牦牛KDM2A基因克隆及其在不同组织和减数分裂进程的表达

组蛋白去甲基化酶(histone demethylase,KDM)2A是细胞周期基因表达所必需的调控分子。为了研究牦牛(Bos grunniens)KDM2A基因的结构和功能,并进一步分析该基因在不同组织及卵母细胞减数分裂进程中的表达模式,本研究首先克隆获得牦牛KDM2A基因序列全长3 546 bp,包括完整的开放阅读框3 489 bp,编码氨基酸1 162个(Gen Bank登录号:MH345760)。牦牛KDM2A基因与其他物种的相似度与构建的系统进化树结果一致。牦牛KDM2A蛋白分析显示,其理论分子质量为132.7 k D,理论等电点为7.59,不稳定指数52.73,总平均亲水指数-0.587。KDM2A蛋白氨基酸序列中存在117个磷酸化位点,6个N-糖基化和2个O-糖基化位点;二级结构包括无规则卷曲、α螺旋和β折叠。KDM2A蛋白含有cupin超家族jumonji-C(Jmj C)结构域、锌指(CXXC zinc finger,ZF-CXXC)结构域、植物同源域(plant homeodomain,PHD)、F-盒蛋白(F-box,FBOX)结构域和有丝分裂相关蛋白(antagonist of mitotic exit network protein 1,AMN1)结构域,不含跨膜结构域和信号肽,主要在细胞核发挥生物学功能。KDM2A mRNA在子宫、脾脏和卵巢的表达量较高,极显著高于其他组织(P0.01);KDM2A mRNA在卵母细胞减数分裂过程中均表达,其中MⅡ期的表达量极显著高于GⅤ期和MⅠ期(P0.01),GⅤ期KDM2A的表达水平高于MⅠ期,但差异不显著(P0.05)。本研究成功克隆了牦牛KDM2A基因序列,并明确其在组织和卵母细胞减数分裂进程中的表达模式,为深入探讨KDM2A基因在牦牛卵母细胞减数分裂进程中的作用机制提供了基础资料。     

人工栽培雷公藤醇提取物对杉木种子发芽的化感效应

利用醇浸提的方式对人工栽培雷公藤的生化物质进行提取,通过杉木种子发芽试验进行生物检测,结果表明：浓度为50mg／kg的雷公藤各器官醇浸提液对杉木种子的发芽和生长有促进作用．     

IMPDH基因克隆、生物信息学分析及在牦牛卵巢不同时期中的差异表达

旨在获得牦牛IMPDH基因序列并进行生物信息学分析,同时分析其在卵巢组织中的时序表达谱,为进一步研究卵巢生长发育及排卵机制奠定基础。通过RT-PCR技术克隆牦牛的IMPDH基因,并运用生物信息学方法分析不同物种序列进化关系,利用荧光定量qRT-PCR技术检测IMPDH基因在不同发育时期牦牛卵巢组织中的表达情况。结果显示,克隆得到牦牛1 623bp的IMPDH基因cDNA序列,内含1 545bp开放阅读框序列,编码514个氨基酸残基。与野牦牛的相应序列具有很高的同源性(99.4%),表明IMPDH基因在进化过程中相对保守。实时定量RT-PCR检测结果显示IMPDH基因的表达随年龄的增加而呈现上升趋势。荧光定量qRT-PCR检测结果显示IMPDH基因在卵巢卵泡期表达最强,显著高于红体形成期。结果表明IMPDH参与牦牛卵巢组织的生长发育,并在卵巢活动中有明显的表达规律,表明IMPDH基因在牦牛繁殖周期具有重要作用,为进一步研究牦牛IMPDH基因功能奠定基础。     

桉树内生菌对尾巨桉幼苗抗寒性的影响

采用菌液浇施方法对尾巨桉幼苗接种10株桉树内生菌,接种30d后进行低温胁迫.结果表明,处理1、7、5、6、9、3、2、8的半致死温度分别比对照下降了2.71、2.28、1.98、0.77、0.61、0.61、0.26、0.08℃.植株在低温条件下,处理1、7、10、5、8、2、6、4的POD活性分别比对照提高了35.4...     

不同磷酸盐条件和PEG模拟干旱胁迫下桉树根际解无机磷细菌的溶磷能力

利用液体培养法研究模拟干旱胁迫环境(轻度胁迫、中度胁迫、重度胁迫)及不同难溶性磷酸盐对5株解无机磷细菌(P6、P7、P8、P19、P25)溶磷能力的影响。结果表明:菌株P6和P7对4种磷酸盐的溶解能力较佳,P6对磷酸铝、磷酸铁、磷酸氢钙及磷酸钙的溶磷量分别较CK(对照)显著提高143.7%、134.5%、1 318.3%、1 396.6%;P7对磷酸铁、磷酸氢钙及磷酸钙的溶磷量分别较CK显著提高348.0%、996.5%、1 810.4%。解无机磷细菌对磷酸钙的溶磷量与培养液p H值呈显著负相关(r=-0.920),与培养液有机酸质量浓度呈显著正相关(r=0.947);在3个梯度干旱胁迫下,P6、P7、P25解磷能力均显著低于CK,且随着胁迫程度的加深解磷能力呈现明显下降趋势;P8在轻度胁迫和中度胁迫下解磷能力均高于CK;P19在3个梯度干旱胁迫下解磷能力均高于CK。研究表明,5株解无机磷细菌对磷酸钙和磷酸氢钙的溶解效果较佳,对磷酸铁和磷酸铝的溶解效果较差;菌株P8、P19耐干旱能力较强,具有应用于干旱地区解磷的潜力。     

山羊成纤维细胞体外培养研究

分别采用组织块法与消化法对山羊耳成纤维细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果.结果表明,组织块法培养的细胞生长稳定,5～7d有细胞生长,15～18d长满单层;消化法培养的细胞,通过简化酶作用时间及用量的调控,可得到较为单一的成纤维细胞,且经过4～7d生长后能形成单层.同时对细胞培养过程中常遇到的污染问题及解决方法进行了探讨,为动物组织培养研究提供了实验依据.     

内生真菌对低磷胁迫下杉木幼苗生长及光合作用的影响

通过浇施菌液,接种5株内生真菌NG1、CG5、AJ6、AJ14、AJ13于低磷胁迫下的杉木幼苗(Cunninghamia lanceolata)。接种15 d后进行低磷胁迫试验,测定苗高地径、根冠比、叶绿素含量以及叶绿素荧光等数据,分析内生真菌对杉木生长和光合作用的影响。结果显示:5株内生真菌中,AJ14菌株对苗高地径和根冠比的综合影响最大,促生效果最明显;NG1菌株对根冠比的影响最大。AJ14菌株在低磷胁迫各个时期提高了杉木幼苗体内的叶绿素含量,且实际光合效率较高。5株内生真菌接种的杉木在胁迫后期,Fo值小于CK,总体减小趋势明显;F_v/F_o和F_v/F_m值高于对照组,总体升高的趋势明显,说明内生真菌在促进了植物的光合作用方面有明显优势。结果表明:5株内生真菌对杉木的生长和光合作用有较大影响,AJ14、NG1菌株对杉木的生长和光合作用有明显的促进作用。     

17β-雌二醇-黄素腺嘌呤二核苷酸结合物的合成

根据ＡＲＩＳ的需要,设计出标题物的分子结构模型。以黄素－５′－单磷酸、６－酮－１７β－雌二醇羧甲基肟和Ｎ６－（６－氨基己基）腺苷－５′－单磷酸为原料,经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验确证了标题物的结构。     

灵石山常绿次生林不同海拔CWD贮量特征

通过对灵石山常绿次生林中粗木质物残体(CWD)的组成种类(枯立木、倒木、根桩和大枝)及其贮量对海拔的响应进行研究。结果表明,灵石山常绿次生林CWD贮量最高为104.10 t.hm-2,在海拔187 m的次生林中,由于人为干扰严重,无倒木类型。倒木和枯立木对次生林CWD贮量影响较大,在非CWD中小枝所占比例较大。     

麦洼牦牛NOBOX基因克隆与序列分析

为了解牦牛NOBOX基因的特点,根据GenBank中公布的牛NOBOX基因序列设计2对引物,分两段扩增麦洼牦牛的NOBOX基因,然后测序并拼接。序列分析表明,扩增的牦牛NOBOX基因大小为1 975bp,其中开放阅读框全长1 500bp,编码499个氨基酸,分子质量为53.12ku。核苷酸序列同源性分析表明,NOBOX基因具有相对较高的保守性,牦牛与牛的NOBOX基因核苷酸序列同源性很高,为97%。在此基础上,借助Mega 5.0软件,采用N-J算法构建了NOBOX氨基酸的系统进化树,分析了不同物种间的进化关系。牦牛NOBOX基因序列的成功克隆,为麦洼牦牛卵母细胞成熟及早期胚胎发育分子机制的研究及麦洼牦牛的遗传资源保护和育种提供了理论基础。