猪细小病毒-伪狂犬病病毒二联油乳剂灭活疫苗的研制

猪细小病毒(Porcine paruovirus，PPV)和伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)均是导致母猪发生繁殖障碍性疾病的主要病原，它们在世界范围内广泛分布，造成了巨大的经济损失，严重制约了养猪业的健康发展，已经成为猪病研究的热点。     

地高辛标记DNA探针检测伪狂犬病的研究

利用伪狂犬病病毒特异性扩增产物制成地高辛标记的探针，对闽Ａ株，鄂Ａ株，Ｂａｒｔｎａ株，英国株及临床病料进行检测，其结果与ＰＣＲ检测结果相符，准确率为１００％，灵敏度达到２ｐｇＤＮＡ，试验认为该探针具有灵敏、特异、安全的特点     

双基因共表达的"自杀性"DNA疫苗载体的改造及其体外表达特性

PCR扩增西门利克森林病毒（SFV）亚基因组启动子26S序列及人工合成Linker，将其插入基于SFV复制子的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1的多克隆位点，获得舍2个26S启动子并能同时驱动双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA2。为了验证pSCA2的表达能力，PCR扩增绿色荧光蛋白基因EGFP和红色荧光蛋白基因DsRed2，分别插入pSCA2的2个26s启动子下游，获得EGFP和DsRed2双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗pSCA2-EGFP／RFP。将pSCA2-EGFP／RFP转染BHK-21细胞，转染后24h，可同时观察到被转染细胞发绿色荧光和红色荧光，证实EGFP和DsRed2均获得表达。     

伪狂犬病病毒PK基因的克隆与PK、gG双缺失转移载体的构建

地高辛标记伪狂犬病病毒（PRV）Ea株短区段蛋白激酶（PK）基因3′端0．4kb片段，Southern杂交确定短区段PK基因定位在基因组DNA BamH Ⅰ 4．0kb片段中。将该片段克隆获得重组质粒pSB304，对pSB304亚克隆，构建了仅含完整PK基因约1．3kb片段的重组质粒pSB305，并进行了序列测定。结果表明，PK基因存在2种可能的同框编码方式，分别编码388或334个氨基酸残基，并具有真核细胞蛋白激酶催化结构域序列。同国外PRV NIA-3、Ka株相比，氨基酸同源性分别为98．8％和97．3％，有意义的是Ea株、Ka株均较NIA-3株在同一位置缺失2个氨基酸（Asp，Gly）。进一步对pSB305和含gG全基因以及部分gD基因的质粒pUSK进行酶切拼接，将PK基因大部分编码区、gG基因5′端部分编码区进行缺失，构建成两端同源侧翼分别为3．1kb和1．6kb的PK、gG双缺失转移载体pLR001。上述结果为深入研究PK基因功能及研制更安全的TK^-／PK^-／gG^-三缺失基因工程疫苗奠定了基础。