心组合设计响应面分析,研究了乙酸钠、碳酸氢钠、氯化铵、硫化钠、硫酸镁和无机盐6个因子对菌株283-1生物量的影响。结果表明,乙酸钠和硫化钠是影响该菌株生物量的主要因素,并获得了最佳培养基配方:乙酸钠1.45g·L-1,碳酸氢钠0.75g·L-1,氯化铵4.5g·L-1,硫酸镁0.5g·L-1,硫化钠1.05g·L-1,氯化钙0.19g·L-1,氯化钾0.34g·L-1,氯化钠50g·L-1,VB1220μg·L-1,无机盐溶液1mL·L-1。优化后菌株283-1的生物量提高了6倍,结果与理论预测值相近。     

水牛及小鼠腔前卵泡分离的研究

对水牛和小鼠腔前卵泡的分离方法进行了系统探索,旨在找出一种水牛和小鼠腔前卵泡的有效分离方法。实验一分别用梳刮法、剪碎法和显微分离法分离回收水牛卵巢腔前卵泡;实验二采用梳刮法分离水牛胎牛、青年牛和成年牛腔前卵泡;实验三分别用浓度为0(CK)、0.02%、0.04%、0.08%的胶原酶消化水牛卵巢20 m in,然后采集腔前卵泡;实验四采用梳刮法、剪碎法和显微分离法分离小鼠卵巢的腔前卵泡。结果表明,梳刮法能有效地分离回收水牛和小鼠卵巢的腔前卵泡。该法分离水牛卵巢所得腔前卵泡的原始卵泡最多,次级卵泡最少,而分离小鼠卵巢所得腔前卵泡的次级卵泡最多,原始卵泡最少;水牛胎牛卵巢可分离得到较多的腔前卵泡;酶消化有助于提高剪碎法的腔前卵泡分离效率。     

GMP玻璃化冷冻水牛GV期和MⅡ期卵母细胞

采用玻璃微细管法(Glass micropipette vitrification,GMP)冷冻了水牛GV期和MⅡ期卵母细胞。结果显示,GV期冻后卵母细胞的形态正常率,孤雌激活后的发育潜力均明显低于未冷冻组(P<0.05)。在进一步探讨不同发育阶段的水牛卵母细胞冷冻保存效果中发现,GV期卵母细胞的形态正常率,体外成熟后的孤雌激活分裂率和8-细胞率显著低于MⅡ期(P<0.05)。结果表明,水牛GV期卵母细胞冷冻的效果比MⅡ期差。     

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

通过系统探讨不同孤雌激活方法对猪卵母细胞体外激活后发育效果的影响,比较了乙醇（Ethanol,EH）、离子霉素（Ionomycin,Ion：5μmol/L）、氯化锶（Strontium chloride hexahydrate,Sr^2＋：10 mmol/L）、6-二甲氨基嘌呤（6-dimethylaminopurine,6-DMAP：2 mmol/L）和放线菌酮（cycloheximide,CHX：10 mg/L）对猪卵母细胞激活发育的效果。结果表明：（1）9%EH激活处理10 min效果好于15 min;（2）使用9%EH激活处理10 min,再结合CHX、6-DMAP、Sr^2＋、CHX＋Sr^2＋、Sr^2＋＋6-DMAP、CHX＋6-DMAP或CHX＋6-DMAP＋Sr^2＋组处理3～4 h,以EH＋6-DMAP组效果最好,分裂率及囊胚率分别达到82.86%和22.86%;（3）在使用化学激活（Ion＋6-DMAP组和9%乙醇10 min＋6-DMAP组）和电激活（50 V/mm,50μs,2t）的方法中,Ion法激活猪卵母细胞效果较好,囊胚率达到37.50%;（4）卵母细胞包被的卵丘细胞层数不同对卵母细胞成熟激活有显著的影响,卵丘细胞层数4～6层和多于6层的卵丘-卵母细胞复合体孤雌激活的分裂率和囊胚率分别为（68.99%,32.56%）和（75.36%,37.68%）,2组之间差异不显著（P〉0.05）;但其显著高于其他组（P〈0.05）,这2组细胞在猪孤雌激活发育研究中是最佳的实验研究材料。     

鸡痘的诊断与预防

鸡痘是由鸡痘病毒(FPV)引起的一种急性接触性传染病,不同年龄和品种的鸡都易感染,但雏鸡的敏感性最高.在我国因普遍采用疫苗接种措施,鸡痘的发生率虽已明显下降,但其预防还不容忽视.     

烤烟青枯病发生与气象因子的关系及预测模式

烤烟胃枯病（Pseudomonas solanacearum smith)是江西中部烤烟栽培区的主病害之一。通常在烤烟旺长后期5月下旬始发，成熟期(6月份)形成发病高峰．若遇高温、高湿天气，尤其是洪涝年份极易造成该病大流行，重病田块损失达40％以上．高的可达80％以上。     

浅析我国高校图书档案一体化管理

随着科学技术的不断进步和网络时代的到来,人们不再满足于单一的馆藏信息服务方式,文章对图书档案一体化管理的必要性进行了论述,提出了一体化管理实施的保障措施。     

中草药作为饲料添加剂养殖罗非鱼试验

以黄芩等中草药单味药物及其复合配方药物的提取液作为饲料添加剂定量添加到饵料中,以不添加任何药物添加剂成分的普通饲料作为对照,对罗非鱼的幼苗进行分组饲养.通过测定罗非鱼不同组别之间个体的生长状况、饲料转化率、肉质差异,以及养殖水体的水质变化状况等指标,研究中草药饲料添加剂对罗非鱼养殖的影响.试验结果表明,中草药作为罗非鱼的饵料添加剂对鱼的生理生长等方面均有一定的作用,杜仲具有促进生长、改善肉质的功能,而大蒜则在改善鱼的肠胃道消化上效果较佳,复方药物组的综合作用效果要优于单味药物.     

动物克隆技术的研究进展、存在问题及应用前景

本文全面综述了动物克隆技术及其原理、研究进展以及存在的问题,并对克隆技术在相关领域蕴藏的巨大应用价值及发展前景进行了展望。