H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的H5亚型禽流感病毒(AIV)抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选,获得9株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中4株能高效分泌血凝素(HA)蛋白特异性的单克隆抗体.特异性试验表明,IE6单克隆抗体仅与试验的H5病毒株反应,而不与新城疫病毒(NDV)、H9亚型AIV和产蛋下降综合症病毒(EDSV)反应.这9株单克隆抗体分别为IgG1、IgG2a、IgG2b、IgM亚类,κ轻链.     

赭曲毒素A对黄羽肉鸡生产性能的影响

7日龄健康无病、体重均匀的3607,黄羽公雏鸡,随机分为3组,每组4个重复,每个重复30R.第Ⅰ组(对照组)饲喂基础日粮(<2μg/kg赭曲霉素(OTA));第Ⅱ组(OTA组)在对照组日粮的基础上添加OTA使总浓度达2 mg/kg,不合任何霉菌毒素处理剂;第Ⅲ组(OTA MPL组)在第Ⅱ组日粮的基础上每吨饲料添加2 kg MPL(即2 000 mg/kg MPL).试验期分3个阶段(7～21日龄;22～42日龄;43～56日龄),共计49d.对黄羽肉鸡的生长性能进行了测定,结果表明:2mg/kg OTA对黄羽肉鸡的平均日增重及平均日采食量有显著的抑制作用;各组间饲料转化率差异不显著.2 000mg/kg的MPL可以明显缓解OTA对黄羽肉鸡生产性能的抑制作用.     

霉菌毒素对畜禽免疫机能的影响

据统计，世界上每年大约有25％的谷物被霉菌毒素所污染，因而造成人和动物健康的隐形损害以及很大的经济损失；我国一些地区的饲料霉变问题相当严重，对畜牧业生产造成了巨大的损失。近年来，由于全球气候温室效应日趋明显，饲料和饲料原料贸易的日益全球化增加了储存和运输的时间，霉菌及霉菌毒素的污染比以前更加严重。Wang等（2003）分析中国配合饲料样品，结果显示，超过90％的样品中含有黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）、（Oehratoxin，OT）、T-2毒素（T-2 Toxin）、烟曲霉毒素（Fumonisins）、呕吐毒素（Deoxyniralenol，DON）和玉米赤霉烯酮（Zeaya lenone，ZON）6种霉菌毒素。     

囊素三肽的基因克隆和表达

以合成的BS1、BS2为引物扩增囊素三肽（BS）8串联片段（BS8）,克隆至pBAD/Thio-TOPO载体,用pBAD/TOPO（R）Thio大肠杆菌表达系统进行表达,含BS8融合蛋白的分子量大小约为19 kD,BS8融合蛋白主要以可溶形式存在.用蛋白质纯化树脂50%Ni-NTA纯化融合蛋白,高纯度的融合蛋白经透析除咪唑、浓缩后,再经胰蛋白酶水解获得大量BS单体.高压液相色谱分析表明,经过DEAE阴离子交换层析,获得纯化的BS单体.     

鱼类低温适应机制的研究——Ⅱ.驯化温度对草鱼和鲮鱼肌肉线粒体膜脂肪酸组成和胆固醇含量的影响

采用气相色谱法和气相色谱/质谱联用法对不同温度驯养的草鱼和鲮鱼肌肉线粒体膜脂肪酸组成进行了分析。10℃适应的草鱼和25℃适应的草鱼相比,肌肉线粒体膜脂肪酸中不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸(U/S)值明显升高,脂酰链平均长度也从25℃时的19.08个碳原子增加到10℃时的20.46个碳原子。而鲮鱼的脂肪酸组成在不同适应温度下的变化不明显。此外,还测出了不同驯养温度下草鱼和鲮鱼肌肉线粒体中胆固醇含量的变化,发现两种鱼的胆固醇含量在低温下都显著下降。作者认为,低温适应下的草鱼由于肌肉线粒体的脂肪酸组成和胆固醇含量都发生变化,因而其肌肉线粒体膜的流动性明显增加;而鲮鱼肌肉组织线粒体中胆固醇含量虽也减少,但脂肪酸组成变化甚微,因此,鲮鱼肌肉组织线粒体膜流动性增加很有限。这可能就是鲮鱼耐寒能力差的重要原因之一。     

5株猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆与序列分析

提取5株猪O型口蹄疫病菌（FMDV）（L1-L5）的RNA，用1对通用引物经RT-PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段，克隆后通过测序获得其核苷酸序列，分析表明，除L2株外，其余4株（L1，L3，L4和L5）VP1基因的核苷酸序列同源性在96.7%-99.8%。氨基酸序列同源性在99.5%-100%；而L2株与L1，L3，L4和L5株VP1基因的核苷酸序列同源性在82.0%-83.4%，氨基酸序列同源性在89.7%-90.1%,L1,L3,L4和L5株病毒VP1基因的核苷酸序列与已经发表的GD/CHA/86，HKN/1/99，HKN/16/96的同源性较高，核苷酸序列同源性在85.0%-99.8%，属于同一基因型；而与L2，F29/CHINA及国外大多数毒株相比，属于不同的基因型，其核苷酸序列同源性仅为41.0%-82.6%，5株毒株中的L1，L3，L4和L5的主要中和抗原位点140-160，200-213位氨基酸序列完全相同，推测其有相近的中和单抗表位和相同的抗原性。     

类固醇激素免疫在调控畜禽繁殖和生长中的应用

激素免疫技术又称激素免疫中和技术(Hormone immunoneutralization,HIN)是以激素作为抗原,通过主动免疫诱导产生抗激素抗体或被动注射抗激素抗体,全部或部分中和体内激素的生物活性,对内分泌系统进行积极的调控以提高动物生产性能的免疫学技术。随着生物技术的飞速发展,特别是基因重组技术、蛋白质工程技术、免疫学技术的发展和细胞生物学、分子生物学、生物化学和内分泌学等学科的渗透,动物生长调控中的免疫技术在此基础上逐渐发展起来并越来越受到广大畜牧研究者的关注。这种新型的免疫技术具有灵敏性强、特异性高的特点,给动物注射微量的激素抗原就可以达到提高动物生产性能的目的。     

口蹄疫病毒泛亚株全衣壳基因克隆和序列结构分析

应用RT PCR和nPCR实现了口蹄疫病毒O/PanAsia/10株的全衣壳基因的克隆和序列测定.对核苷酸和氨基酸的序列分析表明,与经典O型毒株比较存在较大变异.其中4种结构蛋白的变异顺序是VP1>VP3>VP2>VP4.P1基因G+C值约55%.全衣壳蛋白相对分子质量约8 0×104.主要结构蛋白VP1呈碱性,等电点约9 5.     

新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

用RT—PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列。尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3端EcoR Ⅰ位点,重组质粒pSOC—HN转化E．coli BL-21(DE3)感受态细胞。以终浓度1mmol／L的IPTG诱导表达,在SDS—PAGE凝胶上可检测到分子量约67KD的融合蛋白特异条带,west—blot证实表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。     

鸡β-防御素基因的克隆与结构分析

通过RT-PCR扩增出鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的部分cDNA序列，大小分别为198、195和297bp。利用PCR技术扩增出鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因组DNA部分序列，大小分别为1176、1053和2454bp。经分析发现，2个内含子将鸡-β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的编码区分成3个外显子部分。第1个外显子编码绝大部分信号肽序列；第2个外显子编码信号肽羧基端极小部分序列、原片段序列与大部分成熟肽序列；第3个外显子编码小部分成熟肽序列。扩增到的鸡β-防御素Ga1-1、Ga1-2和Ga1-3基因的两个内含子长度，分别为482和496bp，183和675bp，980和1280bp。鸡β-防御素基因编码区结构的这种组成与哺乳动物的β-防御素基因的不同，在哺乳动物中为1个内含子将β-防御素基因编码区分成2个外显子部分。Blast比较发现，鸡β-防御素Ga1-1和Ga1-2基因位于鸡的3号染色体连续克隆群Contig42．182上，并且这2个基因转录方向相反。Ga1-3基因位于鸡的3号染色体连续克隆群Contig42．181和Contig42．182上，转录方向与Ga1-1基因相同。