不同因素对牛-兔种间重构卵融合率的影响*

研究了用不同方法处理的核供体细胞(休眠期和非休眠期的体细胞、4℃冷藏1～5 d或12～14 d的体细胞)、融合液中加入细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)以及卵供体兔龄等因素对牛-兔种间重构卵融合率的影响.结果发现,以休眠期或非休眠期的体细胞作核供体,其融合率和在融合过程中的死卵率均无显著差异(P＞0.05);将核供体细胞(休眠期或非休眠期的体细胞)在4℃冷藏1～5 d或12～14 d,与新鲜的核供体细胞相比,对重构卵的融合率和在融合过程中的死卵率无显著影响(P＞0.05);在融合液中加入CB后对融合率无明显影响(P＞0.05),但在融合过程中死卵率显著升高(P＜0.05);用青年兔(3～5月龄)的卵母细胞作受体与用经产兔(10～12月龄)的相比,其融合率无显著差异(P＞0.05),但在融合过程中,用青年兔卵母细胞作受体的重组卵的死卵率极显著低于用经产兔卵作受体的重组卵(P＜0.01).     

发生鸡新城疫的紧急防治措施

鸡新城疫病是由鸡新城疫病毒引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽和观赏鸟的高度接触性、急性、致死性传染病。本文对鸡薪城疫发病以后的紧急防治措施作一介绍。     

不同培养条件和卵母细胞来源对黄牛卵母细胞第一极体排出的影响

研究了培养液组分浓度、培养方法和卵母细胞来源对黄牛卵母细胞第一极体(PB1)排出的影响。从屠宰场收集黄牛卵巢,使用抽吸法获取卵丘卵母细胞复合物(COCs)进行体外培养。结果表明,采用以下培养条件能够显著促进黄牛卵母细胞PB1排出:在培养液中添加10μg·mL-1FSH和LH、1.0μg·mL-117-βE2、33.0μg·mL-1丙酮酸钠;培养时间24 h,培养密度每50μL培养液培养10～20枚COCs;卵巢储运温度25～37℃,储运时间<3 h,卵泡直径3～6 mm,卵丘细胞包裹2层以上。选择最佳的培养液组分浓度、培养方法和卵母细胞来源可获得最大PB1排出量,为下一步利用PB1进行保护物种、扩大优良母畜遗传资源的来源和植入前遗传学诊断等研究提供参考。     

Leptin对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后早期胚胎发育的影响

为了探讨瘦素(Leptin)对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后胚胎早期发育的影响,研究选择在Earle's盐缓冲的TCM199中添加10IU/mLeCG,10IU/mLhCG,10ng/mLEGF配制成化学限定的基础液,以添加不同浓度Leptin设定各试验组,对猪卵母细胞进行体外成熟培养。以未添加Leptin的基础液为对照组1,而添加5%的胎牛血清(FBS)、10%猪卵泡液为对照组2。比较分析各组卵母细胞核成熟效率,孤雌激活后胚胎的卵裂率,囊胚发育率。结果表明:各添加组卵母细胞成熟率与对照组之间无显著差异(P>0.05);孤雌激活后,各组间的卵裂率和囊胚发育率也无明显差异。同时,在化学限定的猪卵母细胞体外成熟液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活后早期胚胎的发育无显著效果。     

一种崭新的获取多能性干细胞的技术——诱导多能性干细胞

人的胚胎干细胞(ES)在药物筛选、疾病诊治与机理研究等方面的应用前景诱人。但由于材料来源、伦理压力及操作技术等因素的限制,发展较为缓慢。最近,人们通过4个外源基因转染,发现可以直接诱导体细胞为多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)。该方法不仅避免了以往获取ES所涉及的伦理争论,且操作简单、材料来源丰富,有望根据病人需要获取其特异性的治疗材料,实现免疫配型,解决免疫排斥问题。因此,iPS的理论和实践意义非常重要。本文综述了iPS的研究现状、iPS的应用实例与前景及iPS存在的问题等。     

小鼠干扰素应答基因(Ifrg15)的克隆、原核表达及其融合蛋白的亲和纯化

为研究一个可能的干扰素应答基因(interferon responsive gene 15,Ifrg15)所编码蛋白质的生物学功能,对昆明小鼠(Mus musculus)基因组DNA进行PCR扩增获得Ifrg15(393 bp),并将其克隆到pGEM-T载体,经测序鉴定后用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切下Ifrgl5基因片段并和双酶切后的表达载体pET-41(c)进行连接,然后转化入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞.对重组克隆用IPTG诱导融合蛋白的表达,并进行分离纯化.结果表明,本实验在E.coli BL21(DE3)菌株中成功地高效表达、并在变性亲和层析条件下成功纯化了GST&6xHis-Ifrg15融合蛋白.     

fat-1基因脂肪组织特异性表达载体的构建及其山羊转基因细胞系的建立

旨在构建一种筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的载体,将其转染山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定整合fat-1基因的转基因细胞系。首先将人工合成的fat-1基因连接至L28-Wnt10b载体(1种带有小鼠脂肪组织特异性启动子Fabp4的载体)上,构建成fat-1基因脂肪组织特异性表达载体L28-fat1;同时经多次克隆构建成1种筛选标记可全部去除的骨架载体MCS-3s-LoxP-RFP;然后,利用Hind III和Not I对上述2种载体进行双酶切,接着进行连接,构建出筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的表达载体。采用脂质体介导的方法转染山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选转基因细胞。酶切鉴定及PCR检测结果表明,成功构建了3s-LoxP-RFP-FABP4-fat1表达载体,并首次获得了脂肪组织特异性表达fat-1基因的山羊胎儿成纤维转基因细胞系,为将来通过体细胞核移植创制脂肪组织特异表达fat-1基因的优质肉用转基因山羊新材料奠定了基础。     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活参数研究

本研究比较了按不同方法贮藏的培养液对猪卵母细胞体外成熟及成熟后孤雌激活对胚胎发育的影响。此外,还探索了针对初情期前母猪体外成熟卵母细胞和孤雌激活方案。结果如下：①1.4 kv/cm、100 μs、1DC电激活后,卵母细胞死亡率明显高于2.0 kv/cm、30 μs、1DC和2.0 kv/cm、60 μs、1DC处理组,但激活后胚胎卵裂率和囊胚率相似;②使用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤（Ionomycin+6-DMAP）处理后,胚胎卵裂及囊胚率都明显不如电激活处理;③6次独立试验结果证明：经4℃冷藏和-20℃冷冻保存的培养液用于猪卵母细胞培养,其体外成熟率、孤雌激活后的卵裂率及囊胚发育率无显著差异（P＞0.05）。说明成熟卵在2.0 kv/cm、30 μs、1DC或者 2.0 kv/cm、60 μs、1DC电击参数激活下可以降低死卵率;按本试验设计的电激活方案处理初情期前母猪成熟卵优于化学激活;在-20℃冷冻保存猪卵母细胞成熟液是可行的。      

激活HH信号通路抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化

为探讨HH信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制,以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为材料,应用油红O染色法检测ADSCs成脂分化过程中的形态变化;采用荧光定量PCR及Western Blot的方法检测HH通路Gli1及脂肪细胞分化转录因子的时序表达。通过嘌呤衍生物2,6,9-三元取代嘌呤(Purmorphamine,PM)激活猪ADSCs细胞中HH信号通路,探讨体外激活HH信号通路对猪ADSCs向脂肪细胞分化的作用及其机制。结果显示,在成脂诱导分化的过程中,经5μmol/mL的PM持续处理,细胞中Gli1的mRNA及蛋白表达量增加;猪ADSCs向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低;脂肪细胞分化关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制。以上结果表明,激活HH信号通路可通过下调PPARγ和C/EBPα的表达抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化。     

应用Solexa测序技术挖掘山羊卵巢组织microRNA

【目的】旨在构建、分析山羊卵巢组织miRNA表达谱,为进一步研究特定miRNA与山羊卵泡发育及性激素分泌等相关生殖活动的关系奠定理论基础。【方法】首先从山羊卵巢组织总RNA中分离小片段RNA,然后进行Solexa测序和生物信息学分析,最后利用q-PCR技术验证miRNA在山羊卵巢组织中的表达。【结果】共鉴定出508个山羊卵巢组织表达的miRNA和19个对应的miRNA*,这些miRNA在哺乳动物（绵羊、牛、猪、马、狗）进化过程中高度保守;q-PCR验证了8个miRNA在山羊卵巢组织中的表情况,定量结果与测序结果一致。【结论】成功构建了山羊卵巢组织miRNA表达文库,山羊卵巢组织miRNA表达丰富且其表达量各异。