排序方式: 共有66条查询结果,搜索用时 0 毫秒
51.
从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中克隆含UL14基因的BamHⅠ第3片段并进行序列分析。根据测定的序列设计1对能扩增UL14基因完整编码区的引物,PCR扩增UL14基因并将其插入原核表达载体pGEX-KG,获得原核表达质粒pKG-UL14,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下,GST-UL14融合蛋白获得高效表达,表达产物的相对分子质量为44 000,并以包涵体形式存在。纯化的表达产物免疫兔,获得了针对UL14蛋白的高效价多抗血清。进一步将UL14基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中EGFP基因的3′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL14,转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察发现,转染后24、48 h的融合蛋白EGFP-UL14主要定位在胞浆,但转染后72 h的融合蛋白主要定位在细胞核。上述研究结果为进一步阐明UL14的结构与功能奠定了基础。 相似文献
52.
猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。 相似文献
53.
54.
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白共表达的自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答 总被引:12,自引:1,他引:12
【目的】探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自杀性DNA疫苗的免疫效果。【方法】将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游,获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。【结果】Western blot检测证实ORF5和ORF6基因获得正确表达,并且所表达的GP5和M蛋白可以形成异源二聚体。将pSFV-56免疫Balb/c小鼠,首免后4周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周的中和抗体最高可达1﹕32,同时还可检测到较高的特异性细胞免疫应答。进一步将pSFV-56免疫断奶仔猪,二免后4周即可产生1:8~1:16的中和抗体,直到二免后6周仍维持这种高水平的中和抗体,而且也可检测到较高的特异性细胞免疫应答。【结论】上述研究结果表明pSFV-56具有良好的免疫原性和诱发免疫动物产生较高免疫应答的能力。 相似文献
55.
56.
猪乙型脑炎乳胶凝集试验与血凝抑制试验方法的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
用血凝抑制试验 (HI)和乳胶凝集试验 (LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清 ,结果均呈阳性反应。用LAT对来自 12个猪场的 94份猪血清进行了乙型脑炎病毒 (JEV)抗体检测 ,并与HI进行了对比 ,两种方法检测结果阳性符合率和总符合率分别为 90 .3% (5 6 /6 2 )和 88.3% (83/94 ) ,两种方法检测结果差异不显著 (p >0 .0 5 )。对来自无乙型脑炎的 12头健康猪血清进行检测 ,两种方法检测结果均为阴性。结果表明 ,用LAT与HI检测乙型脑炎结果符合 ,前者更为简便和实用。 相似文献
57.
猪维甲酸诱导基因Ⅰ的克隆及其在诱导Ⅰ型干扰素中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在I型干扰素信号通路中的作用。从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-βⅠ、RF3和NF-κB的荧光素酶报告系统分析猪RIG-Ⅰ在诱导I型干扰素中的作用。结果表明,猪RIG-Ⅰ开放读码框全长为2 832 bp,编码943个氨基酸,与鸭嘴兽、大鼠、小鼠、猴、黑猩猩、人、马和牛RIG-Ⅰ相应序列的同源性为53.2%~83.2%。猪RIG-Ⅰ超表达能显著激活转录因子IRF3和NF-κB,并诱导IFN-β的产生。缺失猪RIG-Ⅰ的CARD区不仅不能激活下游信号,而且还负调控poly(Ⅰ:C)诱导IFN-β的能力。结果提示RIG-Ⅰ是猪天然免疫系统中的一个模式识别受体,在I型干扰素诱导的信号通路中具有重要作用。 相似文献
58.
牛疱疹病毒I型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以牛疤疹病毒I型(BHV—I)国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板,扩增出大小约0.77kb的ul49基因完整编码区片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体中,获得含ul49基因的重组质粒pMD—VP22。采用双脱氧末端终止法进行序列测定,发现与国外Cooper株ul49基因序列完全一致,说明ul49基因相当保守。进一步将BHV—lul49完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP—C1中,获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22。将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS—PAGE电泳检测发现在58kDa处有一条特异性的表达带。利用脂质体介导,将pEGFPVP22转染PK-15细胞,经G418加压筛选,获得稳定表达VP22的细胞克隆。在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞,发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中,而对照载体pEGFP—C1转染细胞的荧光分布于胞浆。 相似文献
59.
EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PEV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siENA序列,本研究按照Ambion公司公布的siENA分子设计原则,设计并合成了3个针对PEVEa株EP0基因的siENA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siENA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5′端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4-1EP04、p4-1-EP08、p4-1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0—EGFP共转染IBES-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT—PCE检测结果表明,三个siENA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PEV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。 相似文献
60.
我国规模化养猪主要病毒性繁殖障碍病的研究现状与防制策略 总被引:2,自引:0,他引:2
以1996~2000年所进行的主要病毒性疫病的血清学和病原学调查结果为依据,阐述了当前严重影响我国规模化养猪的几种主要病毒性繁殖障碍病,即伪狂犬病、乙型脑炎、细小病毒感染、猪繁殖与呼吸障碍综合征等的流行现状和新特点,分析了这些病毒流行的原因,并提出了相应的防制对策,展望了疾病预防与控制的发展趋势。此外,简要介绍了猪环状病毒病这一新病。 相似文献