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根据鸡缩胆囊素(choleystokinin,cck)-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列.将cck-33基因克隆至pRSETA质粒上,利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌EcoliBL21中成功表达.将所表达的融合蛋白进行纯化后,以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡.结果表明,CCK蛋白主动免疫肉鸡后,抗血清水平显著升高,P/N值远远大于2. 相似文献
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鸡γ干扰素基因在毕赤酵母中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
为了获得高效分泌表达ChIFNγ的重组毕赤酵母菌株,利用基因工程技术,将435 bp的ChIFNγ成熟肽编码基因亚克隆到巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体PPICZαC中,将该重组质粒用BstX Ⅰ线性化并通过电击法转化毕赤酵母X-33菌株,用500 μ/mL抗生素Zeocin筛选高拷贝阳性重组菌.甲醇诱导表达的重组ChIFNγ经SDS-PAGE电泳,可在相对分子质量约2.0×104处检测到目的蛋白带,目的蛋白占酵母表达上清液总蛋白质的35%.微量细胞病变抑制法检测表达产物的生物学活性,检测结果表明,巴斯德毕赤酵母表达的重组ChIFNγ的抗病毒效价为6 400 U/mL. 相似文献
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新城疫病毒HN基因与T4噬菌体SOC基因在大肠埃希氏菌中的融合表达 总被引:2,自引:1,他引:2
用RT—PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)的完整HN基因序列;设计了1对带有EcoR Ⅰ限制位点的引物,用PCR扩增出了HN基因片段。将该片段克隆至pSOC质粒SOC基因3’端,成功构建了重组质粒pSOC—HN。用该重组质粒转化E.coli BL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/mL的IPTG诱导表达。在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子质量约67ku的特异条带,蛋白质印迹法证实,表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。 相似文献
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新城疫病毒广东分离株HN基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
用RT-PCR方法从6个新城疫病毒(NDV)广东分离株中扩增HN基因cDNA片段。并将其克隆至pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。结果表明,6个NDV分离株HN基因片段长度均为1704bp,编码568个氨基酸;彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.8%和98.6%~100%,与其他基因Ⅶ型毒株的氨基酸序列同源性为96.8%~98.4%;但与其他基因型毒株如D26、Ulster/67、B1、LaSota以及GB Texas的氨基酸同源性较低,为88.2%~91.0%。 相似文献
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以含完整的口蹄疫病毒全衣壳前体基因(P1)的质粒pP1-T为模板进行PCR扩增获得P1基因片段(约2 200bp),构建整合质粒pR-P1经引物对Pr.78/P1-A2进行PCR扩增筛选插入方向正确的重组质粒,EcoRⅠ酶切和T7启动子测序正确。以pR-P1质粒转化E.coliE2,感染噬菌体φT4-Z1进行同源重组,经溶菌酶依赖性筛选获得整合成功的噬菌体φT4-P1。SDS-PAGE检测重组噬菌体出现约98 000预计大小的条带;Western bloting检测表明,重组噬菌体φT4-P1与口蹄疫阳性血清可发生免疫反应。 相似文献
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将猪源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)VP1基因克隆到原核表达载体pMBX上,成功地构建重组表达质粒pMBX-VP1。将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子量约为58 kD,表达产物占菌体总蛋白的35.5%。 经蛋白可溶性分析,目的蛋白在裂解沉淀中占6.8%,在裂解上清中占31.2%,融合蛋白绝大部分是以可溶形式表达的。经Western blot证实,可溶表达的融合蛋白与FMDV阳性血清具有良好的免疫反应性。将可溶表达的融合蛋白用50%Ni-NTA树脂纯化,用融合蛋白作包被抗原,通过ELISA方法,能特异性地检测出口蹄疫阳性血清。 相似文献
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主动免疫血管活性肠肽对泰和鸡繁殖性能的影响 总被引:7,自引:1,他引:7
56周龄的母泰和鸡分为3组,第1组(n=35)用血管活性肠肽(VIP)类似物与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物进行免疫,第2组(n=33)用矿油佐剂与水的乳化物进行注射,第3组(n=36)作空白对照。试验结果显示:与对照组相比,免疫组日抱窝率明显减少,产蛋高峰后的产蛋率明显高于对照组,且各组间蛋的受精率和孵化率无明显差异。第1、2组血浆VIP类似物抗体及催乳素(PRL)水平的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果显示:第1组二免后VIP类似物抗体水平最高,P/N达493±116,而第2组的检测结果为阴性;第1组免疫后的血浆PRL水平明显低于同期的第2组。以上结果表明,在泰和鸡中主动免疫VIP可以降低血浆的PRL水平,减少抱窝率,提高产蛋率。 相似文献
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20世纪70年代Tischer ea al.(1974)首次发现猪圆环病毒(PCV2),它所引发的猪圆环病毒病给养猪业造成很大的经济损失. 相似文献
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传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定 总被引:3,自引:2,他引:1
采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从1株传染性法氏囊病病毒(IBDV)本地分离株GZ902中扩增到编码IBDV主要免疫蛋白VP2的cDNA片断,大小约为1350bp。将该cDNA片断插入pBsK质粒中,用重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue,成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒DNA进行酶切鉴定,证明插入的DNA片断与PCR扩增的DNA片段大小相符。对GZ902高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与3株IB-DV变异株A、GLS、E的同源性分别达到98.9%,96.2%和95.5%。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从DNA序列推导出的氨基酸序列,发现GZ902高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化,而在249和254位上的氨基酸分别为K和S,与以上3个变异株相同,但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为IBDV变异株的标志。 相似文献