主动免疫血管活性肠肽对泰和鸡繁殖性能的影响

５６周龄的母泰和鸡分为３组，第１组（ｎ＝３５）用血管活性肠肽（ＶＩＰ）类似物与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的偶联物进行免疫，第２组（ｎ＝３３）用矿油佐剂与水的乳化物进行注射，第３组（ｎ＝３６）作空白对照。试验结果显示：与对照组相比，免疫组日抱窝率明显减少，产蛋高峰后的产蛋率明显高于对照组，且各组间蛋的受精率和孵化率无明显差异。第１、２组血浆ＶＩＰ类似物抗体及催乳素（ＰＲＬ）水平的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测结果显示：第１组二免后ＶＩＰ类似物抗体水平最高，Ｐ／Ｎ达４９３±１１６，而第２组的检测结果为阴性；第１组免疫后的血浆ＰＲＬ水平明显低于同期的第２组。以上结果表明，在泰和鸡中主动免疫ＶＩＰ可以降低血浆的ＰＲＬ水平，减少抱窝率，提高产蛋率。     

鱼类低温适应机制的研究——(Ⅰ)驯化温度对草鱼和鲮鱼几种同工酶活性及酶谱的影响

采用分光光度法测呈了25℃和10℃驯养的草鱼、鲮鱼、二代混精鲮鱼及对照组混精鲮鱼的肌肉和肝脏组织中乳酸脱氨酶(LDH)、6-磷酸葡糖脱氨酶(G6PDH)和异柠檬酸脱氢酶(IDH)活性的变化;采用电泳法对LDH、酯酶(EST)和超氧化物歧化酶(SOD)的同工酶酶谱进行了比较研究。实验结果表明,草鱼肝脏组织在低温下发生了代谢途径的转换和重组,而鲮鱼的肌肉组织和肝脏组织都只采取了增加酶浓度的方式。鲮鱼代谢转换机制的不完善,可能是鲮鱼不耐低温的重要原因之一。三组鲮鱼肝脏组织的酯酶(EST)同工酶谱在不同适应温度下的变化表明,鲮鱼肝脏组织的酯代谢在低温下发生了变化。最后,作者对混精授精法提高鲮鱼耐寒能力的作用进行了评价。     

鸡缩胆囊素-33串联体的构建、原核表达及免疫原性研究

根据鸡缩胆囊素（choleystokinin，cck）-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子，设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列．将cck-33基因克隆至pRSETA质粒上，利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌EcoliBL21中成功表达．将所表达的融合蛋白进行纯化后，以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡．结果表明，CCK蛋白主动免疫肉鸡后，抗血清水平显著升高，P／N值远远大于2．     

过氧化氢酶同工酶KMnO4染色法的初步研究

将电泳凝胶在H2 O2 溶液中浸泡一段时间。在凝胶上有过氧化氢酶的地方 ,由于H2 O2 被该酶催化生成了H2 O和O2 ,也就无H2 O2 与KMnO4反应 ;而在无过氧化氢酶的地方 ,H2 O2 能在中性条件下与KMnO4反应生成棕色的MnO2 沉淀。利用KMnO4可在凝胶的棕色背景上观察到透明的过氧化氢酶同工酶带     

新城疫病毒HN基因与T4噬菌体SOC基因在大肠埃希氏菌中的融合表达

用RT—PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)的完整HN基因序列；设计了1对带有EcoR Ⅰ限制位点的引物，用PCR扩增出了HN基因片段。将该片段克隆至pSOC质粒SOC基因3’端，成功构建了重组质粒pSOC—HN。用该重组质粒转化E．coli BL-21(DE3)感受态细胞，以终浓度1mmol／mL的IPTG诱导表达。在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子质量约67ku的特异条带，蛋白质印迹法证实，表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性。     

O型口蹄疫病毒VP1基因的高效可溶表达及抗原性分析

将猪源Ｏ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)VP1基因克隆到原核表达载体pMBX上，成功地构建重组表达质粒pMBX-VP1。将其转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中，经SDS-PAGE分析，融合蛋白分子量约为58 kD，表达产物占菌体总蛋白的35.5％。 经蛋白可溶性分析，目的蛋白在裂解沉淀中占6.8％，在裂解上清中占31.2％，融合蛋白绝大部分是以可溶形式表达的。经Western blot证实，可溶表达的融合蛋白与FMDV阳性血清具有良好的免疫反应性。将可溶表达的融合蛋白用50%Ni-NTA树脂纯化，用融合蛋白作包被抗原，通过ELISA方法，能特异性地检测出口蹄疫阳性血清。     

传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定

采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从１株传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）本地分离株ＧＺ９０２中扩增到编码ＩＢＤＶ主要免疫蛋白ＶＰ２的ｃＤＮＡ片断，大小约为１３５０ｂｐ。将该ｃＤＮＡ片断插入ｐＢｓＫ质粒中，用重组质粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片断与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相符。对ＧＺ９０２高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与３株ＩＢ－ＤＶ变异株Ａ、ＧＬＳ、Ｅ的同源性分别达到９８．９％，９６．２％和９５．５％。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从ＤＮＡ序列推导出的氨基酸序列，发现ＧＺ９０２高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化，而在２４９和２５４位上的氨基酸分别为Ｋ和Ｓ，与以上３个变异株相同，但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为ＩＢＤＶ变异株的标志。     

传染性囊病病毒诱导细胞凋亡的初步观察

用１株ＩＢＤＶ强毒株感染易感小鸡，对病鸡法氏囊进行电镜观察及ＤＮＡ电泳分析，直接观察到病鸡法氏囊中Ｂ淋巴细胞凋亡的典型形态学特征和生化变化：染色质凝聚成团，集于核膜旁，胞膜与核膜出现凹陷，细胞拉长变形，最后细胞裂解成由膜包围着的小团，被网状细胞和巨噬细胞吞噬；感染ＩＢＤＶ２４～４８ｈ的法氏囊细胞总ＤＮＡ在电泳谱上呈梯状条带，而从正常的法氏囊提取的总ＤＮＡ在电泳谱上只有１条带。结果表明，ＩＢＤＶ感染小鸡之后，导致了法氏囊中Ｂ淋巴细胞的凋亡。作者据此推断，细胞凋亡是造成Ｂ淋巴细胞数量减少，从而导致小鸡免疫抑制的原因     

重组新城疫病毒HN与F蛋白免疫保护作用的初步研究

95只1日龄SPF鸡随机分成5组,1～4组分别于10日龄接种φT4、φT4-Z1-HN、φT4-Z1-F、φT4-Z1-HN φT4-Z1-F油乳剂疫苗,第5组接种ND弱毒疫苗,25日龄加强免疫一次.结果表明,重组HN和F蛋白均能诱导ND抗体产生,但抗体水平显著低于用弱毒疫苗免疫的第5组.60日龄时用100LD50NDV强毒株攻毒,第1组鸡100%发病和死亡,φT4-Z1-HN和φT4-Z1-F免疫组的死亡率分别为50%和15.8%;用φT4-Z1-HN φT4-Z1-F和ND弱毒疫苗免疫的第4、5组鸡无一死亡.     

猪圆环病毒Ⅱ(PCV2)衣壳蛋白羧基端基因在T4噬菌体表面的展示

20世纪70年代Tischer ea al.(1974)首次发现猪圆环病毒(PCV2),它所引发的猪圆环病毒病给养猪业造成很大的经济损失.