SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量

为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。     

动物源性食品中残留的检测与控制

动物性食品（肉、蛋、奶等）中危害人类健康的物质除生命有机体、病原微生物和寄生虫等，还有无生命的有害物质，如农药、兽药、有害元素、细菌或真菌毒素等。由于现代工业的高速发展，人口剧增，不合理地开发和利用资源，水土严重的流失，排放到大自然中的废气、废渣、废水增多，动物和植物生长和发育所处的环境（水、空气、土壤等）的污染越来越严重，加上人们为了防治动植物病、虫害和杂草等长期大量地使用各种药剂，致使动物体内有害物质的残留量大大增加。目前，联合国粮农组织／世界卫生组织（FAO／WHO）的食品法典委员会（CAC）…     

鸭源坦布苏病毒E蛋白的可溶性表达及免疫原性研究

用RT-PCR扩增鸭源坦布苏病毒YY5株的E蛋白基因片段,分别插入到表达载体pMBP-c、pET-GST、pET-His、pET-DsbA中,构建了一系列原核表达载体,转化人大肠杆菌E.coli Trans10或DE3(plysS)宿主菌。工程菌株经诱导后进行SDS-PAGE,结果显示MBP-E融合蛋白得到了有效表达并且以可溶性蛋白的形式存在,且能与自然感染康复的鸭源多抗和鼠源单抗反应。以MBP-E免疫小鼠制备的高免血清,在体外可以中和DDTMUV,中和抗体效价达到1:46。重组蛋白MBP-E具有良好的免疫反应原性、免疫原性和体外免疫保护特性,这为进一步研制DTMUV重组亚单位疫苗奠定基础。     

兽医卫生检疫学学科发展现状及趋势

近年来,随着科学技术的发展,新技术、新方法的出现以及大批高敏感、高特异的尖端检测仪器在兽医卫生检疫科研和生产中的投入使用,我国口岸及国内动物源性产品市场兽医卫生检疫能力及业务水平不断提升,有力保障了我国人民群众身体健康及畜牧业的健康发展,极大维护了社会稳定和我国的国际声誉.     

MTT比色法在传染性法氏囊病病毒分离中的应用

应用MTT比色法检测了病料中传染性法氏囊病病毒(IBDV)在细胞培养物中的增殖情况，并对病料中加入法氏囊提取液、鸡胚浸出液2种成分对病毒增殖的影响作了比较。结果表明，MTT比色法简便、快速、可靠，能很好地反映病毒在细胞培养物中的增殖情况。     

世界禽病研究进展

收稿日期：２００１－１２－０６疾病是限制世界范围内家禽生产效益的主要因素。尽管分子生物学领域的基础性研究不断开发出新疫苗，但由于新变异株的出现以及多种致病因子混合感染，仍制约着集约化生产。本文阐述了重大疾病对商业化蛋鸡群和肉仔鸡生产效益的潜在影响。１鸡痘目前尚无法解释免疫过禽痘的鸡群仍旧发病。澳大利亚、欧洲和美国的科学家们已从引发禽痘的两株野毒和商业化禽痘疫苗的基因组中检测到网状内皮组织增殖病病毒（REV）的前病毒基因组。抗体反应可作为一种衡量手段，用以评价现有疫苗在抵抗致病性增强的禽痘病毒时的…     

鼻气管鸟杆菌病的研究进展

鼻气管鸟杆菌(ORT)病是近年来新发现的一种感染家禽和野鸟的呼吸道细菌病,主要表现为鸡和火鸡生长迟缓,单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、胸膜炎、气囊炎、鸡群死亡率升高,孵化率下降,采食量减少,肉禽增重减少.有些病例还伴有产蛋率下降,蛋形变小,蛋壳质量降低等[14],给养禽业造成严重的经济损失,目前该病的流行呈上升趋势.     

鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用

利用PCR方法从鸭坦布苏病毒山东分离株(BZ株)扩增整个E基因,全长1 503 bp,克隆到pMD18-T载体中,然后将双酶切目的片段亚克隆入pET-28a(+)载体,构建出重组表达质粒PET28a-E。将PET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可表达出分子量约54.8 kD的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E蛋白有很好的反应原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,鸭坦布苏病毒血清为一抗,HRP标记的羊抗鸭IgG为二抗建立间接ELISA方法。采用该方法对80份送检鸭血清进行检测,并与中和试验进行比较,结果显示,两者的符合率为95.0%,表明该方法具有较好的应用前景。     

猪细小病毒病的概述

猪细小病毒病是由猪细小病毒（Porcine Parvovirus．PPV）感染引起以母猪繁殖障碍为主要特征的病毒性传染病,其特征是母猪孕前期感染该病毒后,经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭,引起母猪流产、死胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等,同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻。     

应用HiTrap protein-A层析柱纯化新城疫病毒单克隆抗体

两株针对新城疫病毒HN基因的单抗1E5和C3一B7,均具有血凝抑制性（HI）,免疫球蛋白亚类分别为IgG2a和IgG1。用HiTrap protein—A层析柱对这两株单抗进行了亲和纯化。收集不同洗脱阶段的液体进行蛋白含量测定,结果表明,5mL的洗脱液洗脱后,第1～2mL洗脱液中单抗含量最高。用SDS—PAGE电泳对纯化产物进行纯度鉴定,结果表明单抗纯化后只有重链和轻链两条带。