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本文通过PCR技术获得3D基因,使用拼接重叠延伸聚合酶链反应对3D基因内部的EcoRⅠ位点进行定点突变,将突变后的3D基因克隆至原核表达质粒pSOC和T4噬菌体的穿梭质粒pR中,通过PCR及质粒酶切鉴定,分别获得阳性重组子pSOC-3D和pR-3D。将含有3D基因的重组质粒pSOC-3D质粒转化大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE检测表达产物。将含有3D基因的重组质粒pR-3D转化T4噬菌体的宿主菌E2,通过同源重组获得重组噬菌体T4-3D,经SDS-PAGE及Western- blot检测,证明展示在T4噬菌体表面的3D融合蛋白能与FMDV感染血清发生特异性反应。 相似文献
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采用含传染性法氏囊病病毒(HK46毒株)VP2基因的质粒FA-pAlter为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到1.3kb左右的VP2基因产物;用Bgl Ⅱ和Nhe Ⅰ酶切后纯化,并在T4DNA连接酶的作用下,将其定向克隆到经Bgl Ⅱ和Nhe Ⅰ不完全酶切后的pcAMBIA3301质粒上,构建成VP2植物表达载体。以电击转化法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,并用PCR方法进行了鉴定,为下一步的植物转基因研究生产可食用疫苗打下了基础。 相似文献