响应面优化畜禽归芪益母汤酶解提取工艺

为了掌握传统中兽药畜禽归芪益母汤最佳纤维素酶提取工艺,采用单因素试验结合响应面优化法对提取工艺进行优化,包括酶解时间、温度、pH值,并测定优化后畜禽归芪益母汤酶解提取液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和阿魏酸质量浓度。结果表明,畜禽归芪益母汤最佳纤维素酶酶解工艺为温度50℃、pH值为5.0的条件下提取9 h,提取后酶解液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度为0.217 mg/mL,阿魏酸质量浓度为0.122 mg/mL,与模型预测值相近。与传统提取方法相比,纤维素酶酶解提取的畜禽归芪益母汤中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和阿魏酸质量浓度分别提升48.63%和69.52%。     

猪视网膜上皮细胞的分离培养与鉴定

旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞,筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果：消化法分离的细胞约1周长成单层,组织块贴壁法约2周长满单层,但活力更高;PRCs主要形态为长梭形和大理石样,呈现为2种形态细胞混合生长;差速消化法纯化细胞后,经间接免疫荧光鉴定细胞角蛋白(CK18和CK19),确定该细胞为上皮细胞;细胞接种猪圆环病毒2型(PCV2)可产生明显病变。综上,本试验成功分离获得PRECs,含胎牛血清浓度为12%的α-MEM为最优培养基,该细胞支持PCV2增殖并产生明显的细胞病变,为进一步建立稳定传代的猪视网膜上皮细胞系及研究PCV2感染及致病机理提供基础。     

定安母猪流产病原检测

为了解引起定安母猪流产和死胎的主要病毒病原情况,笔者采用荧光定量PCR方法对2021年11月至2022年10月采自海南定安县32个定安母猪养殖场及养殖户267份流产胎儿及组织排泄物样品进行了猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪乙型脑炎病毒(JEV)5种病原的检测。结果显示,267份病例样品大部分来源于海南气温相对较低的月份(占比63%)及母猪妊娠后期(占比77%)。5种病原阳性检出率为36.70%(98/267),从高到低依次为PRRSV(17.98%)、PCV2(11.61%)、JEV(9.74%)、PRV(6.37%)、PPV(4.49%)。病原以单一感染为主,混合感染以双重感染为主,多种病原感染少见。为相关养殖场及养殖户做好定安母猪繁殖障碍性疫病的防控措施提供参考依据。     

菌株JB12影响铅镉胁迫下菊苣黄酮合成的转录组分析

为探究菌株JB12对菊苣(Cichorium intybus)幼苗铅镉抗性和黄酮生物合成的影响,将菌株JB12接种于铅镉复合(Pb-Cd)浓度为400～40 mg·kg^-1的土壤中,测定幼苗生长指标、铅镉含量、抗氧化酶活性、总黄酮含量和黄酮生物合成相关酶活性,并对叶片转录组数据进行分析。结果表明,接种菌株JB12后,叶片过氧化氢(H₂O₂)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)及地上部和根部铅镉含量均低于胁迫处理组,植株干重、抗氧化酶活性、总黄酮含量及黄酮生物合成相关酶活性均高于胁迫处理组。对叶片转录组数据和RT-qPCR验证分析表明,苯丙素和黄酮生物合成途径相关基因表达上调可能是菌株JB12提高菊苣幼苗铅镉抗性的重要机制。综上所述,菌株JB12在减少菊苣幼苗铅镉积累的同时,还可以通过增强抗氧化酶活性及调控叶片黄酮生物合成相关基因的表达,提高菊苣幼苗的铅镉抗性和总黄酮的积累。     

猪NLRP3基因Real-time PCR检测方法的建立及应用

根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了NLRP3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平。最佳引物浓度为0.15μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%～0.184%,批间变异系数为0.221%～0.594%,重复性好。该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mRNA拷贝数达18 000左右,可持续42 d。表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持。     

绿色包装设计理念在茶叶包装中的应用

随着经济全球化的快速发展,低碳理念开始在各行各业蔓延,随之而来的绿色包装设计理念也在国际上广泛兴起。我国是茶叶的主要生产国和出口国,茶叶包装为茶叶在国际竞争中增添了重要助力。本文在简述绿色包装设计理念相关概述的基础上,深入分析了茶叶包装中存在的问题,并将绿色包装设计理念应用在茶叶包装中,推动着茶叶包装向着生态化、人性化方向发展。     

棉花密度与惠满丰活性肥施用量研究初报

惠满丰高效活性肥是继惠满丰有机活性液肥之后的又一新产品。为了探索其在营养钵育苗移栽棉花上的增产效果,１９９８年在新乡七里营镇进行了棉花不同密度与不同施用量试验。１　试验基本情况试验田肥力中等偏上,供试品种为新高抗５号,４月４日营养钵育苗,５月１６日移栽麦垄。试验采用二因素Ｄ－饱和最优回归设计,Ｘ１为惠满丰高效活性肥（含Ｎ１６％、Ｐ２Ｏ５９％、Ｋ２Ｏ５％,富含有机质）,Ｘ２为移栽密度,多因素水平编码值见表１,小区面积３３．３ｍ２,４行区,三次重复,惠满丰高效活性肥（以下简称惠满丰）全部作底肥,６月…     

利用CRISPR/Cas9探究水稻OsPIN5c基因功能

生长素极性运输在植物生长发育中发挥着重要作用,生长素输出载体蛋白(PIN-FORMED,PIN)是控制生长素极性运输的关键蛋白。虽然部分水稻OsPIN基因功能已有报道,但水稻OsPIN5c的生物学功能仍有待研究。本研究在OsPIN5c第1外显子处设计靶点并构建CRISPR/Cas9载体,通过转化粳稻品种日本晴获得24株转基因植株, PCR产物直接测序分析表明其中15株发生突变,突变率为62.5%,突变类型为双等位突变;进一步从T1代突变体中筛选获得3种不同的纯合突变体,将其命名为ospin5c-1、ospin5c-2和ospin5c-3。序列比对分析表明,这3种类型的突变均造成移码突变和蛋白翻译提前终止,由原来的398个氨基酸分别缩短为109、106和250个氨基酸;跨膜螺旋结构域分析表明, 3种突变体中OsPIN5c蛋白的跨膜结构完全消失;蛋白结构预测表明3种突变体中OsPIN5c蛋白螺旋结构明显减少。突变体的苗高、根长和不定根数均显著低于野生型植株。组织特异性表达表明OsPIN5c主要在根中表达。突变体根中OsPIN1a和OsPIN5b表达量提高;生长素合成关键基因OsYUC1、O...     

基于深度与传统特征融合的非限制条件下奶牛个体识别

针对非限制条件下奶牛的个体识别,提出了一种基于深度特征与传统特征融合的奶牛识别方法。首先利用Mask R-CNN识别站立和躺卧姿态下的奶牛。其次,用两种方法提取奶牛的特征概率向量：用卷积神经网络(Convolutional neural network, CNN)提取Softmax层概率向量形式的深度特征;人工提取并利用近邻成分分析(Neighbourhood component analysis, NCA)选择传统特征,并将其输入支持向量机(Support vector machine, SVM)模型,输出概率向量。最后对两种特征进行融合,并基于融合后的特征采用SVM对奶牛进行分类。对58头奶牛站立和躺卧姿态的数据集进行了个体识别实验,结果表明,对于站立和躺卧姿态下的奶牛,与单独使用深度特征相比,特征融合方法准确率分别提高约3个百分点和2个百分点;与单独使用传统特征相比,特征融合方法准确率分别提高约5个百分点和10个百分点。站立和躺卧姿态下的奶牛个体识别率分别达到98.66%和94.06%。本文研究结果可为智能奶牛行为分析、疾病检测等提供有效的技术支持。     

布鲁氏茵Ⅳ型分泌系统效应子VceC功能的初步研究

为研究布鲁氏茵(Brucella)Ⅳ型分泌系统效应子VceC的功能,本研究从羊种布鲁氏菌16M株基因组中克隆vceC基因片段,插入pEGFP-N1中,构建真核表达重组pEGFP-vceC.经脂质体转染HPT-8细胞,荧光显微镜观察、western blot鉴定目的蛋白在HPT-8细胞中表达情况,检测细胞凋亡、NO释放量及LDH活力.Western blot检测显示VceC在细胞中表达,转染pEGFP-vceC后的细胞凋亡、细胞上清液中NO释放量及LDH活力比对照组显著增加(p＜0.05).本研究初步表明VceC蛋白具有细胞毒性作用,为进一步研究VceC的功能奠定了基础.