坦布苏病毒感染DF-1细胞入侵途径的初步研究

坦布苏病毒是我国新发易引起家禽出现严重产蛋下降和中枢神经系统异常的重要传染病病原.通过特异性的化学阻断剂预处理DF-1细胞,噬斑计数法检测其对病毒滴度的影响,相对荧光定量RT-PCR检测其对病毒核酸表达的影响,并对影响显著的结果进行吸附和内吞试验.结果显示,网格蛋白抑制剂氯丙嗪和动力蛋白抑制剂dynasore可显著降低病毒滴度和病毒核酸表达,且主要作用于内吞过程,对病毒吸附无影响.胆固醇抽提剂甲基-β-环糊精、小窝蛋白抑制剂genistein及胞吞抑制剂EIPA对病毒滴度无明显影响.结果表明,坦布苏病毒入侵DF-1细胞依赖于网格蛋白和动力蛋白,而不依赖于胆固醇、小窝蛋白和胞吞作用.     

血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。     

秦岭山地松栎混交林优势草本N,P化学计量特征

氮(N)和磷(P)是影响陆地生态系统生产力的重要元素,而植物氮磷(N-P)生态化学计量特征为研究植物的养分利用状况提供了有效途径.研究林下草本优势种叶片N,P元素含量,可为判断其生长限制性元素及探索提高其生产力的途径提供参考依据.以秦岭松栎混交林内优势草本为研究对象,在群落调查的基础上,确定秦岭山地松栎混交林内草本优势种,分析优势草本叶片N,P化学计量特征.结果表明:林内草本偶见种较多;优势草本叶中N,P含量和N∶P比的均值分别为(17.51±3.01) mg·g-1,(1.74士0.79)mg·g-1和(11.67士4.01);优势草本叶片中N与P的含量间存在线性关系;随着草本叶片中P含量增加,N∶P比总体呈下降趋势;研究区松栎混交林内草本优势种披针叶苔草(Carex lanceolata)和野青茅(Deyeuxia sylvatica)生长受土壤中可利用的N限制,升麻(Astilbe chinensis)不受土壤中可利用的N,P含量限制;开展森林抚育,促进凋落物分解有利于提高松栎混交林内草本生产力.     

6日龄雏鸡混合感染坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌的病原学研究

对一例疑似坦布苏病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的6日龄鸡进行病原的分离鉴定。用套氏RT-PCR方法和常规细菌分离鉴定方法进行病毒、细菌的分离、鉴定,并对其病原的主要生物学特性进行了研究。结果表明:病毒经鉴定为坦布苏病毒,与鹅源坦布苏病毒JS804株核苷酸同源性达99%;分离到的细菌为多杀性巴氏杆菌。细菌对鸡的回归试验显示,0.1mL的菌液可致20周龄SPF鸡死亡;对6周龄Balb/c小鼠的致病性试验结果表明,含约10 CFU的毒液即可在24h内致其4/4死亡。     

H9N2亚型禽流感病毒的纯化及间接ELISA方法的建立

将H9N2亚型禽流感病毒FT株病毒液经过红细胞吸附释放法纯化后作为ELISA包被抗原,建立H9N2亚型禽流感抗体间接ELISA方法.试验结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速检测禽流感抗体提供了便利途径.     

间接ELISA检测小鹅瘟抗体反应条件的选择

通过方阵法对间接ELISA抗原、抗体反应浓度进行筛选,再运用正交试验对不同的包被液、封闭液、底物进行比较和选择,最后对酶进行选择,最终确定运用ELISA法测定小鹅瘟抗体的最佳反应条件。即抗原最佳浓度为37.00μg/ml,血清最佳稀释倍数为1∶200,包被液为0.1 mol/L碳酸盐缓冲液,4℃包被12 h,封闭液为10%犊牛血清的PBS溶液,使用羊抗兔IgG酶标二抗,底物为联苯二胺(OPD)。     

H9亚型禽流感、传染性喉气管炎及水禽黄病毒病流行动态与防控

1 H9亚型禽流感 1.1疫病概况 从2008年11月份开始,该病几乎每年冬天均会发生,但2010～2011年度最为严重,表现为反复发生.主要表现为支气管有黄色于酪样栓子堵塞,发病鸡呼吸困难,窒息死亡.该病主要发生在日龄较小的鸡,一般在12～29日龄,平均25日龄,发病率100％,死亡高峰为发病后的3～10 d,死亡率一般在15％～40％之间,最高为80.59％,平均21.73％.     

防风阻沙水源保护建设的成功实践

本文围绕天津北部防风阻沙水源保护及国家京津风沙源治理重点工程的技术支撑,坚持高起点、采用高科技、追求高质量,打造高生态经济效益的示范工程的技术路线,创造性运用了采矿(石)区植被恢复、石质低山阳坡造林、退耕还林优化配置三种防风阻沙水源保护建设新模式,取得了经济林产业开发、果品加工储藏保鲜及森林生态旅游业产业开发的显著效益,与农民实现互动双赢。     

中药粗提物对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染细胞能力的影响

将黄芪、连翘等八味中药的粗提物与鸡传染性法氏囊病病毒以三种顺序 (先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入 )加入至培养 2 4 h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)上 ,观察其对病毒感染细胞能力的影响。结果表明 ,在细胞安全浓度范围内 ,仅黄芪粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时抑制 IB-DV病毒感染 ,且抑制作用与浓度和加药方式有关     

几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。