酯酶同工酶的醋酸萘酯 -铁氰化钾染色法的研究

酯酶可将α-醋酸萘酯和β-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚,利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色.     

H9N2亚型AIV HA基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

[研究目的]利用杆状病毒表达系统表达AIV H9N2亚型HA基因以获得可以利用的HA蛋白;[方法]应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9N2亚型HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的HA基因,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点将H9HA基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9HA并将其转化DH10 Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9HA,再将其转染昆虫细胞High Five,进行PCR鉴定、SDS-PAGE和Westem Blot检测;[结果]HA基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,HA基因在High Five细胞中得到了表达,H9HA大小约为67 KD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性;[结论]HA基因在昆虫细胞获得表达,为进一步生产检测H9N2亚型流感病毒的检测试剂或者构建亚单位疫苗奠定了基础.     

鸡白细胞介素-2基因的克隆与酵母表达质粒的构建

从经ConA活化的4周龄岭南黄鸡脾脏淋巴细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡白细胞介素-2(1L-2)cDNA片断,PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体,重组质粒命名为IL-2-T,经菌落PCR与限制酶切鉴定,然后测序,结果表明克隆片断长度为432bp,与预期大小一致,为鸡IL-2基因的编码区全长,将IL-2-T克隆重组质粒进行双酶切(Cla I与Xba I),回收IL-2片断插入同样酶切的毕赤酵母表达质粒pPiCZa-C,构建重组IL-2-C表达质粒,为鸡IL-2在毕赤酵母中的表达奠定基础。     

5株传染性支气管炎病毒分离株的鉴定和血清分型

从四川、重庆和广东3个不同地区,不同时间发病的肉鸡中分离出5株病毒．通过鸡胚发育试验、NDV干扰试验、动物回归试验和感染后鸡血清中抗体水平变化确定这5株病毒均为传染性支气管炎病毒．血清中和试验表明,这5株病毒血清型与北京分离的A2株一致,而与H52、H120、M41、T和Holte株不同．该研究结果证实了鸡传染性支气管炎病毒类4／91毒株在我国华南和西南地区的流行．     

水泡性口炎病毒2种血清型核衣壳蛋白的原核表达及生物信息学分析

用RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(vsv)扩增印第安纳(Indiana)和新泽西(New Jersey)血清型核蛋白N基因,分别克隆至pMD20-T载体进行序列鉴定及生物信息学分析.构建重组表达质粒VSV-IN-pBCX和VSV-NJ-pB-CX,并经SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明2种血清型病毒核衣壳蛋白N基因在BL21(DE3)宿主菌中成功表达,重组蛋白相对分子质量约为82 000,并能够与各自对应血清型阳性血清反应.这表明2个重组蛋白具有良好的抗原性,可作为用于建立水泡性口炎血清学诊断方法的诊断抗原.     

马立克氏病的诊断技术

马立克氏病（MD）是由马立克氏病病毒（MDV）引起的一种高度接触传染性肿瘤病,以淋巴组织增生和肿瘤形成为特征。马立克氏病是危害世界养禽业最严重的传染病之一,世界动物卫生组织（OIE）将其归为动物B类传染性疾病,广泛存在于世界上所有养禽国家和地区。     

用酶联免疫吸附试验（ELISA）评价小鸡IBD免疫效果

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）评价小鸡ＩＢＤ免疫效果曹永长，毕英佐，朱基美（华南农业大学动物科学系，广州５１０６４２）酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）用于生产场疫苗的免疫效果评价还是最近几年才发展起来的￣［１，２］。我们采用美国ＩＤＥＸＸ公司提供的Ｉ...     

牛疱疹病毒I型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立

采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。     

鸡传染性喉气管炎的诊断

传染性喉气管炎病毒（ILTV）是一种能够引起鸡急性上呼吸道感染的疱疹病毒。由它所引起的疾病称为鸡传染性喉气管炎。该病毒在分类上属于疱疹病毒科α亚科,学名为鸡疱疹病毒I型（gallid herpesvirus I）。