间接ELISA检测鸭病毒性肝炎抗体的研究

本试验以氯仿去脂-滤膜过滤-浓缩层析方法纯化病毒作包被抗原，成功地建立了检测鸡抗鸭肝炎病毒(DHV)血清抗体的间接ELISA方法，经交叉试验和阻断试验表明，该方法具有很高的敏感性和特异性，应用于DHV抗体检测比较有效，为鸭抗DHV血清抗体检测以及进行DHV单克隆抗体筛选提供了依据。     

山东省白羽肉鸡中MDV、REV、CAV和ARV感染状况的病原学调查

为了解鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)、禽网状内皮增生病病毒(REV)和禽呼肠孤病毒(ARV)在山东省白羽肉用型鸡中的流行情况,试验采用地高辛标记的核酸探针-斑点杂交法对淘汰的商品肉鸡、病死商品肉鸡及淘汰肉种鸡进行了上述4种病毒病原的检测。结果表明:ARV主要以单一形式感染,在病死商品肉鸡中感染率最高(30.07%),在3种类型鸡中ARV感染率高于MDV,REV,CAV。MDV在淘汰肉种鸡中感染率(12.82%)高于其他2种鸡群,而REV,CAV,ARV感染率在病死商品肉鸡中最高。混合感染亦相当普遍,以淘汰肉种鸡最高(混合感染率达10.25%),高于任一病毒单独感染率,其次为病死商品肉鸡。     

新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立

对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。     

兔出血症病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立兔出血症病毒(RHDV)的血清学检测方法,本实验通过生物信息学分析,将RHDV衣壳蛋白VP60的3个区域VP60-1(aa2-aa208)、VP60-2(aa174-aa425)和VP60-3(aa342-aa579)分别进行原核表达,获得了大小为42 ku、47.5 ku和45.6 ku的重组蛋白。经ELISA和western blot试验分析显示3种重组蛋白均能够被RHDV阳性血清识别,但VP60-1较VP60-2和VP60-3具有更好的反应原性,因此以表达的重组蛋白VP60-1作为包被抗原建立了RHDV间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,对不同免疫期兔血清的检测结果与HI呈显著相关性。对临床样品的检测结果表明该ELISA方法比HI试验更敏感。本研究以VP60-1为包被抗原建立的ELISA方法可以用于RHDV疫苗的免疫评估。     

鸭黄病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

根据鸭黄病毒E蛋白基因序列设计了1对特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光定量RT-PCR检测鸭黄病毒的方法.根据舍鸭黄病毒目的扩增片段的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线(y=-3.39 X+43.18,r=0.973).该方法具有特异性,对鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、腺病毒、鸭瘟病毒、猪乙脑病毒的核酸都没有扩增反应.敏感性试验显示,建立的此方法最低可检出1.9个TCID50病毒核酸.该方法对5只健康雏鸭人工感染86 h后的组织器官样品(盲肠扁桃体除外)的检测结果均为阳性,与病毒分离鉴定的阳性符合率为100％.结果表明,该方法真实可靠,而且从核酸提取到报告检测结果耗时不超过3h,为鸭黄病毒病提供了一种敏感特异的定量检测方法.     

2型猪链球菌对四环素的耐药机制

采用微量稀释法测定36株2型猪链球菌对四环素的耐药性,应用PCR扩增四环素相关耐药基因tet（M）、tet（O）、tet（K）、tet（L）、tet（Q）、tet（S）、tet（T）和tet（W）,将扩增到的耐药基因克隆、测序,并进行序列分析。结果显示,36株2型猪链球菌对四环素的耐药率为100%,MIC90高于512mg/L;其中29株扩增出tet（M）基因,6株扩增出tet（O）基因,5株同时扩增到tet（M）、tet（L）基因,同时扩增到tet（M）、tet（L）基因的菌株MIC均高于512mg/L;同源性分析结果显示,扩增到的tet（M）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～100%,tet（O）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～99%。结果表明,我国大部分地区的2型猪链球菌对四环素均具有很强的耐药性,主要耐药机制是由tet（M）基因介导的核糖体保护作用。     

禽流感病毒及防治研究进展

禽流感(avlan influenza,AI)是由A型流感病毒引起的一种从呼吸系统到严重的全身败血症等多种症状的禽类烈性传染病.     

PCR检测犬传染性肝炎病毒方法的建立

在CAV-1的E3区设计一对引物,该引物可以特异扩增CAV-1的片段,用该引物进行聚合酶链反应,进行特异性和敏感性检测,并对PCR产物酶切验证,结果表时:该方法可以特异灵敏地检出CAV-1,并且检测出过程快速、方便、结果可靠,适于推广应用.