电子商务客服沟通技巧分析

优秀的客服人员是电子商务企业良好销售的重要保证,客服人员必须掌握一定的计算机知识、熟练的沟通技巧、产品的专业知识、诚信认真的服务态度。文中介绍了电子商务客服的概念和电子商务客服分类,重点介绍了电子商务客服沟通技巧分析,通过理论分析,增强客服人员的沟通能力,促进销售量的提高。     

人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞

为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。     

河南西峡山茱萸大小年形成的原因与克服措施

介绍了河南西峡山茱萸大小年形成的主要原因,并提出了增施肥、合理修剪、加强树下管理以及病虫害防治等方面的措施。     

促生长抗生素与猪肠道微生物

40年前 ,Lederle实验室的研究人员发现饲喂金霉素提高了家禽生长速度 ( Jukes,1 977;Stokstad等 ,1 949)。最初将之归咎于生产金霉素发酵培养物中的 VB12 (鸡给饲 VB12 缺乏饲粮 ) ,后来发现金霉素促生长效果独立于 VB12 营养作用( Stokstad等 ,1 949)。不同类型的抗生素具有不同的结构 ,并通过不同的机制产生抗菌效果 ,这些机制包括裂解细菌细胞膜 ,改变代谢 ,抑制细菌细胞壁、蛋白质和 DNA的合成 (表 1 )。所有种类饲用抗生素对猪的生长和饲料效率有相似的改善效果 ,因此 ,促生长机制显然独立于抗菌方式( L awrence,1 998)。饲用抗…     

基于M1卡的预付费用水管理系统的设计与实现

针对目前农户温室用水管理中收费难的问题,设计了一种基于M1卡的预付费用水管理系统,该系统主要用于水务部门对农户温室用水进行信息化管理.介绍了该管理系统的总体结构,并对各个组成部分的功能、原理以及实现方法进行了详细论述.系统采用一张卡来管理多个温室水表,不仅节约资源,而且使用方便.     

水稻T-DNA插入启动子捕获系的初步筛选

利用农杆菌介导法将含报道基因β-glucuronidase(GUS)无启动子的转化载体pCAMBIA1300GUSAHyg导入籼稻明恢86获得水稻启动子捕获系.水稻启动子捕获系潮酶素抗感分离比χ2分析表明:39个水稻启动子捕获系中有28个为单T-DNA位点插入.2 653个水稻启动子捕获系报告基因GUS表达检测结果表明...     

草莓6种病毒多重PCR快速检测方法的建立

为快速鉴定草莓病毒病种类以预防病毒病扩散,根据草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)、草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)、草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)、草莓白化病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)、草莓病毒1(strawberry virus 1,StrV-1)和芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)的基因保守区域设计特异性引物,建立了能够同时检测这6种病毒的多重PCR方法。该多重PCR反应体系中,2×SanTaq PCR Master Mix用量为10 μL,上下游引物(10 μmol/L)用量为4 μL,其中SVBV为0.25 μL、SMoV为0.50 μL、SMYEV为0.10 μL、SPaV为0.15 μL、StrV-1为0.50 μL和BrYV为0.50 μL,模板1 μL,ddH₂O为5 μL,总体积20 μL。多重PCR反应程序设定为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,53 ℃退火30 s,72 ℃延伸120 s,最后72 ℃延伸10 min,循环数为35。该检测体系的灵敏度可以达到10⁷ copies/μL。该多重PCR方法可以同时实现6种草莓病毒的高效快速检测,为草莓病毒病的早期发现和针对性防治提供了技术支持。     

佛山市五种林分改造树种凋落物的持水特性

文章对樟树、黧蒴、假苹婆、米老排和高山榕等5种林分改造树种凋落物储量及持水特性进行了研究。结果表明,樟树、黧蒴、假苹婆、米老排和高山榕凋落物鲜重分别为7.63,6.90,6.38,13.95和7.55 t/hm^2。各树种凋落物干重为米老排〉樟树〉高山榕〉黧蒴〉假苹婆。5种树种中米老排凋落物的最大持水量和最大持水率最大,分别达23.81 t/hm^2和338.89%;高山榕最小,分别仅为11.35 t/hm^2和167.11%。各树种凋落物的最大拦蓄量与有效拦蓄量变化规律基本一致,顺序都是米老排〉黧蒴〉假苹婆〉樟树〉高山榕。在不同浸泡时间段,各树种凋落物持水量均呈现米老排〉黧蒴〉假苹婆〉樟树〉高山榕。0.5 h内,凋落物吸水速率为米老排〉假苹婆〉黧蒴〉樟树〉高山榕。     

E2蛋白介导猪瘟病毒的细胞吸附与内化

【目的】已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明。研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用。【方法】通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮293细胞构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮293细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组E2蛋白,同时优化表达时间以增加蛋白产量。利用SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性。通过感染试验、吸附试验以及内化试验分别探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响。将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过阻断ELISA检测血清中多克隆抗体的阻断率。利用制备的多克隆抗体与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用。【结果】通过倒置荧光显微镜观察转导慢病毒后的细胞系,与对照细胞相比可见明显的绿色荧光,表明慢病毒成功转导悬浮293细胞。SDS-PAGE结果显示,在还原和非还原条件下均出现与预期大小相符的蛋白条带,经Western blotting验证,上清中表达的重组E2蛋白能够被抗E2蛋白单克隆抗体WH303所识别,表明构建的悬浮293细胞系能够表达重组E2蛋白。通过优化表达条件,悬浮293细胞培养第8天时上清中重组E2蛋白浓度最高可达5.84μg·m L-1。可溶性蛋白阻断试验结果显示,重组E2蛋白具有阻断CSFV感染的活性。利用重组E2蛋白在病毒入侵过程中处理细胞对CSFV的感染同样具有显著抑制作用;阻断ELISA和中和试验结果显示,针对E2蛋白的多克隆抗体能够阻断CSFV感染,且具有良好的中和活性;吸附试验和内化试验证明,重组E2蛋白处理细胞能够显著抑制CSFV的内化,而利用多克隆抗体与CSFV感作后能够显著抑制其吸附。【结论】E2蛋白参与CSFV吸附和内化。     

创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达

创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋白rompU以可溶形式表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的rompU为与预期大小一致的单一条带。将纯化的rompU免疫SD级大鼠,ELISA检测收获的多克隆抗体血清效价,并通过Western-blot证实该OmpU多克隆抗体可以识别创伤弧菌FJ03-X2株中的天然外膜蛋白OmpU。