靶标抗性点突变基因型检测技术

杀虫剂的不合理使用导致害虫的抗药性日趋严重。抗药性是一种涉及一个或几个昆虫基因的遗传特征。靶标抗性通常与点突变相关,对抗性相关的点突变的快速检测诊断是抗性治理的基础之一。评述了5种基因型检测技术——单链构象多态性、固相微型测序、双向等位特异PCR扩增、实时荧光定量PCR和焦磷酸测序的优缺点及其在突变检测中的应用。     

意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在大肠杆菌中的表达

将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)成熟肽编码区基因(405 bp) 插入表达载体pETBlue-1,在大肠杆菌Tuner(DE3)placⅠ中诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,表达产物分子量为15 kD,约占细菌总蛋白的4.3%;用兔抗AmPLA2多克隆血清为第一抗体作Western blot检测,表达产物显示与天然AmPLA2同样的特异性印迹,证实AmPLA2 基因已在大肠杆菌中得到表达.     

中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究

构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。     

浅论昆虫产业开发

昆虫是目前地球上最大的尚未被人们充分利用的资源，基于这一认识，本文扼要综述了国内外昆虫产业的产业类别和技术开发近况，并就通向成功与繁荣的道路作了讨论。     

黑守瓜中一种新negevirus的鉴定和分析

negevirus(nege-like virus)是病毒学领域新增的一个分类单元,主要包括在节肢动物中鉴定的一类昆虫特异性病毒。本研究利用宏转录组技术从黑守瓜（Aulacophora lewisii）中鉴定到一种新的negevirus,命名为Nbu Aulacophora lewisii nege-like virus 1(NbuALNV-1)。NbuALNV-1为正义单链RNA病毒,全基因组包含9 832个核苷酸（nucleotide, nt）（不包括多聚腺苷酸尾）,5′、3′非翻译区长度分别为292、77 nt。NbuALNV-1基因组包含6个开放阅读框,预测具有5个典型的negeviruses保守结构域,包括病毒甲基转移酶结构域、RNA病毒解旋酶结构域、RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase, RdRp）结构域、DISB-ORF2＿chro结构域和SP24结构域。本研究利用NbuALNV-1和已报道的negeviruses的RdRp氨基酸序列基于最大似然法构建的系统发育分析表明,NbuALNV-1与Hubei Wuhan insect...     

饲料蛋白质含量对家蚕茧质和饲料效率的影响

<正> 明确饲料蛋白质含量对家蚕茧质的影响以及对饲料转化为茧、茧层和卵的效率的影响,对于选择适宜的饲料蛋白质含量水平,提高人工饲料生产效率和经济效益,具有很大的实用价值,并可为选育桑树新品种提供参考。本文就饲料蛋白质含量对茧质、饲料效率和氮素利用的影响进行探讨。     

杆状病毒包涵体蛋白基因的进化

在分析了ＨａＳＮＰＶ和ＥｏＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过ＭＡＬＩＧＮ程序,比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白序列,ＨａＳＮＰＶ与ＨｚＳＮＰＶ亲缘关系十分接近,两ａａ序列同源性达９７．６％,ＥｏＳＮＰＶ与黄极毒蛾核型多角体病毒的同源性为最高,ｎｔ序列的同不原性为８３．０％,ａａ序列达９４．７％与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高,ｎｔ序列同源性为７２．６％－８１．９％,ａ     

海洋双RNA病毒(MABV)vp2e和vp3基因在昆虫细胞中的高效表达

海洋双RNA病毒(Marinebirnavirus,MABV)可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABVY-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中对VP2e和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明,VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8%和8.2%。用HisTag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Westernblot检测,结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样,用HisTag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Westernblot检测,证明融合蛋白表达正确,并且表达产物可溶,易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。     

海洋双RNA病毒(MABV) VP2和VP3基因在昆虫细胞中的高效表达

海洋双RNA病毒(Marine birnavirus, MABV) 可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABV Y-6株系A片段的cDNA，进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642 bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体，在昆虫细胞中对VP2e 和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明，VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8％和8.2％。用His Tag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Western blot检测，结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样，用His Tag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Western blot检测，证明融合蛋白表达正确，并且表达产物可溶，易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。关键词: 海洋双RNA病毒； VP2e; VP3; 杆状病毒表达系统; 表达纯化     

西方蜜蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ等位基因频率与经济性状的相关性

研究了西方蜜蜂(Apis mellifera L.)10个蜂种的苹果酸脱氢酶Ⅱ等位基因频率和蜂蜜、蜂王浆、蜂花粉、蜂蜡和蜂毒的产量,并分析了3个等位基因频率与5个经济性状的相关性。等位基因a频率与5个经济性状均呈负相关,其中与蜂蜜产量的相关系数最大,达显著水平(P<0.05);等位基因b频率除与蜂蜜产量呈正相关外,与蜂王浆、蜂花粉、蜂蜡和蜂毒的产量均呈负相关,但相关系数较小,没有达到显著水平。等位基因c频率与5个经济性状均呈正相关,而与蜂王浆产量的相关系数最高,达极显著水平(P<0.01)。因此MDHⅡ等位基因频率有可能用来作为蜜蜂生产性能的生化遗传标记。