奶牛子宫组织肉肥大细胞分布规律的研究

肥大细胞(MC)是一种包含嗜碱性颗粒的多功能细胞,广泛存在于人和动物体内.MC能分泌多种介质,参与多种生理反应,与动物某些变态反应性疾病、寄生虫感染、某些非特异性炎症和肿瘤性疾病有密切关系.要揭示MC在奶牛生殖中的各种作用,就必须首先揭示其在子宫内不同部位的分布规律,这是研究子宫内MC的基础性工作.为此,特设计并实施了本试验.     

犬死胎停滞的B-超诊断及手术治疗

死胎停滞属于流产的症状之一,又名延期流产.它是胎儿死亡后由于阵缩微弱,子宫颈不开或开放不大,胎儿死后长期停留于子宫内造成的,根据子宫颈开放程度、细菌是否侵入等又分为胎儿干尸化和胎儿浸溶.     

小鼠胚胎诱导型Hsp70基因的RNA干扰有效序列筛选

 【目的】应用RNA干扰技术沉默小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblast,MEF）中诱导型热休克蛋白70（Hsp72）基因的表达,从而筛选出对Hsp72基因具有确实干扰作用的siRNA。【方法】设计并合成4对特异性针对Hsp72基因的siRNA,借助LipofectamineTM 2000瞬时转染MEF,41℃热应激处理后,采用RT-PCR和Western blot检测Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量。【结果】在热应激组中,siRNA1、siRNA2两组及阳性、阴性和空白3个对照组的Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表达量均极显著高于常温对照组（P＜0.01）,siRNA3和siRNA4两组的Hsp70 mRNA的表达量极显著低于常温对照组（P＜0.01）;siRNA3组Hsp70蛋白表达量极显著低于常温对照组（P＜0.01）,而siRNA 4组与常温对照组差异不显著（P＞0.05）。与空白对照相比,4对siRNA中siRNA3和siRNA4对MEF中Hsp72 mRNA有极显著（P＜0.01）的抑制作用,其对Hsp72 mRNA的抑制率分别为86.2%和75.4%（P＜0.01）,对Hsp72蛋白表达的抑制率分别为77.3%和57.0%（P＜0.01）。【结论】体外合成的四对特异性针对Hsp72基因的siRNA中,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构表面位置的siRNA3和siRNA4对Hsp72基因具有显著的抑制作用,靶位点在Hsp72 mRNA二级结构复杂处的siRNA1和siRNA2对Hsp72基因的抑制作用不明显。     

血清钙不同测定方法的比较

[目的]建立一种成本低、准确性高、操作简便、适合临床兽医的疾病诊断和实验室检测的血清钙测定方法。[方法]根据精密度分析、回收试验、稳定性分析、线性范围确定、干扰试验等，比较了乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）滴定法、偶氮氯膦I法、偶氮胂Ⅲ法和偶氮氯膦-mA法检测血清钙离子浓度的准确性和可操作性。[结果]偶氮氯膦I测定法空白值低，随机误差小，精密度最高。偶氮氯膦-mA法的相关系数最大，但4种方法在浓度0．1～6．0mmol／L都具有良好的线性关系，无明显差异。回收试验中EDTA-2Na滴定法回收率为97．1％；偶氮氯膦I法回收率为98．5％；偶氮氯膦-mA法回收率97．6％；偶氮肿Ⅲ法回收率为100．7％。[结论]偶氮氯膦I法具有精密度高、回收率高、稳定性高、空白值低和变异系数低等特点。是一种值得推广的血清钙测定方法。     

一例犬肝脏巨大海绵状血管瘤的B超诊断

近年来，我们兽医院在小动物临床上广泛开展了B超诊断业务，发现B超诊断在临床上应用最多、准确率最高的是兽医产科方面，包括早孕检查、胎儿活力及数量检查、子宫卵巢疾病检查等；其次是结石病的诊断，包括胆结石、肾结石、膀胱结石的诊断。而去年10月份，我院接诊一例罕见的肝脏肿瘤患犬，经B超诊断与手术所见结果一致。现将该病犬的诊治情况报告如下。     

黄芩苷对热应激犊牛睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)表达的影响

黄芩苷(baicalin)具有清热镇静、抑菌抗炎等作用,通过不同浓度黄芩苷对热应激下睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)表达胶质细胞源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和干细胞因子(stem cell factor,SCF)的影响,探讨黄芩苷是否可以通过提高SCs的耐热性保护细胞,提高SCF与GDNF的表达。采用二步酶消化法分离犊牛(Bos taurus)睾丸组织获得SCs,4 h差速贴壁纯化,分别采用RT-PCR鉴定标志性基因GDNF和SCF的表达,福尔根染色鉴定细胞形态。选用第3代对数生长期的SCs,通过噻唑蓝(methyl thiazoletetrazolium,MTT)筛选黄芩苷安全使用浓度;设对照组(37℃)、42℃单纯热应激组和42℃热应激加黄芩苷(0.1,1,10和20μg/m L)组;用MTT检测细胞存活率,提取各组细胞总RNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测GDNF和SCF m RNA及其蛋白的表达。结果显示,第3代原代细胞生长良好,RT-PCR检测可见GDNF和SCF m RNA表达,福尔根染色显示有卫星核小体存在,表明分离培养的细胞为SCs。对第3代SCs进行热应激处理,与对照组(37℃)比较,42℃单纯热应激组细胞存活率极显著(P<0.01)下降,GDNF和SCF m RNA(P<0.01)与蛋白(P<0.05)的表达也降低。与42℃单纯热应激组比较,用浓度为1μg/m L(P<0.05)和10μg/m L(P<0.01)黄芩苷作用细胞的存活率升高;浓度在0.1~20μg/m L黄芩苷作用的细胞,其GDNF和SCF m RNA的表达量均极显著(P<0.01)高于42℃单纯热应激组,而在黄芩苷浓度为1μg/m L时,SCF(P<0.01)和GDNF(P<0.05)蛋白表达量高于42℃单纯热应激组,并且基因和蛋白的表达量随着黄芩苷浓度的增加呈现先上升后下降的趋势。结果表明,黄芩苷能提高热应激下SCs的存活率以及GDNF和SCF的表达量。本实验从分子水平研究黄芩苷对SCs的抗热作用,为在实践中增强机体抗热休克能力提供了理论依据。     

健康中国荷斯坦奶牛不同发育阶段瘤胃的菌群多样性研究

为了分析不同发育阶段健康中国荷斯坦奶牛瘤胃菌群结构多样性,试验采用16S r DNA高通量测序技术对抽提的4个阶段健康奶牛瘤胃内容物的细菌基因组总DNA进行OTUs聚类、超1(Chao1)指数、香浓(Shannon)指数及OTUs交叠分析。结果表明:哺乳犊牛瘤胃中主要以普氏菌属-7(46.0%)、毛罗菌科NK3A20(8.9%)、罗氏菌属(4.9%)为主;断奶犊牛瘤胃中主要以普氏菌属-7(31.0%)、毛罗菌科NK3A20(16.0%)、理研菌科RC9-gut-group(2.3%)为主;青成牛瘤胃内的普氏菌属-1(8.5%)、丹毒丝菌科UCG-004(7.5%)、反刍杆菌属(6.4%)、琥珀酸弧菌科UCG-002(5.4%)、普氏菌科UCG-003(4.9%)、理研菌科RC9-gut-group(4.6%)的相对丰度较高;成年牛瘤胃内的普氏菌属-1(38.0%)、琥珀酸弧菌科UCG-0019(4.5%)、理研菌科RC9-gut-group(2.3%)、普氏菌科UCG-003(2.2%)、琥珀酸弧菌科UCG-002(2.1%)、普氏菌属-7(1.5%)相对丰度较高。说明4个阶段中国荷斯坦奶牛瘤胃菌群结构存在明显差异,其中哺乳犊牛与断奶犊牛瘤胃菌群属丰度低、结构简单,青成牛与成年牛瘤胃菌群丰度高、结构复杂。     

甲醛对小鼠肝和肾脏氧化指标的影响

将24只雄性小鼠随机分成4组,连续5天分别腹腔注射0.2 mL浓度为1、10和100 mg/kg甲醛,及生理盐水,检测小鼠的肝脏和肾脏系数、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果发现,甲醛对小鼠肝脏系数和肾脏系数变化均不显著 (p＞0.05),10、100 mg/kg甲醛组小鼠肝脏MDA含量显著升高(p＜0.05),GSH略有下降(p＞0.05);各组小鼠肾脏MDA的含量升高,GSH的含量降低,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,连续5d腹腔注射1~100mg/kg的甲醛可以使小鼠肝脏发生明显氧化损伤,且与甲醛的剂量正相关;而小鼠肾脏的氧化损伤不明显。     

Gln减轻LPS诱导奶牛睾丸支持细胞炎症损伤的作用

谷氨酰胺(glutamine,Gln)可以调节多种抗炎因子的表达,但是其能否减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症损伤不得而知.本研究将传至第3代的奶牛(Bos taurus)睾丸支持细胞(sustentacular cell,SCs)分别与Gln (0.5,1,2,4和8mmol/L)共培养12h,更换培养液培养4h后用试剂盒检测各组细胞存活率,当Gln浓度为2 mmol/L时细胞存活率为90.81％.将培养的睾丸支持细胞随机分为4个组:对照(空白)组、LPS (0.1 μg/mL LPS共培养12 h)组、Gln(2 mmol/L的Gln共培养12 h)组和LPS+Gln(2 mmol/L的Gln共培养12h后用0.1 μg/mL LPS处理4 h)组,用qRT-PCR和Western blot分别检测热体克蛋白72 (heat shock protein 72,HSP72),白介素-1受体相关激酶-M (interkeukin receptor-associatedkinase-M,IRAK-M),Toll作用蛋白(toll-interacting protein,Tollip)和锌指蛋白(zinc finger protein,A20)的表达,用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白介素-6(IL-6),白介素-8(IL-8),白介素-10(IL-10),白介素-13(IL-13)和白介素-17(IL-17)的表达.结果显示,Gln能诱导SCs HSP72、IRAK-M、Tollip和A20的表达,且HSP72mRNA和其蛋白的时效表达量分别在2和4h最高.与空白对照组相比,LPS组细胞的HSP72、IRAK-M、Tollip和A20均显著升高(P＜0.05),与LPS组相比,LPS+Gln组细胞的上述指标均显著降低(P＜0.05).同样,与空白组相比,LPS组细胞IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13和IL-17的表达量均显著升高(P＜0.05),与LPS组相比LPS+Gln组细胞的上述相应指标的表达量均显著降低(P＜0.05);上述结果说明,LPS能够诱导炎性因子、HSP72、IRAK-M、Tollip和A20炎症负反馈调节因子的表达.而Gln能够抑制LPS诱导的炎性因子、促进抑炎因子的表达,从而减少炎性损伤.研究结果为进一步筛选抗睾丸炎症的分子药物提供新的理论依据.     

猪、犬旋毛虫交叉免疫原性的研究

通过在小鼠体内感染猪、犬旋毛虫肌幼虫50条，再用同源免疫和交叉免疫方法攻击感染旋毛虫肌幼虫200条，来检测其肌幼虫的减虫率。试验得到猪旋毛同源免疫的减虫率为87.47%，对犬旋毛虫的交叉免疫减虫率是86.47%，犬旋毛虫同源免疫的减虫率为83.70%，其对猪旋毛虫的交叉免疫是83.46%。试验表明：旋毛虫肌幼虫自然免疫具有较好的免疫保护作用，交叉免疫的保护率低于同源免疫。